反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.     

胃癌耐药细胞特异表达新基因的部分cDNA克隆

目的:研究胃癌多药耐药(multipledrgresistance,MDR)相关基因。方法:应用差异显示技术,对人胃癌SGC7901细胞系及其长春新硷耐药细胞(SGC7901VCR)之间的差异表达基因进行了差异显示。结果:得到3个长春新硷耐药细胞特有的差异条带的cDNA克隆,命名为VRF1,VRF2与VRF3。RNA打点杂交证实,VRF1可在人胃癌SGC7901细胞中的长春新硷耐药细胞中特异表达,而在人胃癌非耐药的SGC7901细胞中不表达,可能与SGC7901肿瘤细胞耐药性产生有一定的关系。VRF2与VRF3为无差异的假阳性条带,本实验未对其做进一步地研究。结论:经序列测定分析,VRF1未在GenBank数据库中发现其同源序列,证实为一种新的基因序列。VRF1为3′端的非编码区序列,并有一个加尾信号AATAA。该序列已被GenBank数据库收录,编号为AI00266。     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．     

Fas基因修饰胃癌耐药细胞的表达

目的将 Fas 基因导入胃癌耐药细胞,建立 Fas 基因表达耐药株,并比较转导前后 mRNA 与蛋白的表达水平。方法:采用分子克隆技术将 Fas 基因插入真核表达载体 pBK-CMV 的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将重组表达载体转染受体细胞 SGC7901/VCR,G418筛选克隆细胞,Southern blot、Northern blot、Weston blot 检测Fas 基因和 Bcl-2基因的表达。结果:成功地构建了真核表达载体 pBK-Fas cDNA;转导细胞后,从2×10~5细胞中筛选出大约120个抗性克隆,转导率大于0.5‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗生细胞,从而建立了 Fas 基因表达耐药株,我们命名为 SGC7901/VCR Fas cells;杂交结果表明,转导株与非转导株均有Fas cDNA 的表达,但转导株 Fas mRNA 及其蛋白水平的表达则显著高于非转导株。结论:在胃癌耐药细胞中 Fas基因处于低表达状态;通过脂质体介导的基因转染,Fas 基因可成功地导入胃癌耐药细胞,并能有效地增强 FasmRNA 及其蛋白的表达,为诱导细胞凋亡逆转胃癌耐药细胞的研究奠定了重要基础。     

细胞周期调节因子与肿瘤

细胞周期的演进依赖于参与调控细胞生长的一系列正负调节因子之间的相互作用。本文综述了近年来研究较多的几个调控因子,在参与细胞癌变的机理中的最新进展,旨在探讨它们与肿瘤发生的相关性。     

转录激活蛋白AP—1的研究进展

转录激活蛋白ＡＰ１存在于不同类型的细胞中，许多基因的调节区都有ＡＰ１的结合位点。ＡＰ１通过调节基因的转录，对肿瘤的引发、启动和演进具有重要的意义     

Fas基因修饰胃癌耐药细胞的表达

目的 将Fas基图导入胃癌耐药细胞，建立Fas基因表达耐药株，并比较转导前后mRNA与蛋白的表达水平。方法：采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将重组表述载体转染受体细胞SGC7901／VCR，G418筛选克隆细胞，Southern blot、Northern blot、Weston blot检测Fas基因和Bel-2基因的表达．结果：成功地构建了真核表述载体pBK-Fas eDNA-转导细胞后．从2×10^5细胞中筛选出大约120个抗性克隆，转导率大于0．5‰，随机挑选2十克隆继续筛选与扩增培养-获得了l株稳定的抗生细胞，从而建立了Fas基困表达耐药株，我们命名为SCXC7901／VCRFascells杂交结果表明,转导株与非转导株均有FaseDNA的表达，但转导株Fas mRNA及其蛋白水平的表过则显高于非转导株。结论：在胃癌耐药细胞中Fas基镯处于低表达状态;通过脂质体介导的基因转染．Fas基因可成功地导入胃癌耐药细胞，并能有效地增强FasmRNA及其蛋白的表达，为诱导细胞凋亡逆转胃癌耐药细胞的研究奠定了重要基础。