改良消蚀法制备脱细胞真皮基质微粒及其生物相容性评价

目的:利用改良消蚀法制备一种新型脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)微粒,并对其相容性加以评价,为组织工程微粒皮肤的制备奠定研究基础。方法:应用机械法切除猪真皮乳头层,结合消蚀法和冻融法除去网状真皮中的所有细胞制备成ADM,将ADM搅碎成颗粒状,对其做细胞毒性实验和皮下埋藏实验检验其相容性。结果:该方法制备的ADM微粒韧性好,细胞去除完全,胶原三维稍松散但结构完整,无基底膜和乳头层。细胞毒性实验显示其基本无毒性,成纤维细胞在ADM微粒上增殖良好,皮下埋藏试验未见明显排异反应,ADM微粒能诱导血管和成纤维细胞长入。结论:用改良消蚀法制备的ADM微粒抗原性低、相容性好,可以作为组织工程微粒皮肤的支架和填充材料。     

K562／ADM耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察

我们建立的K562/ADM耐药细胞株,在ADM浓度为2.4μg/m1(4.46μM)中已稳定培养3.5个月,传了30—35代,K562/ADM亦具有多药耐受件(Multidrug Resistance,MDR)的特点,对ADM、VCR、AT—1258和DDP的耐受性分别为K562的114.7、94.0、13.3和7.4倍,但对5—FU不产生交叉耐药。K562和K562/ADM的倍增时间分别为19.2h和52.8h,集落生成率分别为37.5％和11.1％,K562染色体数为34—68,中位数为56;K562/MDM染色体数为32—90,中位数为50,K562/ADM可做为耐药机理和克服耐药措施研究的极好模型。     

白血病MDR细胞系CEM／ADM超微结构改变的定量研究

对人类淋巴细胞性白血病ＭＤＲ细胞系ＣＥＭ／ＡＤＭ及其亲代药敏细胞系ＣＥＭ进行了超微结构的体视学定量比较。结果表明，ＣＥＭ／ＡＤＭ细胞分裂相较多见、核平均体积增大、核畸形严重、异染色质分布更散在、核仁异型性及边集较多见、多数细胞器不发达，说明ＣＥＭ／ＡＤＭ恶性程度更高，ＣＥＭ／ＡＤＭ线粒体平均体积增大与ＭＤＲ主要机制──Ｐ－糖蛋白过度表达而致能量需求增加相关。     

榄香烯吗素与阿霉素联合应用对CEM／ADM细胞生长的影响

应用台盼蓝排染法,Ｗｉｒｇｈｔ－Ｇｉｅｍｓａ混合染色法,Ｈｏｅｃｈｓｔ３３４２荧光染色法及碘化丙啶（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ,ＰＩ）与Ｈｏｅｃｈｓｔ－３３４２共染计数坏死细胞的ＰＩ阳性率测定法,研究β－榄香烯吗素（ＰＩＣ－ＢＥ）及其与阿霉素（ＡＤＭ）联合应用对ＣＥＭ．ＡＤＭ细胞生长的影响。结果显示：①ＰＩＣ－ＢＥ能够显著抑制ＣＥＭ．ＡＤＭ细胞的生长,并诱导该细胞凋亡,其作用强度在一定范围内     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

维生素E琥珀酸酯联合阿霉素对乳腺癌细胞株Bcap-37的生长抑制作用

目的检测维生素E琥珀酸酯（VES）联合阿霉素（ADM）对乳腺癌细胞生长抑制作用。方法以VES联合ADM作用于人乳腺癌Bcap-37细胞24h和36h，VES浓度为5、10、20mg／L，ADM的浓度分别为0．25、1、2mg／L。采用MTT法测定对细胞增殖的抑制作用，以流式细胞仪分析药物联合作用前后乳腺癌细胞凋亡率的变化和对细胞表面Fas表达的影响。结果VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制和凋亡诱导作用。流式细胞仪分析细胞周期，Bcap-37细胞的自然凋亡率为0．7％，5mg／L和20mg／LVES作用24h后凋亡率分别为10．1％和19．2％，lmg／L和2mg／LADM作用24h后的凋亡率分别为16．0％和23．3％。5mg／LVES联合1mg／LADM以及20mg／LVES联合2mg／LADM作用24h后的凋亡率分别升高至31．1％和40．7％。VES联合ADM作用24h后Bcap-37细胞表面Fas表达增强。结论VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制作用，其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关。     

