再灌注早期渐增灌注压力对缺血再灌注心肌保护作用的实验研究

目的 探讨心肌缺血后再灌注时渐增灌注压力是否具有与标准心肌缺血后处理相同的心肌保护用以及其机制.方法 观察持续缓慢升高灌注压力对缺血再灌注后心肌的冠脉流出液中cTnI含量及冠脉流量、心肌细胞超微结构变化的影响以及P-Akt的表达.结果 持续缓慢升压组能有效促进缺血再灌注心脏的冠脉流量恢复,冠脉流出液中cTnI含量减少,P-Akt高表达,同时电镜观察显示细胞超微损伤亦减轻.结论 持续缓慢升高灌注压力对离体缺血再灌注心脏具有保护作用,PI3K/Akt/GSK-3β通路可能是其心肌保护作用的信号传导通路之一.     

缺血后适应对糖尿病大鼠再灌注心肌的保护作用及其与P-Akt的关系

目的 探讨缺血后适应对糖尿病大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制.方法 2周龄健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重250～300 g,随机分为6组:空白对照组(N组);缺血再灌注组(IR组);缺血后适应组(Post组);糖尿病大鼠后适应组(Dpost组);糖尿病大鼠缺血再灌注组(DIR组);糖尿病大鼠空白组(DN组).将链脲酶素(STZ,美围Sigma公司)按65 mg/kg经大鼠腹腔注射,48 h后断尾法连续两次测血糖≥16.65 mmol/L,并出现多饮、多食、多尿、体重减轻,脱毛等表现确定糖尿病模型成功.糖尿病模型制作成功后建立离体心脏Langendorff灌注模型,观测心脏冠状动脉灌流量、心肌梗死范围,免疫印迹(western blot)对P-Akt测定、电镜下观察心肌和线粒体改变.结果 糖尿病大鼠血糖浓度平均为(23.15±2.16)mmol/L,非糖尿病大鼠为(4.16±0.31)mmol/L.两组大鼠血糖浓度差异有统计学意义(P<0.01).缺血后适应组(Post组、DPost组)较缺血再灌注组(IR组、DIR组)冠状动脉流量(ml/min)明显增加(6.5±1.2、5.6±1.0对3.4±1.0、2.0±1.3),心肌梗死范围(%)明显减少(25.2±2.1、34.2±3.6对47.5±3.5、65.2±4.5),P-Akt的表达明显增强,心肌纤维和线粒体的完整程度明显较好.结论 缺血后适应在糖尿病大鼠离体心脏具有显著的保护作用,这一作用可能与Akt激活有关.     

P-GSK3β、P-Akt在卵巢癌中的表达及与卵巢癌耐药关系的研究

目的：研究磷酸化糖原合酶激酶-3β（P-GSK3β）和磷酸化Akt（P-Akt）蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系。方法：应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇（PTX）、表阿霉素（EADM）、顺铂（CDDP）和卡铂（CBP）4种临床常用化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学二步法检测10例卵巢上皮良性肿瘤、10例卵巢上皮交界性肿瘤及70例卵巢癌的石蜡包埋组织中P-GSK3β和P-Akt的表达,并分析它们与临床病理因素的关系。结果：65例卵巢癌标本进行体外药敏试验,25例失败,可评价标本为40例。卵巢癌组织中P-GSK3β蛋白的阳性率为57.50%（23/40）,P-Akt蛋白的阳性率为65%（26/40）,二者呈正相关（r=0.535,P〈0.05）。P-GSK3β蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDP、PTX两种药物的平均抑制率差异均显著（t=2.573和t=2.174;P=0.014和P=0.036）。P-Akt蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDP、CBP两种药物的平均抑制率差异均显著（z=-2.201和z=-2.298;P〈0.05和P〈0.05）。70例卵巢癌组织中P-GSK3β、P-Akt的阳性表达率分别为60%（42/70）、67.14%（47/70）,二者呈正相关（r=0.546,P〈0.05）;P-GSK3β和P-Akt蛋白在卵巢癌组织组中的表达水平均显著高于卵巢上皮交界性、良性肿瘤,差异有统计学意义,P〈0.05,P-GSK3β蛋白的表达与卵巢癌的分化程度及临床分期密切相关,P〈0.05,而与卵巢癌的组织学分型无显著相关性。P-Akt与卵巢癌的分化程度密切相关,P〈0.05,而与卵巢癌的组织学分型及临床分期无显著相关性。结论：P-GSK3β和P-Akt的过表达在卵巢癌的发展中具有重要的作用,卵巢癌耐药的产生可能与P-Akt结合GSK-3β使其失活有关。     

