血清游离脂肪酸酶法测定的方法学评价及生物学变异研究

目的评价血清游离脂肪酸(FFA)酶学比色法(简称酶法)的精密度和正确度,并且研究血清FFA个体间和个体内生物学变异。方法采用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP5-A2和EP15-A文件评价酶法测定血清FFA的精密度和正确度。生物学变异的研究对象为13名健康志愿者,在6周时间内每2周测定1次血清FFA浓度,利用SAS9.1软件中MIXED分析过程计算个体间生物学变异和个体内生物学变异。结果精密度实验样品的血清FFA浓度总均数为0.796 mmol/L,批内、批间、日间和室内不精密度分别为2.15%、3.44%、3.67%和5.46%。测定3个室间质评样品的百分比偏差分别为24.20%、-0.90%、-1.50%。血清FFA个体间和个体内生物学变异分别为8.43%、19.36%。结论酶法测定血清FFA的精密度和正确度能满足相关实验室质量控制要求。血清FFA的个体间和个体内生物学变异可为制定实验室质量规范和临床课题的科研设计提供参考依据。     

RNA干扰下调Stat5对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制及诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨Stat5-shRNA对裸鼠体内人肝癌SMMC7721移植瘤的抑制及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法 将SMMC7721细胞悬液接种于裸鼠背部皮下,15d后,待在接种部位出现肿瘤结节、质地较硬等指标认定为成瘤.将15只成瘤裸鼠完全随机分为:空白对照组、HK质粒对照组、Stat5-shRNA组共3组,每组各5只.空白对照组瘤内注射生理盐水,HK质粒对照组瘤内注射Pgenesil1-HK,Stat5-shRNA组瘤内注射Pgenesil-1 -Stat5A1,各组注射剂量及次数均为50μl/只,每2天1次,共10次.第35天,处死各组全部动物,剥瘤称重,计算肿瘤大小及抑瘤率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 与空白对照组和HK质粒对照组比较,Stat5-shRNA组裸鼠人肝癌移植瘤的生长受到明显抑制,肿瘤细胞凋亡率明显上升[(21.35±3.69)％比(3.56±1.12)％,(3.81±3.05)％,P＜0.05].结论 Stat5-shRNA可有效抑制裸鼠体内人肝癌移植瘤的生长,并能够诱导肿瘤细胞凋亡.Stat5-shRNA在人肝癌的基因治疗中具有潜在的应用价值.     

多发性骨髓瘤患者浆细胞免疫表型特点及其临床意义研究

目的：观察多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓中浆细胞免疫表型特点，及其与患者临床预后的相关性。方法：收集35例MM患者资料，骨髓涂片及切片分别经瑞氏-吉姆萨和HE染色后，观察分析骨髓细胞形态及病理学特点。同时，取患者骨髓或外周血分别进行流式细胞术检测及相关实验室检查。结果：MM患者骨髓浆细胞不仅数量明显增多，且形态明显异常，切片中浆细胞分布类型包括塞实型16例（45.71%），结节型14例（40.00%）和间质型5例（14.29%）。MM患者中出现血清LDH、β2-MG、Cr和BUN等检测指标升高的比例分别占80%、85.71%、62.86%和60%。MM患者浆细胞CD38、CD138均呈阳性表达，CD56、CD200、CD117和CD28阳性患者比例分别为65.71%、94.29%、60%和54.29%，CD20、CD81、CD33、CD27及CD13阳性患者比例分别为37.14%、42.86%、28.57%、57.14%和34.29%，而CD19及CD45阳性患者比例分别为22.86%和31.42%，且Igκ或Igλ链表达缺失呈单克隆增生。其中CD27和CD28的表达情况与MM患者预后密切相关，浆细胞CD27表达缺失及CD28阳性表达的患者5年总生存率较低（P < 0.05）。结论：MM患者骨髓中浆细胞免疫表型明显异常，其中CD27和CD28的表达与患者病情进展和临床预后具有显著相关性，因此免疫表型检测在MM患者临床诊断、治疗监测中具有重要意义。     

靶向STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

摘要:目的：构建靶向信号转导及转录激活因子5（STAT5）的RNAi重组质粒并进行鉴定。 方法：设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA 测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,westernblot、RT-PCR检测STAT5基因表达。 结果：酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STAT5的序列特异性小发夹状RNA（shRNA）可有效抑制SMMC7721细胞STAT5表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05)。其中以Pgenesil-1-STAT5A1抑制效应最强。 结论：成功构建靶向STAT5的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰载体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础。     

香加皮杠柳苷抑制Stat5信号通路诱导SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 研究香加皮提取物杠柳苷对Stat5信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法 MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术观察肿瘤细胞的周期变化和凋亡,western blot法检测杠柳苷作用前后人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内Stat5蛋白质表达.结果 杠柳苷明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,使细胞周期停滞在G2/M期,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡.杠柳苷作用后,细胞核内的Stat5蛋白量降低而胞浆中的量未见明显改变.结论 香加皮杠柳苷能够抑制Stat5信号转导通路,进而抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡.     

