雌激素受体在卵巢癌发生发展中作用的研究进展

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一.因缺乏有效的诊断方法,确诊时多为晚期,死亡率居妇科恶性肿瘤首位.大量流行病学调查已显示雌激素与卵巢癌的发生有关,而且在卵巢上皮肿瘤的病程进展中起重要作用,雌激素主要通过雌激素受体(ER)启动一系列的信号传导途径.因此,ER是雌激素与卵巢癌间的重要桥梁,对ER的研究有助于指导卵巢癌的临床治疗,就卵巢癌中ER自身状态及细胞因子对其影响综述.     

EGFR基因在肺腺癌中突变的研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞在肺腺癌患者中突变的相关因素。方法:分析和检测64例肺腺癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR和序列分析技术进行EGFR基因18、19和21外显子突变分析。结果:64例PAC患者中有16例(25%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变。其中2例(3.1%)为18外显子,7例(10.93%)为19外显子,7例(10.93%)为21外显子。结论:肺腺癌(PAC)患者肿瘤组织中EGFR基因突变主要集中于19、21外显子突变,女性高于男性。     

雌激素上调LRP16基因表达的研究

目的：鉴定LRP16基因的表达调控途径并探讨其可能机制。方法：对LRP16基因进行启动子序列顺式作用元件和信息学角度的SAGE(serial analysis of gene expression)谱分析，提示雌激素对其可能具有转录调控作用。为证实这一作用，构建了LRP16基因启动子序列(2．6kb)调控的荧光素酶报告子(pS0)，并与雌激素受体α和β(ERα，ERβ)真核表达载体共转染COS-7和MCF-7细胞，加入雌二醇(β-E2)培养，lueiferase assay方法测定相对荧光素酶活性。结果：报告子pS0与ERα真核表达载体共转染细胞的相对荧光素酶活性较非共转染组及pS0／ERβ表达载体共转染组显著升高，并且在两种细胞中的升高幅度接近。结论：LRP16是受雌激素调控的一个新识别的靶基因，具体调控途径由雌激素变构激活的ERα直接介导，其临床意义有待进一步研究。     

LRP16基因启动子的亚克隆及表达调控载体的构建

目的：为深入研究LRP16基因的表达调控机制，克隆及亚克隆了LRP16基因的启动子序列，构建LRP16基因启动子表达调控载体。方法：在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRPl6基因转录起始位点5′侧翼区约3kb的基因组序列设计PCR扩增引物，从健康外周血中扩增获得该片段，以此序列为基础进行亚克隆，分别获得6条5’端不等、3’端平齐的片段，最后插入用于表达调控研究的pGL3—Basic载体。结果：获得了7条长度依次差别约为400bp的LRP16启动子克隆，分别构建了调控荧光素两报告基因的真核表达载体。结论：上述载体的成功构建为信息资源与实验手段的有效结合克隆启动子序列提出了一种模式，并为LRPl6表达克隆及启动子的活性分析奠定了基础。     

细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因酪氨酸激酶域体细胞在细支气管肺泡癌（BAC）患者中突变的相关因素。方法分析和检测本院37例细支气管肺泡癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR技术进行EGFR基因18、19、20和21外显子突变分析。结果37例BAC患者中有18例（48．6％）酪氨酸激酶域存在体细胞突变,其中3例（8．1％）为18外显子替代突变,5例（13．5％）为19外显子突变,7例（18．9％）为20外显子替代突变,8例（21．6％）为21外显子替代突变。结论EGFR基因与BAC密切相关。     

热断层成像技术用于乳腺癌裸鼠模型实验初探

目的探讨热断层成像技术(TTM)应用于乳腺癌裸鼠模型扫描的可行性。方法采用既往实验中用逆转录病毒介导RNA干扰的方法,已构建的能不同程度抑制人的乳腺癌细胞MCF7中LRP16基因表达的两株细胞pL374/MCF7(抑制率90%)和对照细胞系pGFPi/MCF7(阴性);选取BALB/c雌性裸小鼠共20只,随机分为两组,10只/组。分别接种pL374/MCF7及对照细胞系pLGFPi/MCF7。接种细胞6周后,用TTM观察裸鼠成瘤情况。将20只裸鼠处死,解剖观察,取形成的小结节和相应的肺组织进行HE染色。结果TTM值异常升高的裸鼠有13只。11只裸鼠有≤3mm小结节。HE结果显示,以上11只裸鼠体内形成的小结节为阳性肿瘤组织,4只肺部组织显示有阳性肿瘤细胞。TTM值异常升高与HE染色阳性高度相关。结论TTM技术可能在肿瘤的动物模型研究中发挥一定的作用。     

雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义

目的:探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中雌激素(E2)对LRP16基因表达的调控作用,LRP16基因过表达对Ishikawa细胞增殖及侵袭生长能力的影响以及可能的分子机制. 方法:采用Northern blot方法检测细胞中LRP16基因mRNA表达水平. 双荧光报告系统检测相对荧光素酶活性. 胎盘蓝死活细胞计数方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞增殖的影响,Matrigel包被的Transwell方法观察LRP16 过表达对Ishikawa细胞侵袭生长能力的影响. Western blot方法检测Ishikawa细胞中的蛋白水平. 结果:雌二醇诱导了Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平表达上调;而ICI 182 780则Ishikawa细胞中LRP16 mRNA水平下调. 增加ERα表达量促使Ishikawa细胞中LRP16基因上调. pGL3-S5与ERα共转染Ishikawa细胞的相对荧光素酶活性较单纯pGL3-S5转染组细胞升高30倍. 我们没有观察到LRP16基因过表达对Ishikawa细胞的促增殖效应. Transwell结果显示LRP16基因过表达Ishikawa细胞的侵袭率较对照组细胞增加了30%. LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙粘合素的mRNA以及蛋白水平较对照组细胞下调了3倍,而没有检测到MMP2,MMP9以及CD44蛋白水平的变化. 结论:我结果表明E2通过激活ERα上调子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平,LRP16表达水平依赖于雌激素. LRP16基因表达上调没有促进子宫内膜癌细胞的增殖,但可能通过抑制E-钙粘合素表达水平增加了细胞的侵袭能力.