氯化锂对大鼠局灶脑缺血再灌后磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)表达的影响

蛋白激酶B(Akt)激活是多种生长因子发挥促细胞生存作用的重要前提[1]。很多体内外实验都相继证明,长期氯化锂预处理后,可通过增加磷脂酰肌醇/蛋白激酶B(PI3-kinase/Akt)信号通路来激活Akt-1,此通路与细胞的存活增殖关系密切[2,3,4]。目前大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarte     

Sevoflurane postconditioning attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury via protein kinase B/nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 pathway activation

Oxidative damage plays a critical role in many diseases of the central nervous system. This study was conducted to determine the molecular mechanisms involved in the putative anti-oxidative effects of sevoflurane against experimental stroke. Focal cerebral ischemia was performed via 1 h of middle cerebral artery occlusion followed by reperfusion. At the onset of reperfusion, rats were subjected to postconditioning with sevoflurane or without sevoflurane for 1 h. Neurological deficit score was assessed at different time points after reperfusion. Cerebral infarct volume, oxidative stress level and the binding activity of Nrf2 to antioxidant response element were assessed, meanwhile the expression of nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), quinine oxidoreductase 1 (NQO1), protein kinase B (Akt) and phosphor-Akt was examined by Western blot at 72 h after reperfusion. Sevoflurane postconditioning administration significantly reduced neurological deficit score, infarct volume and oxidative stress levels, while increased the expression of phosphorylation Akt, NQO1, Nrf2 and the binding activity of Nrf2 to ARE in middle cerebral artery occlusion rats. These neuroprotective effects were all suppressed by LY294002, a selective PI3K blocker. Taken together, these findings provided evidence that sevoflurane postconditioning protects brain against ischemic/reperfusion injury, and this neuroprotective effect involves the Akt/Nrf2 pathway.     

IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、P-Akt和survivin在结肠癌组织中表达的意义及其相关性

目的 观察IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、P-Akt和survivin在结肠癌中的表达,探讨其生物学意义及其相关性.方法 应用免疫组化SP 法检测IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、P-Akt和survivin在30例正常结肠黏膜组织、70例结肠癌组织中的表达,并分析它们与肿瘤分化程度、Dukes分期、肿瘤深度、转移之间的关系.结果 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、P-Akt和survivin在结肠癌组织高表达,与正常结肠黏膜组相比差异有显著性(P＜0.05);IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR表达阳性率与肿瘤的分化程度、Dukes分期、肿瘤深度、转移有关(P＜0.005);P-Akt表达阳性率与肿瘤的分化程度、Dukes分期、转移有关(P＜0.05),但与肿瘤深度无关(P>0.05);survivin表达阳性率与Dukes分期、转移有关(P＜0.05),与肿瘤深度、肿瘤的分化程度无关(P>0.05);IGF-Ⅰ蛋白在结肠癌中表达与IGF-ⅠR、P-Akt和survivin呈正相关(分别rs =0.382,P＜0.005;rs=0.413,P＜0.01;rs=0.452,P＜0.05);P-Akt和survivin蛋白表达呈正相关(rs=0.476,P＜0.05).结论 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、P-Akt和survivin基因蛋白的高表达能促进结肠癌的生长与发展,对判断结肠癌预后及转移有重要参考价值.另外在结肠癌组织中IGF-Ⅰ 与IGF-ⅠR、P-Akt、survivin 的表达密切相关,说明IGF-Ⅰ/IGF-ⅠR通过PI-3K/Akt通路诱导survivin的表达在结肠癌发生发展中起重要的协调作用.     

The heart is better protected against myocardial infarction in the fed state compared to the fasted state

Objective

A variety of calorie restriction diets and fasting regimens are popular among overweight people. However, starvation could result in unexpected cardiovascular effects. Therefore, it is necessary to evaluate the short-term effects of diets on cardiovascular function, energy metabolism and potential risk of heart damage in case of myocardial infarction. The objective of the present study was to investigate whether the increased level of glucose oxidation or reduction of fatty acid (FA) load in the fed state provides the basis for protection against myocardial infarction in an experimental rat model of ischemia–reperfusion.

