利用cDNA微阵列进行宫颈鳞癌的分子筛查

目的使用cDNA微阵列筛选浸润性宫颈鳞癌的淋巴结转移相关基因。方法应用包含18 432个基因的cDNA微阵列测定IB期宫颈鳞癌的全基因序列,包括已知功能的人类转录子和表达序列标签ESTs,分为正常组、淋巴转移组、无淋巴转移三组宫颈组织。为了证实不同的基因表达,选择3个基因进行了冰冻组织的RT-PCR检测和石蜡组织的免疫组化检测。结果经统计学分析,与无淋巴转移浸润性宫颈鳞癌组织比较,有淋巴转移的癌组织有677个基因大于2倍差异,其中上调494个(72.97%),下调183个(27.03%),表达序列标签EST为61个(9.01%),这些基因涉及代谢、发育、信号传导、分化、DNA结合转录和离子通道等。6倍差异基因14个,其中只有nel(chicken)like-2下调,其余为上调基因。RT-PCR和免疫组化的结果与cDNA微阵列结果一致。结论利用cDNA微阵列检测基因的表达状态可以预测宫颈鳞癌淋巴结转移和宫颈癌的预后情况。Cx43的低表达、ETV5和整合素alpha 2的高表达可能会成为评估浸润性宫颈鳞癌恶性程度的重要指标。这些分子有利于预测浸润性宫颈鳞癌的预后及其相应的分子治疗。     

子宫颈鳞状细胞癌中SCCA1和SCCA2的分子表达及其意义

 目的　探讨子宫颈鳞状细胞癌组织中SCCA1和SCCA2ｍRNA的表达在子宫颈鳞状细胞癌临床诊断、疗效评价及预后观察中的作用。方法　采用TaqMan探针实时聚合酶链反应（RT-PCR）的方法,分析60例子宫颈鳞状细胞癌患者和30例正常子宫颈组织中SCCA1和SCCA2 mRNA的表达。结果　SCCA2 mRNA在子宫颈鳞状细胞癌组织中较对照正常组织中表达水平高（相对表达量分别为4.405±2.310及9.088±2.195）,差异有统计学意义（t＝-6.513,P＜0.05）。SCCA1 mRNA则差异无统计学意义（t＝-0.115,P＞0.05）。SCCA2 mRNA的表达随着临床分期的增高而增高（F＝8.313,P＜0.05）,SCCA2 mRNA的表达在有淋巴结转移组较无淋巴结转移组高（t＝2.853,P＜0.05）,SCCA2 mRNA的表达与病理分级及患者年龄无关（P＞0.05）,SCCA1 mRNA的表达与患者年龄、病理分级、临床分期及淋巴结转移均无明显相关性（P＞0.05）。结论　SCCA2 mRNA的表达可能为子宫颈鳞状细胞癌临床分期、淋巴结转移的判断提供更为准确的信息。     

应用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术筛选淋巴瘤患者血清特异性生物标志物

 目的　应用蛋白质组学表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）技术筛选淋巴瘤患者血清特异性生物标志物,发现淋巴瘤早期诊断与人群筛查的血清学特异性标志。方法　应用SELDI-TOF-MS技术检测96例淋巴瘤患者血清特异性标志物,包括非霍奇金淋巴瘤（NHL）86例,霍奇金淋巴瘤（HL）10例,以30名健康体检者作为对照。采用生物化学法测定乳酸脱氢酶（LDH）,酶联免疫吸附法（ELISA）测定可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）、β2-微球蛋白（β2-MG）和糖链抗原125（CA125）。结果　在质荷比（M／Z）为0.2～16.0间,NHL患者有15个蛋白质含量与健康人差异有统计学意义（P＜0.01）,其中M／Z为 6880、8564、8692和13 751的蛋白质低表达对淋巴瘤的敏感度与特异度高,灵敏度和特异度分别为82.29 %和80.00 %、78.13 %和73.30 %、75.00 %和80.00 %、71.88 %和83.30 %。4个蛋白质对淋巴瘤诊断的灵敏度与特异度差异均无统计学意义（P＞0.05）,4个蛋白质联合检测淋巴瘤特异度达100.00 %,与LDH的灵敏度21.74 %、CA125的灵敏度56.80 %、β2-MG的灵敏度70.50 %比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　对M／Z为6880、8564、8692和13 751的蛋白质行质谱检测,有望作为人群筛查、诊断淋巴瘤的血清学特异性标志。     

