酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化及活性鉴定

目的：从牛脑中分离纯化酸性成纤维细胞生长因子（aFGF)并鉴定生物活性，方法：根据DenisGOSPODAROW-ICZ的方法，新鲜牛脑匀浆，三步硫酸铵盐析。最后沉淀物溶解透析后予离子交换层析及琼脂糖胶亲和层析，促3T3细胞DNA合成率鉴定生物活性。结果：用1.0mol/LNaCl的缓冲液洗脱得到分子量为13600的多肽，得率为610μg/kg牛脑，氨基酸组成分析与已知的aFGF相同，促3T3细胞DNA合成的最低浓度为0.5ng/ml，最大效应浓度50ng/ml，ED50值为8ng/ml。结论：aFGF具有强烈的促细胞增殖作用。     

单抗亲和层析生产高比活HCG方法的建立

本实验以健康孕妇尿为原料，利用苯甲酸沉淀，有机溶剂沉积，离子交换层析和凝胶过滤等方法得到ＨＣＧ纯品（１４０００ＩＵ／ｍｇ）。用该产品免疫小鼠。将产生的免疫鼠脾脏与ＮＳ－１骨髓瘤细胞用半固相法要交细胞融合，筛选纯化出ＨＣＧ单抗克隆抗体（Ｋａ＝７．５×１０＾８ｍ＾－＾１）。将ＨＣＧ单抗与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成免疫吸附亲和层析柱，可将ＨＣＧ粗品（２０００ＩＵ／ｍｇ）一次纯化得到ＨＣＧ纯品（１５０     

人尿胰蛋白酶抑制剂与激肽释放酶联产及纯化的研究

本文探讨了采用Polyerde-3吸附剂,从男性尿中提取HUTI-HUKN粗品,再依次经抑肽酶-琼脂糖4B亲和层析、胰蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,将HUTI和HUKN分离并纯化。每20升尿液得精品HUTI50mg,比活1,250u/mg;HUKN3mg,比活666u/mg。活性回收率分别为41％和50％。     

LPS亲和层析柱吸附抗LPS抗体的实验研究

目的:制作LPS亲和层析柱(affinity chromatography columu)并观察它对急性运动轴索型神经病(acute motoraxonal neuropathy,AMAN)患者血浆中的抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抗体的吸附。方法:以致AMAN空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,Cj)Penner 0:19型的LPS作为配体与CNBr-activated Sepharose 4 Fast Flow亲和介质偶联制作亲和层析柱;利用间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)检测过柱前后样本以及抗体经洗脱后,洗脱液中所含抗LPS抗体滴度。结果:阳性的抗LPS抗体血浆流过LPS亲和层析柱后,12/13管流出液中抗LPS抗体变为阴性;抗体经洗脱后,在洗脱液中检出高滴度的抗LPS抗体。结论:LPS亲合层析柱是一种去除AMAN病人血浆中抗LPS抗体较为理想的方法。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶，为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶，测定其比活力，并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用，采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分，比活力为89.08 U·mg^-1，比纯化前提高了7.37倍，该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基，采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分，且比活力相对提高。     

兔乳酸脱氢酶C4的分离纯化及动力学研究

建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。采用Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｅｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ交联制成Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｑｒｏｓｅ ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ４５０离子交换层析分离兔ＬＤＨ－Ｃ４，以作图法测定该酶动力学数据。     

生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段

目的：用生物工程技术制备人源性抗-HBsFab。方法：将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBsFab基因克隆入pBAD/gⅢA载体，进而转化Tpo10大肠杆菌，对重组质粒菌发酵表达后，利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白。对所得包涵体依次变性，溶解，纯化后，利用透析进行复性，用Western blot检测Fab蛋白的特异性，Dot blot测定其生物学活性。结果：经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白，有较好的生物学活性，并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后，也可得到少量有活性的蛋白，但比例很小。结论；用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBsFab片段，发酵培养后，经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白。为人源抗-HBsFab片段的大量制备提供了有效手段。     

RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具.     

老化红细胞的分离和鉴定

根据本实验室的工作,老化红细胞表面可结合自身IgG的特点,建立了一种新的分离年轻及老化红细胞的方法。由于Protein A可与IgG有特异结合,用活化的Sepharose 6MB结合Protein A制成亲和层析柱,以此分离老化红细胞。同时对分离的红细胞作了谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氨酶、6-磷酸脱氢酶的活性和变形性及吞噬情况的比较。