冷冻复苏对大鼠肝细胞代谢活性的影响

目的研究冷冻复苏对肝细胞代谢活性及细胞色素P450(CYP)mRNA表达调控的的影响,为冷冻复苏肝细胞用于实验研究提供依据。方法采用程序冷冻降温仪冷冻新鲜分离的大鼠肝细胞,1个月后复苏。实时荧光定量PCR法检测细胞CYP1A2,CYP2B1和CYP3A1 mRNA的表达;高压液相色谱-串联质谱法检测细胞内咪达唑仑α-羟基化、双氯芬酸4-羟基化和右美沙芬去甲基化的代谢产物生成量。结果肝细胞冷冻复苏后存活率与新鲜细胞无明显差异,显微镜下可见细胞贴壁并连成片状,细胞核圆而亮。冷冻复苏肝细胞中CYP1A2和CYP2B1 mRNA的诱导表达与新鲜细胞无明显差异,CYP3A1 mRNA无明显表达。与新鲜细胞相比,咪达唑仑α-羟基化代谢产物水平无明显差异;双氯芬酸4-羟基化产物约为1/2;右美沙芬去甲基化产物则增加了1倍。结论冷冻复苏对肝细胞的代谢活性有一定的影响。在药物代谢研究中须考虑冷冻复苏因素对肝细胞代谢活性的影响,以助于对实验结果做出客观和恰当的判断。     

辛伐他汀在人、食蟹猴和大鼠血浆中稳定性的种属差异

摘要：目的 建立LC-MS/MS法测定辛伐他汀在食蟹猴血浆中的检测方法学,并比较其在人、食蟹猴和大鼠3种动物血浆中的稳定性差异。     

荷叶碱在大鼠体内的绝对生物利用度研究

目的研究荷叶碱在大鼠体内的药动学特征及其绝对生物利用度。方法SD大鼠分别静脉注射（5 mg·kg^-1）和口服（20 mg·kg^-1）荷叶碱,给药后不同时间点取血,分离血浆,LC-MS/MS法测定血浆中荷叶碱的药物浓度,用DAS软件处理数据并计算药动学参数,求其绝对生物利用度。结果静脉注射荷叶碱的药动学参数：AUC（0-∞）为（1 118.24±420.90）ng·h·mL^-1,Cmax为（1 213.17±359.29）ng·mL^-1,t1/2为（1.30±0.69）h;口服荷叶碱的药动学参数：AUC（0-∞）为（3 111.34±1 986.29）ng·h·mL^-1,Cmax为（1 257.50±942.37）ng·mL^-1,t1/2为（4.89±2.88）h,tmax为（0.33±0.18）h;剂量归一法计算得荷叶碱在大鼠体内的绝对生物利用度为69.56%。结论该方法专属性强,灵敏度高,可用于荷叶碱的体内定量分析。     

离体大鼠肠道菌群对野漆树苷的代谢研究

摘 要 目的：研究大鼠肠道菌群对野漆树苷的体外代谢转化作用。方法: 将野漆树苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液在37 ℃厌氧条件下孵育,不同时间点取样经乙酸乙酯萃取后,采用HPLC-MS/MS对代谢产物进行定性和定量分析。结果: 孵育4 h后野漆树苷已被肠道菌代谢完全,在代谢组的孵育液中发现了芹菜素和柚皮素两种代谢产物,以芹菜素为主,并且在4 h达到较高浓度,随后缓慢降解,24 h后消失。结论:在离体条件下,大鼠肠道菌群对野漆树苷具有显著的代谢转化作用,提示代谢产物为其生物活性成分。     

当前新药非临床安全性评价的趋势(英文)

非临床药物安全性评价为新药的研发发挥了重要作用。人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)新药研发指南M3(R2)是非临床药物安全性评价的方向性指导文献。正确的评价策略和相关毒理学研究应该一起综合考虑,以促进新药候选物高效、及时地向前发展,从而支持临床试验计划和市场登记进展。然而,随着发展成本增加和行业的竞争,毒性预测、动物模型和法规遵从性也是新药深入研发过程中非常重要的因素。此外,ICH其他指导文献,例如ICH S6和ICH S9,也是给新药深入研发带来冲击力很大的指导文献。因此,深入理解所有这些文献的本质意义对从事新药安全评价人员来说是很重要的,增强综合使用各方面总体知识的能力将促进新药深入研发更快、更好地实施。     