去磷酸化RB蛋白表达对阿霉素诱导MCF-7/S细胞凋亡的影响

目的检测经阿霉素(ADR)处理的人乳腺癌MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)及去磷酸化RB蛋白表达的变化,以探讨ADR诱导细胞凋亡的可能机理。方法将体外培养的MCF-7/S细胞分为实验组(以不同浓度ADR处理细胞)及对照组(以等体积的生理盐水处理细胞);应用MTT比色法检测ADR对MCF-7/S细胞的抑制率(IR);应用流式细胞术检测实验组和对照组细胞的AR;采用S-P免疫组化染色法检测ADR作用后去磷酸化RB蛋白表达的变化。结果ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性,IC50为0.128mg/L;0.25、2、5μg/mlADR处理的MCF-7/S细胞的AR分别为0.171、0.184、0.259,而对照组MCF-7/S细胞的AR为0.045,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5μg/mlADR实验组MCF-7/S细胞的去磷酸化RB蛋白的表达量为986.8±207.4,而对照组为131.7±31.9,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5μg/mlADR实验组MCF-7/S细胞的AR与其去磷酸化RB蛋白的表达量呈正相关(γ=0.998,P=0.037)。结论ADR能抑制MCF-7/S细胞增殖并诱导其凋亡,其机理可能与去磷酸化RB蛋白表达水平上调有关。     

艾迪注射液对K562／ADM细胞体外生长和增殖周期的实验研究

目的：研究复方中药艾迪注射液对白血病耐药细胞株K562／ADM细胞体外生长和增殖周期的影响。方法：采用细胞体外培养技术，台盼兰染色计数法观察活细胞数量变化并绘制细胞生长曲线，细胞集落形成实验，MTT法检测生长抑制率，光学显微镜、透射电镜观察细胞形态变化．流式细胞仪测定细胞增殖周期。结果：艾迪注射液对KS62／ADM细胞生长和增殖活力均有明显的抑制作用，作用随艾迪注射液剂量和作用时间的增加而增加，呈量效、时效关系，与对照组比较，P〈0．05。流式细胞分析显示它能抑制细胞周期，减少G1期的比例，增加S期和G2期的比例，并能明显诱导细胞凋亡，尤以中、高剂量组和联合用药组为明显，在光镜、透射电镜下观察到较为典型的细胞凋亡形态。结论：艾迪注射液有明显的抗肿瘤活性，能抑制K562／ADM细胞的生长和增殖，调控细胞增殖周期并诱导凋亡。     

The effect of acellular dermal matrix on drain secretions after immediate prosthetic breast reconstruction

Abstract

In recent years the acellular dermal matrix (ADM) has gained popularity in prosthetic breast reconstruction. These procedures involve placement of a closed suction drain in the reconstructed breast. Although it is now widely accepted that ADM has an overall positive effect on the outcome of breast reconstruction, data regarding its effect on postoperative drain secretions is lacking. This study was designed to quantitatively evaluate the influence of ADM on postoperative drain secretions in the setting of immediate prosthetic breast reconstruction (IPBR). This is a prospective, comparative controlled study. Two groups of 16 patients each underwent skin sparing mastectomies (SSM) and IPBR with or without ADM. Closed suction drains were left in all the reconstructed breasts and daily secretion volumes were recorded and compared. Postoperative complications were also noted. Patients in the ADM group showed higher daily and overall secretion volumes compared with patients in the control group (p = 0.014) and the time for removal of the drains was higher by an average of 5 days (13 compared with 8 days, respectively; p = 0.004). There was no correlation between ADM and infection. This study provides the first objective evidence that ADM contributes to elevated and prolonged drain secretions when used for IPBR. This might affect possible prosthesis-related complications (e.g., rotation and malposition, capsular contraction, seroma formation, and infection). This study also noted erythema of the post-mastectomy skin flaps in selected patients, which may be attributable to a local inflammatory reaction to the ADM rather than infection.