聚苯乙烯核-聚(丙烯酰胺-丙烯酸)壳荧光素微球制备方法的研究

目的:为制备性能良好的核壳结构荧光微球,探讨了加料方式、引发剂选择、交联剂使用、pH调节、浓度配比和溶胀处理等反应条件对形成壳结构的效果以及形态学上的影响。方法:通过以乳液聚合得到的荧光素微球为核,以丙烯酰胺、丙烯酸为壳结构的聚合单体,制得了聚苯乙烯核-聚(丙烯酰胺-丙烯酸)壳荧光素微球。结果:荧光显微镜显示:粒径均一,分布范围7~8μm。红外吸收光谱证实了聚(丙烯酰胺-丙烯酸)壳结构以及表面酰胺基的存在。该种子聚合反应的最佳条件为:在不使用交联剂的前提下以偶氮二异丁腈为引发剂,经过40 h的乙醇溶胀处理,70℃反应3 h,反应过程pH值在6~7之间。该荧光微球的平均载药量和包封率分别为25.14%和90.21%,其荧光释放率40 h后稳定在30%左右。结论:用此法制备的微球具有良好的荧光性能和明显的核壳结构,分散性和稳定性良好,其载药量和包封率也相对稳定,并具有良好的缓释性能。     

一种基于荧光图像的体外抗肿瘤药物快速筛选方法

目的:建立一种基于荧光成像的抗肿瘤药物体外快速筛选系统.方法:①采用二乙酸荧光素(FDA)标记测定活细胞数法,评价26个乌药组分对的体外抗肿瘤活性,并对本方法的线性范围和精密度进行了考察;②在活性筛选结果的指导下,应用LC/MS对样品进行分析,初步推断药效活性物质.结果:①该方法在细胞密度为0～ 10 000/孔的范围内荧光强度与细胞个数线性相关(r2 =0.9858),板内的精密度为9.41％;②在26个乌药组分中,筛选得到两个抗肿瘤活性较强的组分C13和C15,抑制率均达到90％以上.结论:本方法快速、稳定、简便、线性范围宽,可用于从复杂中药组分中快速筛选抗肿瘤活性物质.此外,根据LC/MS分析结果并结合文献报道,推断乌药中具有抗肿瘤活性的化合物为异波尔定碱.     

生物发光成像的特点及应用

生物发光成像(BLI)是通过荧光素酶基因标记细胞或DNA,在ATP及氧气存在条件下,催化荧光素的氧化反应而发光,从而能够直接监控活体内的细胞活动和基因行为。该文通过比较BLI与MRI,PET、放射成像的异同,以及BLI在肿瘤、干细胞和免疫细胞运输、细胞凋亡等方面的应用,为更好地推广BLI的应用提供依据。     

眼底血管造影剂荧光素钠的研制

研究了荧光素合成过程中浓硫酸的用量及其粗制品提纯方法的改良,并对其纯品进行了动物及临床试验。结果表明,浓硫酸的最佳用量为6ml,反应速度可加快1/3;用氢氧化钠代替乙醇溶解,成本为乙醇的1/10;用醋酸代替乙醇和盐酸使荧光素析出,可使其产率提高到85%;临床试验69例,荧光显影清晰,荧光持续时间为15～60min,无不良反应。提示该产品优于目前国内同类产品。     

木香肝毒性组分筛查与GC-MS分析研究

目的:筛查中药材木香中潜在的肝毒性组分。方法:对木香25个化学组分,采用二乙酸荧光素荧光标记法在HepG2细胞模型上筛查肝毒性组分,并使用气相色谱-质谱联用仪分析其化学组成。结果:从木香中筛查出10个肝毒性组分,经气相色谱-质谱联用定性分析,C09组分的主要成分为去氢木香内酯、santamarine(或magnolialide)和reynosin,而C11组分的主要成分是α-木香醇和榄香醇。结论:木香所含的去氢木香内酯、santamarine(或magnolialide)、reynosin、α-木香醇和榄香醇可能具有肝毒性。     

