肺癌中PI3K／AKT信号通路对Skp2调控机制的研究

目的探讨肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）／AKT信号通路对S期激酶相关蛋白2（Skp2）的调控机制。方法体外培养4种类型肺癌细胞系H460、LK2、H446和A549,经LY294002处理细胞24h后实时RT—PCR法检测Skp2基因表达变化;Westernblot检测E2F1蛋白表达变化。结果实时RT—PCR显示LY294002作用后4种肺肿瘤细胞系中skp2基因表达均下降;Westernblot结果表明在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中E2F1蛋白表达降低,肺腺癌中E2F1蛋白未表达。结论肺癌中P13K／AKT通路可在转录水平调节Skp2表达,在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中此种调节可能通过转录因子E2F1发挥作用,而肺腺癌中E2F1不参与此种调节。     

PI3K信号通路通过SKP2、p27调控肺癌细胞H446,A549增殖

目的 探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制.方法 培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化.结果 与对照组相比,处理组细胞生长速率受到抑制;Western blot结果显示H446、A549细胞中的SKP2蛋白表达水平降低,而p27蛋白表达水平升高;FCM结果表明抑制剂处理后肿瘤细胞阻滞于G1期.结论 结果提示肺癌细胞中PI3K信号通路参与SKP2蛋白的表达调控,从而影响p27蛋白的降解,促进细胞周期,加速细胞增殖.     

血清TK1、ULBP2水平预测转移性结直肠癌患者化疗效果的临床研究

目的观察血清胸苷激酶1(TK1)、UL16结合蛋白2(ULBP2)在转移性结直肠癌(CRC)患者中的表达,并分析各指标预测患者化疗无效风险的价值。方法选取81例转移性CRC患者为研究对象,患者均完成4个化疗周期。化疗结束时,评价化疗效果并分组。分别于患者入院时、化疗结束时检测血清TK1、ULBP2水平,分析血清TK1、ULBP2水平预测转移性CRC患者化疗无效风险的价值。结果81例患者化疗结束时血清ULBP2、TK1水平均较入院时降低(P<0.05)。81例转移性CRC患者经4个周期化疗后,临床缓解53例(65.43%),无效28例(34.57%)。无效组血清ULBP2、TK1水平高于缓解组(P<0.05);经二元Logistic回归分析后建立多元回归模型,结果显示,血清ULBP2、TK1过表达是患者化疗无效的影响因素(OR>1,P<0.05)。绘制ROC曲线,血清ULBP2、TK1单独及联合预测患者化疗无效的AUC均>0.80,且当二者的cut-off值分别取79.90 ng/l、5.145 pmol/l时,可获得最佳预测价值。结论血清ULBP2、TK1过表达可能提示转移性CRC患者化疗无效风险,临床可考虑在转移性结直肠癌患者化疗前检测患者血清ULBP2、TK1水平,指导早期干预计划的拟定,可能对提高化疗整体获益、促进患者良性预后意义重大。     

急诊胸痛患者床旁快速肌钙蛋白T检测结果的临床分析

目的 评价急诊胸痛患者床旁快速检测心肌钙蛋白T(cTNT)水平并探讨其与急性心肌梗死的诊断关系.方法 对急诊就诊的胸痛患者进行床旁快速心肌钙蛋白T检测并按其轻重程度进行分组,分析患者临床资料,评价急诊患者床旁快速检测心肌钙蛋白T水平与急性心肌梗死的诊断的关系.结果 胸痛患者308例入选,通过对急诊胸痛患者血清cTNT,肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK-MB),谷草转氨酶(AST)对诊断急性心肌梗死的敏感性及特异性分析,cTNT大于CK ,AST和CK-MB,当cTNT为0.112ng/ ml时,其灵敏度和特异度最高,分别为83.4 %和72.6 %.结论 急诊胸痛患者床旁快速检测cTNT对急性心肌梗死诊断的敏感性和特异性均高于心肌酶学测定,以血清cTNT为 0.112ng/ml时,其敏感性和特异性最高.     

靶向抑制ZNF281基因表达对直肠癌细胞生长抑制及化疗增敏作用的机 制探讨

目的:探讨抑制ZNF281基因表达对直肠癌细胞活力、凋亡率及5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响。方法:以LipofectamineTM 2000（Lipo2000）为载体，将siRNA转染人直肠癌Colo320细胞，Colo320细胞分为NC组（阴性对照siRNA）、si-ZNF281组（靶向抑制ZNF281表达的小干扰RNA）和si-ZNF281+5-FU组，MTT检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blotting检测β-catenin、PCNA和Survivin的蛋白表达。结果:ZNF281 siRNA转染Colo320细胞后，ZNF281表达显著低于空白组（P<0.05）。与NC组比较，si-ZNF281组细胞活力降低，凋亡率升高，β-catenin、PCNA和Survivin的蛋白表达降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与si-ZNF281组比较，si-ZNF281+5-FU组细胞活力降低，凋亡率升高，β-catenin、PCNA和Survivin的蛋白表达降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:抑制ZNF281基因表达可降低直肠癌细胞活力及诱导细胞凋亡，且可增加5-FU化疗敏感性，机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

