实时荧光定量端粒重复扩增法检测大肠癌患者单个核细胞端粒酶基因表达

目的 研究大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)端粒酶基因表达与临床病理的关系.方法 用实时荧光定量端粒重复扩增法(RTQ-TRAP)检测71例大肠癌和20例良性大肠疾病患者,以及25名健康人PBMC端粒酶基因表达,同时检测大肠癌患者血浆癌胚抗原(CEA)含量.结果 71例大肠癌患者中,50例端粒酶基因表达阳性,阳性率70.4%;20例良性大肠疾病表达阳性1例,阳性率为5.0%,大肠癌组与良性大肠疾病组和健康对照组的PBMC端粒酶基因表达差异有统计学意义(χ2=24.521,P<0.001).大肠癌患者在不同性别(χ2=0.114,P=0.736)、年龄(χ2=0.113,P=0.735)、肿瘤部位(χ2=1.523,P=0.677)、Dukes分期(χ2=2.282,P=0.320)间的端粒酶基因表达差异无统计学意义.71例大肠癌患者PBMC端粒酶基因表达阳性率与CEA阳性率(63.4%)比较,差异无统计学意义(χ2=2.286,P=0.125).结论 RTQ-TRAP是一种快速、准确、定量检测端粒酶基因表达的方法,大肠癌患者PBMC端粒酶活性是一项有效的辅助诊断大肠癌的分子标志.     

脐血红细胞生成素与红细胞免疫功能的关系

为了探讨胎儿脐血及成人外周血中红细胞生成素(EPO)对红细胞在体外的支持作用,我们对脐血与成人外周血的EPO及红细胞免疫功能进行对比研究,为临床脐血移植及脐血红细胞的输注提供依据。材料和方法1材料1．1脐血:用密闭式采血法,取22例本院足月顺产新生儿脐血(一次性无菌塑料袋采血法),用5ml ACD-A抗凝,控制     

1∶49枸橼酸钠抗凝剂在临床输血检验中的应用

目的:研究1∶49枸橼酸钠抗凝剂在血型鉴定、抗体筛查、临床交叉配血和输血传染性指标检测中的应用。方法:配制不同浓度的枸橼酸钠比例,确定最大抗凝比例,取68例标本分别用EDTA-K2、肝素钠和1∶49枸橼酸钠抗凝,分别用来鉴定血型和做抗体筛查,最后用聚凝胺法及微柱凝胶卡式法交叉配血检测不同抗凝剂对交叉配血的结果的影响。同时,取乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(HCV)、艾滋病抗体(HIV)、梅毒抗体(TP)各30例阳性标本,采用化学发光方法进行检测,观察1∶49枸橼酸钠抗凝管对检测HBsAg、HCV、HIV、TP的影响。结果:1∶49的枸橼酸钠抗凝管能达到抗凝效果,对血型鉴定、抗体筛查、交叉配血结果没有影响,与不抗凝采血管对HBsAg、HCV、HIV、TP阳性标本进行检测比较,2种采血管对结果的影响差异无统计学意义(P0.05)。结论:1∶49枸橼酸钠抗凝剂能提高临床交叉配血、输血前检查相关传染性指标检测的快速性和准确性。     

1例嵌合型Klinefelter综合征患者细胞与分子遗传学研究

目的:观察嵌合型Klinefelter综合征的外周血染色体、Y染色体上SRY基因和AZF基因微缺失发生情况。方法:对1例嵌合型Klinefelter综合征患者及父母进行外周血染色体核型分析,确定9个实验用序列标签位点(STS),分别是:sY84、sY86、sY127、sY129、sY134、sY254、sY255、sY242、sY152,同时检测SRY基因,并以X/Y连锁锌指蛋白基因(ZFX/ZFY)为内对照进行多重PCR筛查AZF微缺失。结果:患者核型为46,XY/47,XXY/48,XXYY/49,XXXXY,其中48,XXYY占56%;47,XXY占30%;46,XY占12%;49,XXXXY占2%,患者父母核型正常;患者及父母SRY基因检测与染色体性别一致,患者检出Y染色体AZF微缺失,缺失位点为sY86和sY127,缺失类型为AZFa+AZFb缺失。结论:Klinefelter综合征患者存在Y染色体AZF微缺失,染色体核型分析和Y染色体AZF微缺失是Klinefelter综合征患者重要的遗传检测指标。     