大鼠膀胱肿瘤热应激后热休克蛋白70肽复合物的纯化及其抑瘤效应

目的分离纯化经亚高温盆腔区域热疗处理后大鼠膀胱肿瘤组织中的热休克蛋白70肽复合物（HSP70-PC），研究其对原位的大鼠膀胱肿瘤的治疗效应。方法经尿道膀胱灌注MNU诱导出大鼠膀胱肿瘤，用内生场热疗系统加热大鼠盆腔后取出膀胱肿瘤，用改良的液相色谱法分离纯化HSP70-PC，用SDS—PAGE、Western blot、SELDI—TOF-MS鉴定纯化的HSP70及与其结合的多肽。将大鼠分为肿瘤对照组、HSP70治疗组，治疗1月后进行病理研究。结果纯化获得的蛋白质经SDS—PAGE、Western blot、SELDI—TOF—MS鉴定，证实为HSP70-PC。HSP70-PC治疗组膀胱及肿瘤湿重低于对照组、肿瘤分期低于对照组（P〈0．01）。肿瘤分级两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。膀胱肿瘤组织中CD8阳性细胞率、脾脏S-100蛋白阳性细胞率及CD8阳性细胞率、肿瘤细胞凋亡指数均高于对照组（P〈0．01）。结论应用改良的液相色谱法可以纯化出高纯度的HSP70-PC，该蛋白复合物具有上调肿瘤鼠的细胞免疫状态，促进肿瘤细胞凋亡的作用。     

血清miRNA表达谱在肝细胞癌中的差异性研究

[目的]探讨肝细胞癌、肝硬化患者与正常人血清miRNA表达水平的差异性;筛选出肝癌中差异较明显的血清miRNA谱。[方法]分别收集4例肝癌患者、3例肝硬化患者和3例同期正常体检人员的血清,采用Qiagen miRNA PCR Array芯片法筛查肝癌、肝硬化患者和正常人差异表达的血清miRNA。[结果]初步筛查出了差异表达的血清miRNA,与正常人比较,以相差2倍为分界,肝癌血清miRNA共128个下调,98个上调;肝硬化血清miRNA共131个下调,74个上调;其中,肝癌和肝硬化患者血清miRNA同时下调的有76个,同时上调的有53个。与肝硬化比较,以相差2倍为分界,肝癌血清miRNA共108个下调,103个上调;结合文献、P值及CT值进一步筛选出差异最有意义的7个与肝癌相关的血清miRNA(miR-373-5p,miR-1290,miR-4516,miR-134-5p,miR-144-5p,miR-125a-5p,miR-126-3p)。[结论]差异表达的miRNA谱与肝癌的发生、发展有一定的相关性。     

应用芯片技术对非霍奇金淋巴瘤标志物的研究

目的应用蛋白质组学技术寻找非霍奇金淋巴瘤与健康对照组血清中差异表达的蛋白。方法选择山西省肿瘤医院72例非霍奇金淋巴瘤患者,男性47例,女性25例;年龄11～83岁,中位年龄52.5岁。正常对照组32例,男性17例,女性15例;年龄10～74岁,中位年龄26.5岁,均为健康志愿者。应用SELDI-TOF-MS技术通过WCX-2蛋白芯片检测他们血清中的蛋白质谱,运用Ciphergen Proteinchip 3.0版本的分析软件自动采集数据,结果采用Biomarker Wiz-ard软件分析二组间蛋白质谱中的差异蛋白。结果笔者在非霍奇金淋巴瘤患者的血清中找到了一系列特异表达的蛋白质,其质荷比分别为3193 Da,3398 Da,7974 Da,8564 Da,8693 Da和15934 Da。72例NHL患者与30例正常人的血清中有5个差异明显的潜化标志蛋白,患者血清中高表达且正常人血清低表达的蛋白质的相对分子量为15 934 Da,患者血清中低表达且正常人血清高表达的蛋白质相对分子量为3193 Da,3398 Da,8564 Da,8693 Da。结论质荷比3193 Da,3398 Da,8564 Da,8693 Da和15 934 Da的蛋白质可能是非霍奇金淋巴瘤的生物学标志物。     