LY294002对LK2和H460肺肿瘤细胞系细胞增殖及SKP2和p27表达的影响

目的:探讨PI3K抑制剂LY294002对肺肿瘤细胞增殖影响及其分子机制。方法:培养肺癌细胞系LK2和H460,LY294002阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;FCM分析细胞周期变化;实时RT-PCR、蛋白印迹法分别观察PI3K信号下游蛋白SKP2、p27mRNA及蛋白表达变化。结果:与对照组相比,处理组细胞生长速率受抑制,细胞周期阻滞于G1期。实时RT-PCR及蛋白印迹结果显示,LY294002处理后SKP2mRNA、蛋白表达水平均降低,2种细胞中基因降低量分别为42%和41%,蛋白降低量为65%和55%,p27mRNA表达水平增加了49%和36%,但蛋白表达水平不变。结论:肺肿瘤细胞LK2和H460中PI3K通路通过SKP2,但并不经由p27调节细胞周期,调控细胞增殖。     

原发性肺恶性黑色素瘤并类白血病反应1例

0 引言 我国黑色素瘤的发病率相对偏低,占全部恶性肿瘤的1％～3％;但近年来成倍增长,每年新发病例约2万例.原发于皮肤的恶性黑色素瘤约占50％～70％,原发灶不明黑色素瘤约10％[1].原发肺恶性黑色素瘤(primary malignant melanoma of the lung,PMML)十分罕见,仅占肺部肿瘤的0.01 ％[2-3].我院收治1例,现结合文献报道如下. 1 病例资料 患者,男,44岁.因"发热、咳嗽伴胸痛1月"为主诉,于2012年3月14日入院.血常规示:白细胞计数为45.5×109/L,红细胞计数为3.82×1012/L,血小板计数为269×109/L.骨髓穿刺诊断为类白血病反应.肿瘤标志物为CEA 87.34 u/ml,铁蛋白为1 593 ng/ml,余肿瘤标志物正常.2012年3月16日胸部CT平扫示:左下肺可见一类圆形高密度影,边缘光滑,无分叶、无毛刺,与胸膜粘连,见图1.头颅MRI和全身骨显像未见异常.经积极抗炎治疗后无好转.     

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞（LECs）增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为（66.15±2.63）%和（27.34±6.58）%,对照组为（56.73±1.35）%和（37.32±5.54）%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。     

食管癌中KIAA1522基因的转录本及蛋白表达分析

目的：检测食管鳞癌组织及细胞系中KIAA1522基因不同转录本的表达及丰度，确定其蛋白的表观分子量，为进一步研究KIAA1522在食管癌中的表达改变及功能提供实验依据。方法：使用反转录PCR（RT-PCR）及实时荧光定量PCR（qPCR）检测食管癌组织及细胞系中KIAA1522基因4个不同转录本的表达及丰度；以特异性siRNA敲降食管癌细胞中KIAA1522的表达，并在模式细胞中过表达KIAA1522，通过Western blot检测确定KIAA1522的表观分子量，并通过质谱分析验证KIAA1522条带的序列组成。结果：KIAA1522的转录本T1和T4在食管鳞癌组织及多个细胞系中均有表达，其中T1的表达丰度相对最高。Western blot检测中观察到的分子量为170 kDa的条带为KIAA1522基因特异性的蛋白表达产物，同时质谱分析结果也证实该条带为KIAA1522多肽。结论：T1为食管鳞癌组织及细胞系中KIAA1522基因的优势转录本，KIAA1522蛋白的表观分子量为170 kDa。     

葡萄糖胺抑制LL-37诱导的人脐带血管内皮细胞活化

目的探讨葡萄糖胺对LL-37诱导的人脐带血管内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)和单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant factor,MCP-1)表达的影响。方法实时逆转录聚合酶链式反应(Rea ltime RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay)分别测定ICAM-1和MCP-1的表达;Western blot法测定HUVEC蛋白的O-连接N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化程度。结果葡萄糖胺抑制LL-37诱导的ICAM-1和MCP-1在HUVEC的表达;葡萄糖胺诱导内皮细胞蛋白的O-GlcNAc修饰;葡萄糖胺抑制LL-37诱导的ERK磷酸化。结论葡萄糖胺通过抑制ERK的活化抑制LL-37诱导的ICAM-1和MCP-1的表达。