基于问题学习教学法在临床输血教学中应用研究

目的:评估基于问题学习(PBL)教学理念在临床输血教学中的应用。方法:研究对象为武汉大学2011和2012级检验系30名本科生。选取2012级学生作为试验组,运用PBL教学方式;2011级学生作为对照组,运用传统授课为基础(LBL)教学方式。其中,试验组学生17名,对照组13名。课程结束后,运用问卷调查和理论考试相结合的方式对应用效果进行综合评价。结果:试验组理论考试平均(88.6±9.8)分,对照组平均(77.4±10.1)分。试验组相比对照组,问卷调查得到的好评率、学生考试成绩均显著增加。结论:在临床输血教学中,PBL教学法取得了不错的效果,获得了广大师生的好评,在激发学生自主学习的热情,将基础知识用于临床实践等方面具有明显的优势,值得发展和推广。     

人POT1基因实时荧光PCR相对定量法的建立

目的：建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测人POT1基因的方法。方法：依据人POT1基因及参照基因TBP基因序列设计引物,以人类乳腺癌细胞系MCF-7总RNA逆转录合成的cDNA为模版,以TBP基因为参照基因,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测POT1基因的表达。结果：POT1和TBP基因熔解曲线为单峰,无杂峰及二聚体。POT1基因及参照基因TBP基因扩增效率相同（直线斜率0．0171〈0．1）。POT1基因批内变异与批间变异分别为1.3％和2.1％;TBP基因批内变异与批间变异分别为1．2％和2．6％。结论：建立了SYBR Green Ⅰ实时定量检测人类POT1基因的方法,该方法简单快速,经济,灵敏度高,特异性和重复性好,可用于人类POT1基因的定量分析。     

HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病相关性的研究

目的探讨HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的关联性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对154名湖北汉族ALL患者(ALL组)和181名健康人(对照组)进行HLA-DRB1等位基因分型。结果ALL组HLA DRB112基因频率显著高于对照组(15.58%vs10.50%,χ2=4.27,RR=2.24,P<0.05),而HLA DRB107基因频率显著低于对照组(7.79%vs12.7%,χ2=4.57,RR=0.55,P<0.05)。结论HLA-DRB112等位基因可能对湖北汉族ALL有遗传易感作用,而HLA-DRB107等位基因可能对湖北汉族ALL患者有遗传拮抗作用。     

免疫磁珠法在预测胎儿RHD血型中的应用

目的:探索应用免疫磁珠法富集母体外周血DNA并预测其胎儿RHD血型。方法:采集96例来自武汉大学中南医院产前诊断确诊为RHD阴性孕妇外周血,使用免疫磁珠法和血液DNA提取试剂盒(QIAgene DNA法)抽提母体外周血DNA用以提取胎儿DNA。通过测定母体血浆中的SRY和STR来证实是否获得胎儿DNA,同时使用荧光定量PCR(RQ-PCR)扩增胎儿RHD基因外显子7,预测胎儿RHD血型。结果:通过免疫磁珠法,胎儿DNA的总提取量提高了1.8倍。配对四格表2检验结果显示免疫磁珠法在准确度方面与QIAgene DNA法相较,妊娠早期(≤14周)2种方法差异有统计学意义(P0.05),而妊娠中晚期(14周)2种方法差异无统计学意义。另外,使用免疫磁珠法提取DNA预测胎儿RHD血型时,有86例结果与胎儿RHD血清学方法鉴定一致,使胎儿RHD血型预测的准确率高达89.6%。结论:使用免疫磁珠法提取胎儿DNA不仅能够改善胎儿DNA的总提取量,同时还可以提高妊娠早期胎儿RHD血型预测的准确率,为RHD血型不合导致的新生儿溶血病的早期诊断和治疗提供更好的试验基础。     

白细胞过滤器在临床输血中的应用

目的观察白细胞过滤器过滤库存全血或红细胞前后血液质量变化,及其防止非溶血性输血反应的临床效果.方法将全血或红细胞用白细胞过滤器滤除白细胞,取过滤前后的血液标本进行质量检测,过滤后的去白细胞血液,应用于以往有输血反应的28例患者,并观察临床非溶血性输血反应情况.结果用白细胞过滤器过滤后,白细胞滤除率99.6%,血小板滤除率77.0%,红细胞回收率96.3%,凝血因子、红细胞脆性无显著变化(P＞0.05),非溶血性输血反应发生率为1.7%,较应用前非溶血性输血反应发生率为41%明显降低,两者比较有显著性差异(x2=55.38,P＜0.01).结论说明白细胞过滤器前后血液质量没有明显变化,能显著降低非溶血性输血反应的发生率.