C/EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究

目的 构建GST-C/EBPa融合蛋白表达载体,并在大肠埃希茵(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-C/EBPa为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化E-coliDH5α筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPa全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了C/EBPa原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPa蛋白和研究C/EBPa的生物学功能奠定了基础.     

原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化E.coliDH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coliBL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果双酶切获得1300bp片段,证明RUNX3片段被成功导入pGEX-4T-2,并在测序后与GenBank进行同源性比对,比对进一步证实原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3构建成功,并用IPTG诱导,SDS-PAGE方法证实了GST/RUNX3融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。     

伴ETO或CBFβ阳性的急性髓细胞白血病患者c-kit基因突变的检测及意义

目的:探讨伴AML1-ETO或CBFβ-MYH11阳性的急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者c-kit基因突变情况及其临床意义。方法:采用PCR结合测序的方法,对38例伴AML1-ETO或CBFβ-MYH11阳性的急性髓细胞白血病患者骨髓中c-kit外显子17的突变情况进行检测,并与患者的临床资料、实验室特征及预后的相关性进行综合分析。结果:38例患者中12例检测到c-kit外显子17突变,突变率为31.6％,其中7例为D816V突变,5例为N822K突变,两种突变类型患者的临床资料无显著差异（P>0.05）,突变组骨髓原始细胞比例明显高于野生组（P<0.05）,突变组与野生组患者的年龄、性别、WBC、RBC、PLT和HGB比例无明显差异（P>0.05）。c-kit突变组和野生组化疗后完全缓解率和复发率无统计学差异（P>0.05）,但c-kit突变组的死亡率显著高于野生组（P<0.05）。结论:AML1-ETO或CBFβ阳性的AML患者c-kit D816V和N822K突变常见,突变患者预后差,骨髓原始细胞比例较高,c-kit基因突变检测对患者的治疗和预后有重要意义。     

儿童急性髓系白血病免疫表型特点分析

目的:分析儿童急性髓系白血病(AML)免疫表型特征,探讨其临床意义.方法:采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门方法,对127例儿童AML患者幼稚细胞进行免疫表型检测,对抗原表达情况进行分析.结果:在127例儿童急性髓系白血病患者中,髓系特异性抗原CD33、CD13和CD117的表达最常见,分别达95.3%、90.6%、90.6%.造血干/祖细胞抗原CD34、HLA-DR、CD38阳性率分别达53.5%、71.6%和97.6%.有65.4%的病例伴有淋系抗原的表达,其中以CD56的表达最常见占38.6%,其次为CD7占21.3%.有淋系抗原表达(LymAg+)患者早期抗原CD34和HLA-DR抗原表达阳性率明显高于无淋系抗原表达(LymAg-)患者(P<0.05).结论:免疫分型对儿童AML的诊断和不同亚型鉴别具有重要意义.     

环状RNA与造血及血液肿瘤关系的研究进展

环状RNA（circular RNA,circRNA）是一类非编码RNA,广泛分布于细胞中,其具有保守序列及特殊的反向剪接成环的结构特点,使其在细胞中稳定表达,同时具有组织特异性。随着转录组测序技术的发展,越来越多的circRNA被发现,同时circRNA的功能也逐渐被了解证实,使其得到更多的关注,尤其在肿瘤疾病中的研究越来越广泛。circRNA通过不同途径调节基因的表达,影响疾病发生发展,对造血与血液肿瘤的影响也逐渐被揭示。本文论述了circRNA的产生、结构特点与功能,以及其与造血及血液肿瘤的关系。     

人pEGFP-PKARⅡβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RⅡβ(PKARⅡβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARⅡβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARⅡβ编码序列,用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,亚克隆至含有GFP标...     

组蛋白脱乙酰化酶GST-HDAC1融合蛋白载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 构建GST-HDAC1融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法以质粒pcDNA3.1- HDAC1为模板进行PCR,通过EcoR1单酶切位点将HDAC1插入p GEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并转化点coli DH5 α,通过利用载体上的BamH1酶切位...     

GST/RIPX融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

目的 构建GST/RIPX融合蛋白基因表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1.RIPX为模板,通过BamH1和Xho1酶切位点将RIPX定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并转化E.coil DH5а,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入化E.eoli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达.鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并用SDS-PAGE方法证实了GST/RIPX融合蛋白的表达.结论 成功构建了RIPX原核表达载体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化RIPX蛋白和研究RIPX的生物学功能奠定了基础.     

儿童与成人急性B淋巴细胞白血病免疫表型的差异分析

目的:对儿童和成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫表型存在的差异进行分析,探讨不同年龄段B-ALL分型特征和临床意义。方法:以260例儿童和127例成人B-ALL患者为研究对象,使用流式细胞术对患者初发时骨髓标本进行免疫表型检测,分析抗原表达情况。结果:在全部B-ALL患者中B系抗原阳性率高的抗原有CD19,CD22,CD79a,分别达到了100%,99.73%,99.19%;而成熟B系抗原CD20和cIgM阳性率为31.27%和21.29%,阳性率较低。 CD10的阳性率为94.88%,在成人组和儿童组中存在明显差异,儿童组明显高于成人组(P＜0.05)。造血干/祖细胞抗原CD34、HLA-DR、CD38、cTdT阳性率分别为76.82％、98.38％、98.92％和92.72%,其中儿童患者CD34明显低于成人患者(P＜0.05)。髓系相关抗原CD33、CD13和CD15的表达最常见,分别达20.49％、20.49％、7.01％,其中CD33和CD15在儿童组中阳性率明显低于成人组(P＜0.05)。结论:免疫分型对儿童与成人B-ALL的诊断和微小残留病检测方案选择具有重要意义。     

WT1基因在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的:探讨WT1(Wilms tumor gene 1)基因在儿童急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测77例初诊B-ALL患儿WT1基因的相对表达水平,比较患者年龄、性别、流式亚型、染色体核型、临床危险分级等因素的基因表达差异,并随访分析初诊WT1基因表达水平对患儿预后的影响。结果:77例初诊B-ALL患者中,WT1基因阳性率96.10%（74/77）,0~2岁患儿初诊WT1水平高于3~13岁组（P=0.02）,WT1基因表达在性别上无统计学差异（P=0.229）。在对B-ALL流式亚型间WT1的分析中显示,Pro-B-ALL患者表达量最高,Pre-B-ALL次之,Com-B-ALL最低（两两比较差异,P值分别为0.002,0.008,0.040）。临床高危（P=0.041）、t(4;11）（P=0.034）、初诊白细胞大于50×109/L（P=0.009）的患者有更高的WT1表达。首次诱导化疗后细胞形态学缓解与否,其初诊时WT1表达无明显差异（P=0.84）,但长期随访得到持续缓解的患者初诊WT1表达低于复发或不缓解的患者。结论:WT1基因在儿童B-ALL中表达的高低可能提示患者白血病细胞的分化水平,并与长期预后相关。