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1.
腺病毒介导的肿瘤血管靶向的体外自杀基因治疗研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10~(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自杀基因的表达,测定原药对它们的杀伤.生长抑制试验表明,GCV对lGll/Ad-tk细胞杀伤的IG_(50)为0.2μmol/ L,5-FC对lGll/Ad-cd细胞杀伤的IC_(50)为20μmol/L.电镜下显示被原药杀伤的血管内皮细胞有明显的细胞凋亡现象.同时混合细胞实验证明两系统均存在明显的旁杀伤效应.从而在体外水平证明了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统杀伤增生血管内皮细胞的有效性. 相似文献
2.
自杀基因联合化疗药物治疗结肠癌的体外研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究胞嘧啶脱氨酶基因(CD)联合化疗药物对结肠癌的治疗作用。方法 以重组腺病毒AdCMVCD为载体转移CD基因,在体外研究病毒感染对顺铂(CDDP)、丝裂霉素(MMC)敏感性的影响,化疗药物对AdCMVCD/5-FC直接杀伤作用及“旁观者效应”的影响。结果 病毒感染并不影响Lovo细胞对CDDP、MMC的敏感性;低剂量CDDP、MMC即可明显增强AdDMVCD/5-FC系统的直接杀瘤作用,5-FC的IC50明显降低(P<0.05),并且增强AdCMVCD/5-FC系统的“旁观者效应”。结论 化疗药物可以增强自杀基因系统对结肠癌的治疗作用,自杀基因和化疗药物有望联合应用于结肠癌的治疗。 相似文献
3.
将含人肿瘤坏死因子(TNFα)cDNA的不同逆转录病毒载体(LNS-tnfα、L-tnfαSN及LNC-tnfα)和质粒型真核细胞载体(pSVK3-tnfα),分别用磷酸钙法导入肝癌细胞SMMC-7721中,观察TNF的表达水平。结果:重组质粒型表达载体pSVK3-tnfα表达好,24小时开始分泌TNFα(50U/ml),48~72小时达最高值(90U/ml),96小时后下降(40U/ml)。将pSVK3-tnfα重组DNA用磷酸钙包裹后直接进行瘤内注射,发现裸鼠外周血TNFα水平有一过性增高,3周后测量瘤体大小,发现实验组的肿瘤体积明显小于对照组(2.5±1.6cm比3.2±1.8cm,n=6,P<0.05),实验组荷瘤裸鼠的生存时间亦明显延长(44.0±3.3d比28.2±2.0d,n=6,P<0.01)。结果表明,应用TNFα基因转移进行肝癌的基因治疗是一条值得探索的途径。 相似文献
4.
人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达克隆SMMC7721-TNF体外抗瘤活性及其可能机制的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721,经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF,观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应,结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无明显的杀伤作用,但其培养液上清对这两种细胞均具有明显的抑制作用, 相似文献
5.
为从分子水平来阐明药物对肾阳虚证的主要调节点。采用逆转录多聚酶链反应化学发光定量法、放射免疫及细胞免疫技术,观察补肾,健脾,活血三类复方分别对下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺轴受抑制模型的下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子mRNA表达,神经内分泌和免疫功能的影响。 相似文献
6.
应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞(TIM),RNA斑点杂交提示TIM中有明显的TNFαmRNA转录。经RT-PCR扩增反应分离得到一特异的700bp左右的DNA片段,DNA序列分析证实这一DNA片段中包含编码人TNFα成熟肽所需的全部cDNA序列。将这一人TNFαcDNA克隆到真核细胞表达质粒pSVK3,获得真核细胞表达重组质粒pSVK3-tnf,用磷酸钙沉淀法将pSVK3-tn 相似文献
7.
以阳离子脂质体lipofectin介导含人白细胞介素一2(IL-2)基因的真核表达质粒pME18S-IL-2转染体外培养和体内成瘤的小鼠肝癌HAC细胞,观察IL-2基因转染的肝癌细胞表达IL-2情况及对肝癌的治疗作用。结果:体外转染IL-2基因48小时后在培养上清中可测得人IL-2活性,96小时达最高峰(76U/ml);瘤体内转染后,发现治疗组小鼠生存时间明显延长(32.1±9.4d比20.9±7.5d,P<0.01),肿瘤体积明显小于对照组,瘤组织内可检出IL-2的mRNA。实验表明,脂质体-IL-2基因复合物直接注射人瘤体后可获局部IL-2基因表达,从而诱生机体抗肿瘤效应,这为肝癌基因治疗提供了一种简便实用的模式。 相似文献
8.
聚乙二醇(PEG-8000)化学修饰重组人白细胞介素-2(PEG-rIL-2)显著地延长了rIL-2的循环半衰期。本研究比较了不同剂量方案的PEG-rIL-2和rIL-2的体内抗小鼠宫颈癌作用,采用局部用药抗移植的小鼠腹水瘤型和皮下实体瘤型宫颈癌U14。结果表明:腹腔内注射一定剂量的PEG-rIL-2(4500IU,QD×5)能较相同剂量的rIL-2显著延长荷腹水瘤小鼠的存活期(23.1±3.6天比16.5±2.0天,P<0.01),但PEG-rIL-2剂量过低则无明显疗效。在小鼠皮下移植肿瘤的局部并于肿瘤移植后的第4天开始注射给药,不同剂量的PEG-rIL-2(1500~13500IU,QD×5)对皮下移植瘤的生长抑制作用显著强于相同剂量的rIL-2(P<0.01),且抗肿瘤作用呈剂量依赖效应。本研究提示,PEG-rIL-2的抗小鼠宫颈癌作用优于rIL-2,对人宫颈癌的局部免疫治疗具有潜在的临床价值。 相似文献
9.
应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞(TIM),RNA斑点杂交提示TIM中有明显的TNFαmRNA转录。经RT-PCR扩增反应分离得到一特异的700bp左右的DNA片段,DNA序列分析证实这一DNA片段中包含编码人TNFα成熟肽所需的的全部cDNA序列。将这一人TNFαcDNA克隆到真核细胞表达质粒pSVK3,获得真核细胞表达重组pSVK3-tnf,用磷酸钙沉淀法将pSVK3-tnf导入人肝癌细胞SMMC7721中的细胞培养上清中可检测到TNFα的一过性表达。结果提示TIM可成为获取TNFα基因的来源,获得的pSVK3-tnf重组质粒为肝癌的基因治疗奠定了基础。 相似文献
10.
癌胚抗原启动子驱动的含大肠杆菌嘧啶脱氨酶自杀基因腺病毒载体的构建及初步鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
自杀基因治疗是一种富有希望的肿瘤治疗新方法。自杀基因导入细胞后可通过直接杀伤作用及“旁观者效应”(bystandereffect)发挥作用。大肠杆菌嘧啶脱氨酶 (CD) / 5 FC自杀基因系统是继HSV TK/GVC系统后得到广泛关注的新的基因治疗系统 ,导入CD基因的细胞可将无毒的前药氟胞嘧啶 (5 FC)代谢成细胞毒性产物——— 5氟脲嘧啶 (5 FU)从而杀死细胞。控制自杀基因的靶向性保护正常细胞组织不受伤害是自杀基因临床应用的重要前提。癌胚抗原(CEA)是胃肠道肿瘤特异性标志物 ,在结肠癌合并肝转移或复发时 ,常… 相似文献