人胆囊类器官培养体系的建立与鉴定

目的 构建人胆囊类器官的培养体系,实现人胆囊类器官体外稳定快速扩增,并鉴定其特性。方法 分离人来源胆囊组织上皮细胞,运用三维培养体系将细胞嵌入基质胶中进行3D培养。观察胆囊类器官生长过程中球囊样结构的面积、周长与形态,计算形状因子。利用细胞免疫荧光染色技术检测胆囊类器官的干性标志物CD133、富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)以及胆管上皮细胞标志物肝细胞核因子1β(HNF1β)、上皮细胞黏附分子（Ep CAM）、细胞角蛋白7、细胞角蛋白19、性别决定区Y框9(SOX9)的表达情况。使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brd U）摄入实验检测小分子CHIR-99021和blebbistatin对类器官增殖特性的影响。结果 胆囊类器官在体外培养过程中,类器官形成的球囊面积逐渐增大,第7天的类器官面积与第1天比较差异有统计学意义（P<0.01）,第7天时其形状因子从第1天的0.80(0.75,0.84)增高至0.83(0.81,0.85)(P<0.01),表明类器官在体外稳定生长且形状逐渐趋于一个完美的圆。免疫荧光染色可见类器官表达胆管上皮细胞标志物。在培养基中加入小分子CH...     

1型糖尿病动物模型和干细胞治疗的研究进展

1型糖尿病是一种由于自身免疫介导的胰腺β细胞遭受破坏而导致的慢性疾病。治疗1型糖尿病的方法是胰岛素注射或者胰岛移植,但是这些治疗方法受到费用昂贵、药物依赖以及移植供体匮乏等因素的限制。干细胞移植是目前1型糖尿病最具潜在应用价值的治疗方案。本文综述了1型糖尿病常用动物模型,及干细胞治疗1型糖尿病的研究现状,以期为后续研究提供参考。     

移植细胞实现肝脏有效再殖的机制研究

细胞移植是目前代替原位肝移植治疗终末期肝脏疾病最具可行性的方法。然而由于细胞来源、移植细胞植入受体肝脏效率低、增殖缓慢等问题，极大地限制了细胞移植治疗方式在临床上的广泛应用。近年来，通过人为修饰改变移植细胞和宿主肝脏微环境和肝细胞的特性，使得移植细胞再殖肝脏取得了实质性的进展。本文主要综述目前已经成功实现肝脏再殖的研究成果，并探讨移植细胞在不同动物模型中再殖肝脏的潜在机制。     

医学细胞生物学实验教学改革初探

细胞生物学是医学教育的一门基础性课程,是开启医学生涯的敲门砖。培养符合新时代发展需求的高素质医学人才,要求医学生具有良好的细胞生物学基础。文章探讨了医学本科生细胞生物学实验教学的现状,创新教学模式、优化考核方式、完善课程设置和充分利用现代化教学设备,以期提高教学质量,加强对学生自主创新能力和科研素质的培养。     

细胞工程实验教学改革的实践与探讨?

综合性实验教学是细胞工程实验教学改革的重要组成部分。为了提高教学质量,培养学生学习兴趣,以小班化教学为组成形式,开展细胞工程课程综合性实验教学模式改革,在实验教学内容整合、教学与科研相结合的讨论式教学模式及考核形式等方面进行实验教学改革。经过改革实践后,生物技术专业学生的细胞工程课程学习兴趣及综合素质得到明显提升。     

小鼠肝脏中细胞角蛋白19阳性细胞的肝向分化特性

目的 明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19+)细胞是否可分化为成熟肝细胞.方法 利用CK19CreERT小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠肝脏中CK19+细胞的GFP标记情况.在此基础上分别构建3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝脏损伤模型,采用肝脏组织冰冻切片结合免疫荧光染色检测肝脏中GFP标记的CK19+细胞的分化情况.结果 获得CK 19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,免疫荧光染色结果显示CK19+细胞可被GFP标记.在DDC肝脏损伤模型小鼠中检测到增生性小胆管内有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达胆管上皮细胞标志物CK19,且DDC肝损伤模型小鼠中GFP+胆管细胞比例高于未损伤对照组[(63.5±6.3)％ vs (53.6±4.8)％,P＜0.05];在CCl4肝损伤模型组小鼠中检测到肝脏实质细胞中有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB),且CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏中GFP+细胞比例高于未损伤对照组[(0.15±0.02)％vs (0.008±0.003)％,P＜0.01].结论 小鼠肝脏内的CK19+细胞群体中存在具有肝向分化潜能的前体细胞,可能为真正的肝干细胞的识别鉴定提供一个新线索.     

