miR-146b-5p对胶质瘤TJ905细胞生长的抑制作用及其机制探讨

  目的  在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中观察miR-146b-5p对MMP16的调控作用及其对细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响。  方法  分别用无义序列表达质粒(对照组)和miR-146b-5p表达质粒(P-miR-146b-5p组)转染TJ905细胞, 用qRT-PCR和Western blot检测两组细胞miR-146b-5p的表达水平及MMP16 mRNA和蛋白的表达水平, 用体外迁移侵袭实验及流式细胞术检测转染细胞迁移、侵袭、细胞周期分布和凋亡水平, 并分析这些变化的相互关系。  结果  与对照组相比, p-miR-146b-5p组MMP16 mRNA和蛋白表达量明显降低, 二者间呈正相关且均与miR-146b-5p表达量呈负相关。p-miR-146b-5p组侵袭和迁移细胞数均明显低于对照组, 并均与同组MMP16蛋白表达量呈正相关; 而凋亡水平明显高于对照组, 并与同组miR-146b-5p表达量呈正相关, 但两组细胞周期时相分布无显著性差异。  结论  miR-146b-5p是胶质瘤的抑瘤miRNA; 补充外源性miR-146b-5p可促进胶质瘤细胞凋亡, 并通过抑制靶基因MMP16表达阻止其侵袭迁移; 提示miR-146b-5p在恶性胶质瘤基因治疗方面具有重要的潜在应用价值。      

不同级别人胶质瘤组织中miR-10b表达变化的研究

背景与目的:人miR-10b编码基因位于染色体2q31HOXD8基因之间,有研究显示其特异性地高表达于多种肿瘤中,并与肿瘤的侵袭、迁移和远距离转移有关。本研究对不同级别胶质瘤组织及非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平进行检测和比较。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术检测56例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平。结果:对照脑组织及WHOⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤组织中miR-10b阳性标记指数(LI%)分别为36.87±20.63、18.86±14.04、12.13±11.56及4.93±6.45,4组间差异均有显著性(P<0.05~0.001),miR-10b LI%与肿瘤的良恶性分级呈显著负相关(rs=-0.61,P<0.001)。结论:miR-10b的表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关。     

miR-218对胶质母细胞瘤细胞成熟分化的影响

  目的  观察miR-218对胶质母细胞瘤细胞系成熟分化的影响。  方法  通过质粒转染和G418筛选建立稳定过表达miR-218的SNB-19亚细胞系及对照亚细胞系。利用qRT-PCR及Western blot检测稳定细胞系中miR-218、CD133及Nestin表达水平。用GFAP免疫细胞化学染色评价其成熟分化水平,通过免疫荧光观察转染miR-218表达质粒后CD133及Nestin阳性细胞的分布情况。  结果  过表达miR-218的亚细胞系中miR-218、CD133及Nestin表达水平分别是对照细胞的26.23倍、17.9%及54.2%,过表达miR-218细胞的GFAP阳性标记指数为（96.0±3.81）%显著高于对照细胞（49.6±5.13）%（t=16.24,P < 0.01）。免疫荧光显示CD133及Nestin的下调特异性发生于成功转染miR-218表达质粒的细胞。  结论  miR-218可通过促进胶质瘤干细胞的成熟分化显著下调CD133及Nestin的表达水平,该作用可能是miR-218抑制胶质瘤细胞增殖的重要机制之一。      

胶质瘤miR-29c 表达异常减少及其对肿瘤细胞增殖的影响*

目的:探讨microRNA- 29c（miR-29c）在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42（CDC 42）的调控作用和对细胞增殖的影响。方法:用锁定寡核苷酸原位杂交法和免疫组织化学法检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29c和CDC 42的表达水平，实时荧光定量RT-PCR、Westernblot及MTS 法分别检测U87MG细胞中miR-29c 瞬时表达、CDC 42mRNA和蛋白表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响。结果:各级别胶质瘤的miR-29c 表达水平均明显低于非肿瘤对照脑组织，且随肿瘤级别升高而显著降低，各组间的差异均有统计学意义（P<0.001）。 而CDC 42表达水平则呈相反趋势，其表达水平随胶质瘤良恶性级别增加相应升高，除Ⅰ～Ⅱ级组与非肿瘤对照组之间外，其余各组间的差异均有统计学意义（P<0.001）。 与对照组相比，miR-29c 转染组的CDC 42mRNA（P<0.001）和蛋白表达水平（P<0.01）均明显降低。miR-29c 转染组细胞的增殖能力明显低于U87MG空白对照组和Scr转染组（P<0.05）。 结论:miR-29c 是胶质瘤的抑瘤miRNA，其表达水平可作为评价胶质瘤良恶性级别的重要参考指标。miR-29c 在胶质瘤中表达减少解除了其对靶基因CDC 42转录后水平的抑制作用，并导致肿瘤细胞无限增殖。表明miR-29c 表达异常减少可能是引起胶质瘤发生、发展的关键事件。      

