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1.
2.
3.
目的 :构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并在哺乳动物细胞COS 7和Rlc310中进行瞬时和稳定性表达。方法 :从含hIL 18基因的中介载体 pGEM TEasy( pGEM T/hIL 18)中 ,以限制性内切酶酶切方法获得目的片段 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3.1( )中。以脂质体法转染COS 7和Rlc310细胞 ,用RT PCR检测IL 18mRNA的水平 ,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果 :构建了hIL 18基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并可在哺乳动物细胞中瞬时、稳定表达 ,获得了可稳定表达hIL 18基因的Rlc310细胞株。结论 :pcDNA3.1/IL 18的构建及表达 ,为IL 18抗肿瘤作用的研究奠定了基础 相似文献
4.
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人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达 总被引:6,自引:1,他引:6
目的 构建HPV 18 L1-E6,L1-E7嵌合基因的表达载体,并在CHO细胞中表达。方法 克隆HPV18 L1-E6和L1-E7基因,插入中介载体pGEMT-Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法,突变L1-E6,L1-E7基因序列中与转化作用相关的位点,分别与L1基因连接后插入真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX-1L1 E6Mxx,L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法,转染CHO细胞,以抗HPV-18L1,抗E6和抗E7特异性单克隆抗体(mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果 ELISA检测显示,转染各种pVAX1-LIE6Mxx-L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P-N值均>2.1;免疫细胞化学检测,在胞浆,胞核可见棕黄色颗粒。结论 我建的pVAX1-L1E6Mxx-E7Mxx融合蛋白质表达质粒,可在转当细胞内表达相应的L1-E6Mxx和L1-E7Mxx蛋白,为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
6.
Objective. To investigate the anti-tumor effects of human single chain interleukin-12 (hscIL-12).``Method. pcDNA/ hscIL-12 recombinant was transfected into human hepatic carcinoma cells (7721 cells)by lipofectin method. The 7721/hscIL-12 cells which secrete hscIL-12 stably, were obtained via G418 selection, and in vitro the influence of hscIL-12 gene transduction on the growth of tumor cells was evaluated by cell cycle analysis. In vivo, genetically engineered 7721 cells (7721/hscIL-12, 7721/pcDNA) and parental cells were implanted into BALB/c nude mice, respectively. 7721/pcDNA and 7721/hscIL-1 2 groups were divided into two sub-groups on day 8: one was administered with hPBL twice, 6 days at interval; the other was given equal volume of PBS. Mice were sacrificed on day 26, and spleens and tumors were taken out for histologic assay.``Results. hscIL-12 produced stably by 7721/hscIL-12 cells had bioactivity, and it was proved by Western blot, immunocytochemistry, and in situ hybridization. In vitro, compared with 7721 and 7721/pcDNA, the 7721/hscIL-12 grew much more slowly. FACS assay showed apparent Gl arrest of 7721/hscIL-12 cells. In animal experiment, on day 8 after inoculation, the tumors of 7721 and 7721/pcDNA group were up to 5 ~ 7mm,while those of 7721/hscIL-12 group were 2 ~4mm. When treated with hPBL, the tumor of 7721/hscIL-12 group disappeared completely. Histologically, the tumors from 7721/hsclL-12 without hPBL treatment had numerous lymphocyte infiltration, the tumor cells displayed depression looking, atrophy, focal necrosis and apoptosis, whereas the tumors of 7721 and 7721/pcDNA groups grew thrivingly.``Conclusion. hscIL-12 transduced 7721 cells could induced significant antitumor immune response which resulted in tumor regression totally when the hPBL was inoculated, and also hscIL-12 has certain effects on mice immune svstem. These findings suggest that hscIL-12 and hscIL-12 gene therapy might have promising prospects in clinical application. 相似文献
7.
Objective Toinvestigatewhichofthetwoimmunoglobulin (Ig ) likedomains ,immunoglobulinvariableregionhomologousdomainIgV (hB7 1IgV) ,orimmunoglobulinconstantregionhomologousdomainIgC (hB7 1IgC)onhumanB7 1moleculecontainthereceptorbindingsites ,andtoevaluateiftheB7 1m… 相似文献
8.
抗HPV16L1 IgY抗体的制备及活性检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 制备出高特异性的抗HPV16L1 IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法.方法 用纯化HPV16 L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性.结果 3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10 240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1 结合.结论 采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据. 相似文献
9.
目的 研究微量元素硒 (Se)与胎儿脑海马区神经元原癌基因c-fos蛋白表达之间的关系。方法 在陕西省缺碘 (I)低硒区 (宜君县 )缺碘高硒区 (紫阳县 )及对照区 (临潼县 )共采集 5 1例脐血进行微量元素Se、I的检测 ,并在以上 3地共解剖孕 2 0~ 37周的水囊引产胎儿胎脑 2 0例 ,通过免疫组化学法检测胎脑海马区神经元原癌基因c -fos蛋白产物的表达。结果 3地I水平无显著性差异 ,Se水平有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,以紫阳为最高 ,宜君为最低 ;紫阳c-fos蛋白表达较强 ,与宜君相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 Se的水平可能影响胎脑海马区神经元c -fos蛋白的表达 ,并进而影响胎儿神经系统及智能的发育 相似文献
10.
目的分析伴有软骨基质分泌的乳腺化生性癌的临床病理学特征、免疫组化标记特点及其组织起源。方法收集5例伴软骨基质分泌的乳腺化生性癌的临床及随访资料,观察组织病理形态学及免疫组化标记,并对相关文献进行复习。结果5例患者年龄37~48岁,组织标本切面灰黄或灰褐色,结节状,界限尚清。镜下见肿瘤细胞围绕软骨粘液样或透明软骨样基质呈巢状,条索状排列,密集的瘤细胞可聚集于周边,中央区细胞稀疏,周边肿瘤细胞向基质移行中无梭形细胞肉瘤样成份。免疫组化结果显示,5例均同时表达CK、Vim及S-100,但不表达ER、PR、Her-2。结论伴有软骨基质分化的乳腺化生性癌是一种罕见肿瘤,具有特征性的病理组织形态和免疫表型,临床过程与普通非特异性浸润性乳腺癌无异。 相似文献