γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的免疫原性研究

目的研究ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞的免疫原性。方法利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ分别建立了四种ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行鉴定分析，流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞表面ＭＨＣ分子表达，灭活肿瘤细胞体外刺激诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）产生。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＩＦＮ－γ基因在宿主细胞中获得了正确整合和表达。ＦＡＣＳ分析结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞表面ＨＬＡⅠ类分子表达强度显著增强，Ⅱ类分子的表达阳性百分率有显著提高。一些ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞在体外诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞的能力有所提高。结论ＩＦＮ－γ基因修饰可增强人肝癌细胞的免疫原性，为基因工程瘤苗的临床应用提供了一定依据。     

γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的体外生物学行为

目的　研究γ干扰素(IFNγ)基因修饰人肝癌细胞的某些体外生物学行为。　方法　用逆转录病毒载体建立4种γ干扰素基因修饰人肝癌细胞,分别检测外源基因表达、细胞形态结构、体外生长速率及60Co照射的影响。　结果　4种IFNγ基因修饰人肝癌细胞表达不同生物活性水平的IFNγ,体外生长速率有不同程度的下降。经60Co照射及冻存处理,复苏后仍能分泌较高水平的IFNγ。　结论　IFNγ基因修饰人肝癌细胞体外生物学行为有一定程度的变化,为瘤苗的临床应用提供了一定依据     

实验性肿瘤的联合基因治疗研究

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年，但疗效尚未确定。治疗策略也不下12种，但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗，鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素，发病过程也是多步骤的，该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究。首先克隆一系列的治疗基因，构建不同载体及调控原件，     

实验性肿瘤的联合基因治疗研究

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定。治疗策略也不下12种,但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗,鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的,该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究。首先克隆一系列的治疗基因,构建不同载体及调控原件,然后进行不同基因的联合治疗作用,并与放射治疗相结合,最后还筛选新的肿瘤治疗侯选基因,旨在为临床提供更有效的肿瘤基因治疗策略和方案。     

基因修饰人肝癌和胃癌"瘤苗"及实验性肿瘤联合基因治疗

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定。治疗策略也不下十余种,但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗,而肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的。本研究建立一种细胞因子基因工程人肝癌和胃癌细胞“瘤苗”,用于经手术切除的肝癌或胃癌患者,消灭微小残存癌细胞,     

含Ⅰ-Adα和β链cDNA的三顺反子逆转录病毒载体构建及真核表达

为了协同表达MHCⅡ类分子的两个链α和β,利用脑心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,构建了含MHCⅡ类分子α和β链及选择标记新霉素磷酸转移酶基因的三顺反子逆转录病毒载体.经包装细胞包装成重组逆转录病毒后,感染NIH3T3、MM45T.Li、COS7细胞,经PCR、BT-PCR、Southern印迹、Northern印迹及流式细胞术在多水平上证实了α链和β链的基因表达和MHCⅡ类分子的正确组装.     

含I-A~dα和β链cDNA的三顺反子逆转录病毒载体构建及真核表达

为了协同表达MHCII类分子的两个链α和 β ,利用脑心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点 ,构建了含MHCII类分子α和 β链及选择标记新霉素磷酸转移酶基因的三顺反子逆转录病毒载体。经包装细胞包装成重组逆转录病毒后 ,感染NIH3T3、MM45T Li、COS7细胞 ,经PCR、RT PCR、Southern印迹、Northern印迹及流式细胞术在多水平上证实了α链和 β链的基因表达和MHCII类分子的正确组装。     

逆转录病毒介导γ—干扰素基因修饰人肝癌细胞的建立

目的 建立γ－干扰素基因修饰人肝癌细胞。方法 以逆转录病毒载体ＬＸＳＮ将人原γ－干扰素基因转录入四种不同的人肝癌细胞株,经Ｇ４１８筛选均获得了抗性克隆。结果 基因组ＤＮＡ ＰＣＲ和细胞总ＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ结果均明显ＩＦＮ－γ基因已在染色体ＤＮＡ中整合并表达,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进一步证实了目的基因的正确整合和表达。ＩＦＮ－γ生物活性检测结果表明,在基因修饰的四种不同个体人肝癌细     

逆转录病毒载体介导的γ—干扰素基因在人肝癌细胞中的表…

以逆转录病毒载体将人源γ－干扰素基因转导入４种不同的人肝癌细胞株，经Ｇ４１８抗性筛选均获得了阳性克隆。ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＦ结果均表明ＩＦＮ－γ基因已在基因组ＤＮＡ中整合并表达。ＴＦＮ－γ生物活性检测结果表明，在基因修饰的４种不同个体人肝癌细胞株及同－细胞株的５种不同克隆中，分泌的ＴＦＮ－γ活性有较大差别。