采用Calcein-AM评价白血病细胞膜P-gp泵功能及其逆转剂合理应用的研究

目的通过荧光染料Calcein—AM（C—AM）在K562及其耐长春新碱（VCR）的细胞系K562／VCR细胞中的变化以及异搏定（VER）、环孢霉素A（CSA）对C—AM在K562和K562／VCR细胞中摄取与排出的影响,研究C—AM在评价P—gP泵功能的作用,评价两种逆转剂的逆转作用,为临床合理应用逆转剂提供实验依据。方法以K562及K562／VCR为实验对象,以流式细胞术测定两种细胞系内不同时间点（0、30、60、90和120min）的C—AM荧光强度来反映P—gP泵功能以及CSA、VER对其的影响。结果C—AM在K562和K562／VCR细胞中的变化以24h内最为明显,24h后K562细胞和K562／VCR细胞内C—AM荧光强度分别下降至14．57％和15．64％。其在K562细胞内各时间点的平均荧光强度（MFI）明显高于K562／VCR细胞（各时间点差异P值均〈0．05）;CSA、VER和CSA＋VER对K562细胞内C．AM的摄取和外排无明显影响,但各组逆转剂、C—AM与细胞共孵育120min后,对照组、CSA、VER和CSA＋VER组的K562／VCR细胞MFl分别为3251±106．7、4014±219．0、3879±116．1和4158±302．6,与对照组相比,后三组细胞对CAM的摄取明显增加（P均〈0．05）。当外排120min后,对照组、CSA、VER和CSA＋VER组的K562／VCR细胞MFl分别为1622±191．0、2237±155．2、1932±233．0和2231±146．7,与对照组相比,后三组的CAM残余量也明显增加（P均〈0．05）,表明CSA、VER和CSA＋VER能增加K562／VCR细胞对C—AM的摄取和减少细胞内C—AM的外排。结论P—gP的表达能减少K562／VCR细胞对C．AM的摄取和增加其对C—AM外排,逆转剂CSA与VER的联合应用对K562／VCR细胞摄取和外排C—AM的影响并不比单独使用CSA或VER明显,通过使用C—AM和流式细胞术,可以比较迅速、简便评价白血病细胞P—gP的泵功能以及逆转剂的逆转作用。     

EB病毒对体外培养的人鼻咽上皮细胞感染途经的研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)标记EB病毒(EBV)感染体外培养的人胚鼻咽上皮和鼻咽癌细胞株(CNE-1和CNE-2),对照为EBV受体阳性的Raji和Ramos细胞。在荧光显微镜下发现FITC-EBV 可与Raji和Ramos细胞结合,如事先经未标记的EBV处理则与 FITC-EBV 结合的阳性细胞数明显下降。贴壁生长的鼻咽上皮细胞不能与FITC-EBV 结合,而刮落的鼻咽上皮细胞则能与FITC-EBV 结合,结果提示鼻咽上皮细胞质膜微细损伤可能成为EBV 直接进入细胞的门户,受损的鼻咽癌细胞更易为EBV 侵入。     

抗P-选择素单抗的荧光素标记及其临床应用

目的:探讨各种血栓形成相关性疾病患者的P-选择素的表达变化及其临床意义。方法:用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗P-选择素单抗SZ-51-IgG和流式细胞术(FCM)分析了42例糖尿病患者、33例高血脂患者、23例脑梗塞患者和20例正常人的血小板膜P-选择素表达,并与间接FCM和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)作比较。结果:FCM测得的血小板膜上P-选择素表达阳性率,在糖尿病组为23.92%±15.83%,高血脂组为18.34%±9.46%,脑梗塞组为19.32%±10.38%,均显著高于正常对照3.38%±1.11%(P值均小于0.01)。间接FCM测定血小板膜P-选择素表达在糖尿病和脑梗塞患者中均显著增高,ELISA法测得的血浆中P-选择素在糖尿病、高血脂和脑梗塞患者也显著高于正常对照。结论:FITC标记的SZ-51-IgG可用于FCM,可成为测定血小板活化的一个新的敏感的方法。     

术中判断肠活力三种方法的比较

术中准确地评价肠活力是外科医师面临的一个普遍问题。应用兔肠缺血模型，比较静脉荧光素、表面血氧测定和激光多普勒三种技术判断肠活力的精确性。结果：诊断效率静脉荧光素法为７８％，表面血氧测定为６８％，激光多普勒为９５％。后者精确度显著优于前二者，且操作简便、迅速，具有临床应用前景。     

抗P-选择素单抗的荧光素标记及其临床应用

目的 :探讨各种血栓形成相关性疾病患者的P -选择素的表达变化及其临床意义。方法 :用异硫氰酸荧光素 (FITC)标记抗P -选择素单抗SZ - 5 1-IgG和流式细胞术 (FCM)分析了 42例糖尿病患者、33例高血脂患者、2 3例脑梗塞患者和 2 0例正常人的血小板膜P -选择素表达 ,并与间接FCM和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)作比较。结果 :FCM测得的血小板膜上P -选择素表达阳性率 ,在糖尿病组为 2 3 92 %± 15 83% ,高血脂组为 18 34 %± 9 46 % ,脑梗塞组为 19 32 %± 10 38% ,均显著高于正常对照 3 38%± 1 11% (P值均小于 0 0 1)。间接FCM测定血小板膜P -选择素表达在糖尿病和脑梗塞患者中均显著增高 ,ELISA法测得的血浆中P -选择素在糖尿病、高血脂和脑梗塞患者也显著高于正常对照。结论 :FITC标记的SZ - 5 1-IgG可用于FCM ,可成为测定血小板活化的一个新的敏感的方法