Materials/Methods

We tested the effects of the availability of energy substrates and their metabolites on the heart functionality and energy metabolism under normoxic and ischemia–reperfusion conditions.

Results

In a fasted state, the heart draws energy exclusively from FAs, whereas in a fed state, higher concentration of circulating insulin ensures a partial switch to glucose oxidation, while the load of FA on heart and mitochondria is reduced. Herein, we demonstrate that ischemic damage in hearts isolated from Wistar rats and diabetic Goto–Kakizaki rats is significantly lower in the fed state compared to the fasted state.

Conclusions

Present findings indicate that postprandial or fed-state physiology, which is characterised by insulin-activated glucose and lactate utilisation, is protective against myocardial infarction. Energy metabolism pattern in the heart is determined by insulin signalling and the availability of FAs. Overall, our study suggests that even overnight fasting could provoke and aggravate cardiovascular events and high-risk cardiovascular patients should avoid prolonged fasting periods.     

宫颈癌组织中P-Akt的表达及其与HPV感染的关系探析

目的:研究探讨宫颈组织中P-Akt的表达情况,并分析其与HPV感染之间的关系。方法:选取龙泉市人民医院和浙大妇产医院接受治疗并经病理诊断确诊为宫颈癌的患者35例作为研究对象,确诊后送往上级医院行手术治疗。手术前均行HPV-DNA检测,手术后上级医院采用免疫组化方法对其病变组织中的P-Akt表达情况进行测定,选择宫颈上皮内瘤变患者和慢性宫颈炎患者各35例作为对照,分别比较三组患者的P-Akt表达阳性率。并对宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者中HPV感染阳性与P-Akt表达阳性之间的关系进行比较。结果:宫颈癌患者、宫颈上皮内瘤变患者、慢性宫颈炎患者的P-Akt阳性表达率分别为97.1%、80.0%和20.0%,比较均有统计学差异(P0.05)。宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者中,HPV感染阳性患者的P-Akt阳性表达率(95.2%)也显著高于HPV感染阴性的患者(28.6%),比较有统计学差异(P0.05)。结论:P-Akt阳性表达与宫颈病变的程度、HPV感染之间都存在显著相关性。     

Pi3-k/Akt信号通路在狼疮样小鼠肾组织中的激活及霉酚酸酯的调控作用

目的:研究Pi3-k/Akt信号通路在狼疮样小鼠肾组织中的激活及霉酚酸酯(MMF)的调控作用。方法:建立cGVHD狼疮样小鼠模型。随机分为3组,每组6只小鼠,将模型动物分两组即模型组和MMF治疗组,另设对照组。检测各组血肌酐、尿素氮及尿蛋白变化,观察肾组织纤维化程度,检测各组小鼠肾组织中P-Akt及Akt蛋白表达情况。结果:12周模型组的小鼠肾小球系膜节段、弥漫性增生,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白较对照组均明显增加。Western blotting结果证实模型组肾组织中Akt及P-Akt蛋白表达与正常组相比均明显增加(P<0.01),而MMF治疗组与模型组相比其Akt及P-Akt的蛋白表达均降低,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白水平也受到抑制。结论:Pi3-k/Akt信号通路参与了狼疮肾炎的发病,MMF抑制Akt的磷酸化可能是其在狼疮肾炎中发挥治疗作用的机制之一。     

缺血后适应对糖尿病大鼠再灌注心肌的保护作用及其与P-Akt的关系

目的:探讨缺血后适应对糖尿病大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制。方法:2W龄健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体质量250～300g,随机分为6组:1.空白对照组(N组);2.缺血再灌注组(IR组);3.缺血后适应组(Post组);4.糖尿病大鼠后适应组(Dpost组);5.糖尿病大鼠缺血再灌注组(DIR组);6.糖尿病大鼠空白组(DN组)。观测心脏冠状动脉灌流量、心肌梗死范围、免疫印迹(western blot)对P-Akt的测定、电镜下观察心肌和线粒体的改变。结果:缺血后适应组(Post组DPost组)较缺血再灌注组(IR组DIR组)冠状动脉流量明显增加,心肌梗死范围明显减少,P-Akt的表达明显增强,心肌纤维和线粒体的完整程度明显较好。结论:缺血后处理在糖尿病大鼠离体心脏具有显著的保护作用,这一作用可能与Akt激活有关。