淋巴细胞恶性增殖病基因重排及其意义

目的：对淋巴细胞恶性增殖病进行研究。方法：应用多聚酶链反应－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲ－ＰＡＧＥ）和银染色法,对３０７ 例淋巴细胞恶性增殖病进行了免疫球蛋白重链基因（ＩＧＨ）,Ｔ细胞受体ｒ链基因（ＴＣＲｒ）的克隆性重排进行检测。结果：ＩＧＨ １６０ 例（５２．１％ ）,ＴＣＲｒ ５８ 例（１８８％ ）,双阳性２２ 例（７．１％ ）,阴性６７ 例（２１．８％ ）。非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）与ＮＨＬ白血病的基因重排分布相似;霍奇金淋巴瘤（ＨＤ）明显较低;急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）及多发性骨髓瘤（ＭＭ）进展期基因重排高达９５％ ,９０％ ;缓解期６０％ ,４５％ ;慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）重排率低;急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ）及慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）为对照,它们也有少量淋巴细胞基因重排。病理学型别以不能分型者,原发灶以鼻及咽淋巴环者之ＴＣＲｒ 重排明显增高,且与恶性程度呈正相关。并可以此重排来检测微小病灶（ＭＲＤ）之存在。结论：可用此指导化疗。     

蛋白质组学在淋巴瘤中的应用

 淋巴瘤是血液系统常见的恶性肿瘤之一,其诊断和分型一直是一临床难题。目前确诊主要依据组织病理学,而病理检查手段并不包括对淋巴瘤的临床分期、肿瘤负荷情况、浸润程度及对治疗的反应等。细胞从正常状态转为肿瘤的过程中,细胞内的蛋白质都会产生一系列的变化。随着生物信息学的快速发展和趋于成熟,以高通量、粗样本结合生物信息学为特点的蛋白质组学技术可以从细胞整体水平检测到这种变化。文章就蛋白质组学在淋巴瘤的诊断、分型、治疗及其应用前景作一综述。     

去势对雄性BALB/c小鼠早期血清性激素及蛋白表达等影响

目的 探讨雄性小鼠去势术后早期内环境变化特点,为合理有效建立前列腺良恶性动物模型在去势与非去势的选择方面提供参考. 方法 选用16只BALB/c雄性小鼠,随机平均分为去势组和对照组.去势组采用经阴囊途径双睾丸切除术,对照组则作同一切口假手术.第21天所有小鼠采血处死,分别检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、血管内皮生长因子(VEGF)和SELDI蛋白分析. 结果 与对照组相比,去势组血清T接近成倍升高(730/400),E2反而成倍降低(112.53/256.45),T/E2较对照组升高约4倍(6.49/1.56);VEGF变化不明显(P＞0.05);去势组在7个蛋白位点(3.4、5.3、7.1、11.6、11.8、15.2和15.9 KDa)有高表达,在2个位点(6.0和6.2 KDa)为低表达. 结论 去势与否不仅对小鼠机体性激素、VEGF和蛋白表达等有影响,而且会导致在去势与否基础上所建立的前列腺良恶性模型特征不同及其研究结果差异.     

质谱检测T细胞非霍奇金淋巴瘤患者差异蛋白质的表达及其临床价值

 【摘要】　目的　研究T细胞非霍奇金淋巴瘤（T-NHL）患者血清差异蛋白质质谱的表达及其临床价值。方法　应用蛋白芯片表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术wcx-2芯片检测36例T-NHL患者和30例弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者血清蛋白质质谱,用生物化学法测定T-NHL患者血清乳酸脱氢酶（LDH）水平,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定β2-微球蛋白（β2-MG）水平。分析T-NHL患者与DLBCL患者间质谱检测差异表达的蛋白质,同时分析差异蛋白质丰度与疾病分期、LDH及β2-MG水平的相关性。结果　与DLBCL患者比较,在T-NHL患者血清中共检测出9个差异蛋白质,其相对分子质量分别为1142.67、1451.43、1472.49、1512.03、3194.22、3267.41、3933.86、4593.12、9182.24。这些差异蛋白质的表达水平在T-NHL不同分期间差异无统计学意义（均P＞0.05）。4593.12和9182.24蛋白质质谱在T-NHL中高表达,在这两种蛋白质阳性组中,LDH表达水平分别为（290.82±29.95）U／L、（283.94±100.94）U／L,明显高于阴性组的（169.22±55.42）U／L、（169.50±59.25）U／L（t＝-3.199,P＝0.004;t＝-2.378,P＝0.026）,两组蛋白质的峰值与LDH的水平呈正相关（r＝0.265,r＝0.178,均P＜0.01）;在这两种蛋白质阳性组与阴性组间β2-MG表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。其他7种蛋白质在T-NHL患者血清中低表达,LDH、β2-MG水平在这些蛋白质质谱中差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论　相对分子质量为4593.12和9182.24的蛋白质可能是鉴别T-NHL的特异血清学标志,它们可和LDH联合用于评估患者的肿瘤负荷,为临床治疗提供一定的指导。