miR-29a对胶质瘤细胞CDC42表达及迁移和侵袭的影响

  目的  探讨胶质瘤miR-29a与CDC42表达的相互关系及其对肿瘤细胞侵袭迁移的影响。  方法  采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术, 检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29a的表达水平, 采用qRT-PCR、Westernblot及Transwell培养, 分别检测U251及其稳定表达miR-29a和无义对照序列的亚细胞系(U251-miR-29a及U251-scr)miR-29a、CDC42 mRNA及蛋白的表达及其迁移和侵袭能力, 并分析其相互关系。  结果  各级别胶质瘤miR-29a表达水平均显著低于对照脑组织, 并随肿瘤级别升高而减少, 差异均有统计学意义(P < 0.01)。U251-miR-29a的miR-29a表达量明显高于U251和U251-scr(P < 0.001), 其CDC42 mRNA和蛋白表达量明显降低(P < 0.05);CDC42 mRNA与其蛋白表达量呈正相关(r=0.834, P < 0.01), 而与miR-29a表达量呈负相关(r=-0.979, P < 0.01)。U251-miR-29a的迁移和侵袭能力明显低于U251和U251-scr(P < 0.001), 并均与CDC42蛋白表达量呈正相关(r=0.828, P < 0.01)。  结论  miR-29a表达水平是评价胶质瘤良恶性的重要参考指标, 胶质瘤细胞miR-29a表达异常减少是CDC42上调及迁移侵袭能力增强的重要因素, 补充外源性miR-29a可抑制靶基因CDC42表达, 阻止其侵袭迁移, 提示恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值。      

卡铂对比顺铂联合第三代化疗药一线治疗晚期NSCLC的Meta分析

背景与目的:卡铂与顺铂在治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的疗效是否相同目前并没有明确的证据,本研究旨在探讨卡铂为基础联合第三代化疗药物与顺铂为基础联合第三代化疗药物的两药方案一线治疗晚期NSCLC的差异.方法:通过计算机检索Medline(1954-2010年5月)、Central(the cochrane central register of controlled trials)(2010 issue3)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1978-2010年5月)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2010年5月)、万方数据库(1950-2010年5月)等,收集国内外公开发表的关于卡铂对比顺铂联合第三代化疗药物的两药方案一线治疗晚期NSCLC的随机对照研究(RCT),应用统计软件Stata 11.0进行数据分析.研究人群为晚期NSCLC(ⅢB～Ⅳ期):干预措施为顺铂或卡铂联合第三代化疗药物(包括:紫杉醇、吉西他滨、多西他赛)一线治疗晚期NSCLC的两药方案;结局指标为死亡率、客观反心率和药物毒性,并分别以风险比(hazard ratio,HR)、优势比(odds ratio,OR)及各自的95%可信区间(95%CI)作为效应指标对结局进行比较.Galbraith或L'abbe作图法及Q统计量的I检验来检测各研究间的统计学异质性,双侧P<0.05为各研究间存在明显的异质性.采用Begg和Egger法对发表偏倚进行量化检测.结果:最终纳入分析的文章5篇,共2 330例患者,其中卡铂组1 161例,顺铂组1 169例.接受卡铂为基础化疗方案的患者较顺铂为基础化疗的患者在治疗随访期间有更高的死亡风险,结果接近有统计学意义(HR=1.10,95%CI:1.00～1.21,Z=1.96,P=0.05);卡铂为基础化疗方案较顺铂为基础的化疗方案在客观反应率方面不同,顺铂组优于卡铂组(OR=0.80,95%CI:0.66～0.95,Z=2.48,P=-0.013);卡铂为基础的化疗方案易出现血小板降低(OR=2.13,95%CI:1.56～2.92,Z=4.72,P=0.000),顺铂方案易出现化疗相关的恶心呕吐(OR=0.49,95%CI:0.38～0.62,Z=5.70,P=0.000)及肾毒性(OR=0.40,95%CI:0.17～0.97,Z=2.03,P=0.042).结论:卡铂为基础联合第三代化疗药一线治疗晚期NSCLC的化疗方案在生存率及客观反应率方面并不优于顺铂为基础的化疗方案.卡铂为基础的化疗方案血液系统毒性发生率较高,而非血液系统毒性发生率较低.