DMTCCI对DNA引物酶—多聚酶α复合体活性的抑制作用及其细胞毒作用的研究

目的:研究碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(3,3'-Diethyl-9-methylthiacarbocyanineiodide;DMTCCI)对DNA引物酶-多聚酶α复合体的抑制作用,并观察其对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。方法:提取纯化艾氏腹水癌细胞DNA引物酶-多聚酶α复合体,液闪计数法测定其抑酶活性。用MTT法观察化合物对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。结果:18.5nmol/L、37.0nmol/L、111nmol/L、333nmol/L和1000nmol/LDMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制率分别为(27.9±1.3)%、(32.2±1.9)%、(39.2±1.5)%、(51.0±2.3)%和(77.8±1.8)%,其IC50值为(168.2±5.5)nmol/L。显示对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有强烈的抑制作用。MTT实验发现DMTCCI对4种肝癌细胞株Bel-7402、HepG2、Hep3B和SMMC的IC50值分别为(2.09±0.10)μmol/L、(3.84±0.08)μmol/L、(7.01±0.08)μmol/L和(4.91±0.08)μmol/L;对四种鼻咽癌细胞株HNE1、CNE1、CNE2和HK的IC50值分别为(5.27±0.03)μmol/L、(4.30±0.07)μmol/L、(1.78±0.05)μmol/L和(6.76±0.03)μmol/L;对人宫颈癌细胞株HeLa和人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的IC50值分别为(3.23±0.02)μmol/L和(0.24±0.04)μmol/L。结论:DMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有显著的抑制作用,并     

他汀类药物在高脂血症大鼠体内的PK-PD关系研究

目的:探讨他汀类药物在高脂血症大鼠体内暴露水平(药代动力学参数AUC)与药效之间的关系.方法:建立大鼠高脂血症模型,给予不同剂量的他汀类药物干预治疗,进行药代动力学和药效学测定,计算药代动力学/药效学(PK/PD)值,并进行相关分析.结果:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,Y=0.01036X-7.6445(γ=0.9599).胆固醇(CHOL)-AUC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)-AUC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)-AUC由于中间数据偏低,与预测样本数据偏差太大,线性关系不明显.结论:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,可以在知道药代动力学的相关数据基础上对药效进行预测.     

LC-MS/MS法评价卡维地洛对人肝微粒体细胞色素P450酶5种亚型的体外抑制作用

目的建立LC-MS/MS法评价卡维地洛对混合人肝微粒体细胞色素P450酶5种主要亚型(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4/5)的体外抑制作用情况。方法在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西汀O-脱乙基化(CYP1A2)、双氯芬酸4’-羟基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4’-羟基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪达唑仑1’-羟基化(CYP3A4/5)和睾酮6β-羟基化(CYP3A4/5)反应作为5种P450酶亚型代谢活性的标志,用阳性抑制剂对试验体系进行验证。建立LC-MS/MS法检测各特征性反应的代谢物生成量,并计算各阳性抑制剂与卡维地洛的IC50值。结果卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5和CYP2D6存在不同程度的抑制作用,其IC50值分别为4.3μmol.L-1(CYP3A4/5咪达唑仑羟基化反应)、5.6μmol.L-1(CYP3A4/5 6β-羟基睾酮羟基化反应)和27.2μmol.L-1;对其余3种CYP酶亚型则无显著抑制作用。结论建立的LC-MS/MS分析方法灵敏、准确、可靠,卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5具有中等强度抑制作用,对CYP2D6亦存在较弱的抑制作用。     

代谢组学及其研究策略和分析方法进展

代谢组学，研究生物体系受到内在和外在因素刺激产生内源性代谢变化的一门科学，在最近短短几年内取得了迅速发展，发表的相关科学文献和综述的数量急剧上升，但目前对代谢组学的认识和研究仍处于初期发展阶段。代谢组学主体上属于系统生物学范畴，本文基于代谢组学的复杂性、整体性和动态反应性等特点，总结代谢组学的基本概念、目标层次和解析策略，并就代谢组学生物分析策略、数据分析技术现状、发展趋势以及相应可能机制的探讨和面临的挑战等热点问题进行了简要评述。