短发夹状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

RNA干扰（RNAi）技术是运用双链RNA引发的转录后水平基因沉默机制,特异性抑制靶基因转录,进而下调相应蛋白表达水平及功能.新近的RNAi技术,是利用DNA载体直接在体内表达短发夹状RNA（shRNA）,特异性封闭相应的靶基因mRNA,抑制mRNA的翻译.与早期的RNA干扰技术相比,该方法的特异性和干扰效率均有较大提高,已广泛应用于多种研究领域.利用RANi技术特异地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,使这些基因保持在沉默或休眠状态,从而使肿瘤细胞增殖速度减慢,凋亡加快,显示了RNAi技术用于肿瘤基因治疗的可行性和有效性.     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,观察RNA干扰（RNAi）技术,对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用,并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术,设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA,构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞,荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达,计算转染效率,半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率,流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率,比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后,荧光显微镜下观察转染效率约40％;Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示,转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示,转染pAKT2-shRNA后,紫杉醇25nmol／L处理细胞12h,与空白对照组和阴性对照组相比,细胞凋亡率显著增加,P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达;运用RNAi技术,降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平,能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

为观察构建的AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其促进细胞凋亡的机制。运用基因工程技术，设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞，荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达，     

胸腔内置微管引流并灌注力尔凡治疗恶性胸水的疗效观察

目的:观察微导管持续胸腔引流并灌注力尔凡治疗恶性胸水的疗效和毒性。方法:78例恶性胸水患者行置微导管持续引流后,胸腔内注射力尔凡治疗。结果:完全缓解(CR)38例,部分缓解(PR)29例,有效率85.9%。结论:使用微导管引流并注入力尔凡治疗恶性胸水疗效确切,能改善恶性肿瘤患者的生活质量,且毒性低,值得临床应用。     

吉西他滨联合顺铂二线治疗晚期乳腺癌

目的观察国产吉西他滨(泽菲)联合顺铂组成的GP方案二线治疗蒽环类或紫杉类耐药性晚期乳腺癌的疗效与安全性。方法2003~2005年以GP方案治疗蒽环类或紫杉类耐药性晚期乳腺癌29例,泽菲1250mg/m2静滴,第1、8天,顺铂80mg/m2静滴,第1天,每21天为1周期。以WHO标准评价疗效和毒性。结果29例患者,中位化疗周期数为3周期(2~4周期),其中CR1例(3·4%),PR14例(48·3%),SD8例(27·6%),PD6例(20·7%),有效率为51·7%。随访2年,中位TTP35周(12~44周),中位生存期为62周(45~81周)。主要毒性反应为恶心、呕吐与骨髓抑制。结论国产吉西他滨和顺铂联合方案治疗蒽环类或紫杉类耐药性晚期乳腺癌疗效较好,使用方便,毒性反应较轻,是二线治疗蒽环类或紫杉类耐药性晚期乳腺癌的有效解救方案。     

AKT2和FN蛋白在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 探讨上皮性卵巢癌中蛋白激酶B2(AKT2)及纤维连接蛋白(FN)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法及半定量分析方法,检测上皮性卵巢癌(n=50),卵巢良性上皮性肿瘤(n=19)及正常卵巢组织(n=13)中AKT2及FN的表达,并分析AKT2和FN与上皮性卵巢癌病理学分级、临床分期的相关性.结果 AKT2主要表达在细胞质,上皮性卵巢癌中AKT2表达显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织(均P＜0.01);FN主要分布于间质,与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤比较,上皮性卵巢癌组织FN表达明显降低(均P＜0.01);且AKT2、FN表达强度与卵巢癌病理分级及临床分期密切相关(P＜0.01).两者在肿瘤中的表达呈相反的趋势.结论 AKT2表达越高,间质FN表达越低,上皮性卵巢癌浸润程度越高,越容易复发、转移.AKT2、FN的表达可作为临床判断上皮性卵巢癌恶性程度及评估预后有价值的指标.