p38MAPK基因诱导胶质瘤细胞凋亡

目的 研究p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6后对其生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入大鼠胶质瘤细胞系C6中,用免疫细胞化学染色检测其在细胞转染前后的表达情况,用HE染色、流式细胞仪等方法研究其对细胞形态、粘着状况和生长周期的影响。结果 转染pCMV5-P38MAPK质粒组p38MAPK蛋白表达阳性,细胞形态发生变化,贴壁性降低,出现大量凋亡细胞。结论 转染p38MAPK基因可诱导胶质瘤细胞凋亡。     

Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响

目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察细胞凋亡及比率。采用免疫细胞化学染色法检测Ki67、CyclinD1、p53的表达。结果转染Axin基因使细胞周期在G1期阻滞;细胞增殖能力和细胞克隆形成能力均显著降低;细胞凋亡率增高;Ki67及CyclinD1低表达,p53高表达。结论转染Axin基因后胶质瘤细胞出现了一定的增殖抑制现象,诱导细胞凋亡,Axin基因可能通过上调p53基因表达和下调Cy-clinD1表达而抑制胶质瘤细胞的生长。     

p38MAPK gene transfection induced the apoptosis of rat glioma cells C6

Thephosphorylationanddephosphorylationofproteinisoneofthemostimportantmechanismsofcellularsignaltransduction.Theconjugationofphos-phoricacidresiduesandspecificaminoacidresiduesofproteiniscatalyzedbyproteinkinases.Seriesofproteinkinasesandtheirphosphorylationmakeupthecascadereactionofsignaltransduction.Mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)signalpathwayisahotpointinrecentyears.Ithasbeenidentifiedthat4signalpathwaysareineukaryoticcells:extracellularsignal-regulatedproteinkinase(ERK)，c-JunN-te…     

内外源性p53诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16蛋白的表达

目的:探讨内外源性野生型p53是否可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16表达.方法:在大鼠胶质瘤细胞C6中,分别转染pEGFP-C3-wt p53或以400ng/ml表阿霉素诱导内源性野生型p53表达,于处理后0h.4h、8h、16h、26h、32h和52h收集细胞爬片、固定后免疫细胞化学检测p53蛋白与RGS16蛋白表达.结果:转染pEGFP-C3-wt p53后4h、8h、16h、26h和32h时均检测到p53蛋白表达,在8h和16h时检测到RGS16蛋白表达;在400ng/ml表阿霉素处理后,仅在26h时检测到p53表达而始终未见到RGS16蛋白表达.结论:内外源性野生型p53可以诱导大鼠胶质瘤细胞G6 RGS16蛋白的表达.     

UV通过p38MAPK促进大鼠胶质瘤C6细胞凋亡

目的：探讨p38MAPK在紫外线损伤刺激细胞中的特异性信号转导作用。方法：流式细胞仪检测紫外线照射30min后1，2及4h的C6细胞周期变化和是否有凋亡发生；应用免疫细胞化学技术观察紫外线刺激前后p38MAPK在C6细胞中的表达强度和分布特征。结果：细胞周期结果显示1，2和4h后C1期细胞数分数各增多0．12，0．21和0．19，而S期细胞数分数减少0．10，0．14和0．15；各组的凋亡率分别是12％，49％和34％；未受刺激的细胞中，p38MAPK在胞质和胞核表达较弱；紫外线损伤作用2h后，细胞核区的染色强度即明显增强，而胞质区域的染色强度相对降低。结论：C6细胞受紫外线损伤后可通过p38MAPK通路发生凋亡。     

p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK和RGS16基因分别或共转染导入C6细胞中；用p38MAPK抑制剂SB-202190处理处于对数生长期的转染和未转染p38MAPK的C6细胞，24-36h后在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况；免疫细胞化学法检测转染前后p38MAPK和RGS16蛋白的表达情况；流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生。结果 转染pCMV5-p38和/或pCMV5-RGS16质粒36h后30%细胞贴壁性降低。突起收缩，细胞变圆；p38MAPK和RGS16蛋白均表达阳性；转染pC-MV5-p38组出现33.8%的凋亡峰，细胞周期结果显示G1期细胞百分数增加17%，而S期细胞百分数减少14%；转染pC-MV5-RGS16组无凋亡发生，细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少10%，而S期细胞百分数增加14%；共转染pCMV5-P38和pCMV5-RGS16组未出现的凋亡峰，细胞周期细胞显示G1期和S期细胞百分数变化与未处理组之间没有明显差别；但共转染p38MAPK和RGS16组出现的凋亡峰，细胞周期结果显示G1期和S期细胞百分数变化与转染pCMV5-p38组之间很接近；SB-202190处理的未转染组细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少18%，而S期细胞百分数增加18%；SB-202190能对抗pCMV5-p38对C6细胞周期的影响。结论 p38MAPK可以抑制大鼠胶质瘤C6细胞周期运行和诱导其凋亡；RGS16和SB202190有拮抗p38MAPK作用，并且可以促进C6细胞增殖。     

转染热休克蛋白70对p38MAPK信号通路的影响

目的：探讨热休克蛋白（HSP70）在人胶质瘤细胞BT-325p38MAPK信号通路中的作用。方法：用脂质体介导法将hsp70基因导入人胶质瘤细胞BT-325中，倒置显微镜观察转染细胞的形态学及粘附性变化，紫外线照射30min后，采用免疫组化和Western-blot方法测定转染前后HSP70的表达水平及照射前后p38MAPK表达情况。结果：免疫组化和Western-blot证实hsp70基因成功转染入BT-325中，转染细胞受到紫外线照射后p38MAPK表达减弱。结论：体外转染hsp70基因可抑制紫外线照射后BT-325细胞p38MAPK的表达。     

p38MAPK抑制剂SB-202190对大鼠胶质瘤C6细胞的双重作用

目的　探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对C6细胞生物活性的影响。方法　采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果　浓度分别为 10、2 0、4 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190能促进C6细胞的细胞周期从G1期过度到S期 ;但 6 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190却诱导C6细胞凋亡 ,凋亡率与时间呈正相关 ,透射电镜观察结果显示 ,凋亡细胞的体积缩小、细胞核浓聚缩小 ,染色质固缩聚集于核膜下 ,胞质浓缩 ,有的细胞染色质浓缩至核膜下成新月状 ;琼脂糖凝胶电泳呈现出特征性的DNA“梯状”带。结论　SB 2 0 2 190在低浓度时促进C6细胞增殖 ,高浓度时诱导细胞凋亡。     

胶质瘤中Axin基因点突变检测及表达研究

目的 检测胶质瘤中Axin基因的点突变及其表达情况，初步探讨Axin与胶质瘤发生的关系。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)技术及DNA测序方法检测Axin基因外显子8，9及10在28例胶质瘤中的突变情况；同时对上述胶质瘤及正常脑组织进行免疫组化染色。结果 在28例胶质瘤组织中Axin的第10个外显子共有6例样本(21．4％)3处发生了错义突变；3例3处发生了同义突变；28例胶质瘤中8例(28．6％)Axin表达阳性，正常脑组织中神经元表达阳性，神经胶质细胞表达阴性，检测到突变的样本中1例表达阳性。结论 Axin基因的点突变可能参与胶质瘤的发生。     

真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin的构建及其在神经胶质瘤细胞内的表达

目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:成功地构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究Axin对肿瘤的生物学作用以及Axin在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。