重组人IL-2抑制乳腺癌细胞增殖及其机制的研究

目的：观察重组人IL-2对体外培养乳腺癌细胞生长的影响,及对洛铂体外抑瘤效果的影响。方法：选择乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为实验对象。利用MTT实验检测重组人IL-2和对照药物洛铂对肿瘤细胞生长的抑制率,利用RT-PCR方法分析MCF-7细胞中Syk基因在不同处理因素作用下表达情况。结果：洛铂能明显抑制两种乳腺癌细胞体外生长,重组人IL-2对两种癌细胞有一定的抑制作用。重组人IL-2和洛铂同时处理时,对肿瘤细胞的抑制率比单独应用洛铂时明显升高,并且同时处理时MCF-7细胞中Syk mRNA表达水平比洛泊单独处理时高。结论：重组人IL-2能增强洛铂对乳腺癌细胞生长抑制效果。重组人IL-2单独作用乳腺癌细胞时也有一定的抑制效果,针对MCF-7细胞,重组人IL-2刺激信号传递可能有Syk参与。提示在体内时IL-2不仅对机体免疫细胞起重要的刺激激活作用,还可能对瘤细胞本身也有抑制作用。     

重组人IL-2抑制乳腺癌细胞增殖及其机制的研究

目的:观察重组人IL-2对体外培养乳腺癌细胞生长的影响,及对洛铂体外抑瘤效果的影响。方法:选择乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为实验对象。利用MTT实验检测重组人IL-2和对照药物洛铂对肿瘤细胞生长的抑制率,利用RT-PCR方法分析MCF-7细胞中Syk基因在不同处理因素作用下表达情况。结果:洛铂能明显抑制两种乳腺癌细胞体外生长,重组人IL-2对两种癌细胞有一定的抑制作用。重组人IL-2和洛铂同时处理时,对肿瘤细胞的抑制率比单独应用洛铂时明显升高,并且同时处理时MCF-7细胞中Syk mRNA表达水平比洛泊单独处理时高。结论:重组人IL-2能增强洛铂对乳腺癌细胞生长抑制效果。重组人IL-2单独作用乳腺癌细胞时也有一定的抑制效果,针对MCF-7细胞,重组人IL-2刺激信号传递可能有Syk参与。提示在体内时IL-2不仅对机体免疫细胞起重要的刺激激活作用,还可能对瘤细胞本身也有抑制作用。     

血清转化生长因子-β的研究进展

转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）是由三种结构相近功能相似的生物活性因子组成的家族,化学本质是多肽类物质,TGF-β至少有6个结构相关的份子（TGF-β1,2,3,4,5,6）,它们在多种组织和细胞内有表达,     

多发性骨髓瘤患者浆细胞免疫表型特点及其临床意义研究

目的：观察多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓中浆细胞免疫表型特点,及其与患者临床预后的相关性。方法：收集35例MM患者资料,骨髓涂片及切片分别经瑞氏-吉姆萨和HE染色后,观察分析骨髓细胞形态及病理学特点。同时,取患者骨髓或外周血分别进行流式细胞术检测及相关实验室检查。结果：MM患者骨髓浆细胞不仅数量明显增多,且形态明显异常,切片中浆细胞分布类型包括塞实型16例（45.71%）,结节型14例（40.00%）和间质型5例（14.29%）。MM患者中出现血清LDH、β2-MG、Cr和BUN等检测指标升高的比例分别占80%、85.71%、62.86%和60%。MM患者浆细胞CD38、CD138均呈阳性表达,CD56、CD200、CD117和CD28阳性患者比例分别为65.71%、94.29%、60%和54.29%,CD20、CD81、CD33、CD27及CD13阳性患者比例分别为37.14%、42.86%、28.57%、57.14%和34.29%,而CD19及CD45阳性患者比例分别为22.86%和31.42%,且Igκ或Igλ链表达缺失呈单克隆增生。其中CD27和CD28的表达情况与MM患者预后密切相关,浆细胞CD27表达缺失及CD28阳性表达的患者5年总生存率较低（P < 0.05）。结论：MM患者骨髓中浆细胞免疫表型明显异常,其中CD27和CD28的表达与患者病情进展和临床预后具有显著相关性,因此免疫表型检测在MM患者临床诊断、治疗监测中具有重要意义。