抑制转化生长因子β和Notch信号通路诱导人胆囊上皮细胞分化为功能性肝细胞样细胞

目的 通过小分子化合物改变细胞命运,诱导人胆囊上皮细胞（hGBEC）分化为具有功能的肝细胞样细胞。方法 在基质胶中对原代hGBEC进行三维培养,生长培养基中添加B27添加剂、N2添加剂、N-乙酰半胱氨酸、表皮生长因子、肝细胞生长因子等。添加小分子化合物/蛋白因子对细胞进行诱导分化,筛选出关键作用因子。采用PCR、qPCR和免疫荧光染色检测干细胞标志物及肝细胞相关标志物的表达情况,通过脂肪BODIPY-493染色、糖原过碘酸希夫染色和白蛋白ELISA检测评估细胞的肝样功能。结果 三维培养的hGBEC表达造血干细胞抗原CD133、上皮细胞黏附分子、肝细胞核因子4α等肝脏干细胞和肝前体细胞标志物。TGF-β信号通路抑制剂和Notch信号通路抑制剂是诱导hGBEC分化的关键作用因子。分化条件下所得细胞表达肝细胞功能标志物α1-抗胰蛋白酶、细胞色素P450 3A4、白蛋白和延胡索酰乙酰乙酸水解酶,可以贮存糖原,具有合成脂肪的能力,能够分泌白蛋白。结论 hGBEC可在体外长期培养,通过抑制TGF-β和Notch信号通路可初步诱导其分化为具有部分肝功能的肝细胞样细胞。     

医学细胞生物学实验教学模块教学设计探讨

医学细胞生物学实验课教学的重要地位日益凸显,而实验课教学中课程内容设置的问题不容忽视。常规课程内容多以验证性实验为主,缺乏综合能力和创新能力的培养,也不利于发挥学生的积极性和主观能动性。在教学实践中,以＂模块＂为单位组织教学内容,各模块之间具有相对的独立性,在同一模块中可以进行内容、设备和师资的更新和补充,可针对不同的教学对象和教学层次的需要而选择相应的教学模块进行组合,从而更加强调系统集成的特点,使教学内容更具先进性、针对性、灵活性和可选择性,解决了教学内容陈旧过时和学时分配不合理的问题。     

血小板生成调节和人工制备的研究进展

血小板输注对于血小板减少的出血性疾病的治疗意义重大,然而用于输注的血小板产品受到保质期短、易被污染、捐献者少、存在不同程度免疫反应等多方面因素限制,无法实现稳定供应。尤其是在严重自然灾害、战时等突发情况下,血小板储备量极其有限、新鲜制备条件不足,往往无法充分发挥血小板的效能。因此研发新型人工血小板以及改良血小板生产、输注技术具有重大的民用及军用价值。本文综述了与人工血小板技术相关的血小板生成与调节机制,及相关生物技术与生物反应器的发展,以期为后继研究提供参考。     

案例教学在高校细胞工程授课中的应用

细胞工程旨在通过相关理论让学生掌握如何科学改造细胞以获取目的产物,注重培养学生的科研思维、解决问题的能力和实践操作。在以往授课过程中,教师发现多数学生对课程相关领域的知识储备有限。文章介绍了案例教学在细胞工程中的具体实施方案与授课效果,通过围绕“诱导型多能干细胞的获取与应用”这一主题,安排课前资料查阅、课堂回答讨论、教师答疑与总结等模块完成授课,最后通过问卷调查、成绩评测分析教学效果。新的教学模式激起了学生的学习热情,锻炼了学生的探索能力,培养了专业思维素养,并延续了学生对所学专业的兴趣。今后,教师可通过凝练专业知识结合拓展具体应用,继续在该课程中开展案例教学。