Krüppel样因子4在猪脂肪间充质干细胞成脂分化过程中的表达模式

目的探讨猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化过程中Krüppel样因子4(KLF4)的表达模式。方法采用F3代以上猪AMSCs进行成脂诱导分化,用油红O染色提取法检测成脂分化程度,用RT-PCR和Realtime PCR检测KLF4的表达模式。结果猪AMSCs成脂诱导分化,诱导3 d开始出现脂肪滴,诱导10 d时成脂分化率达60%;RT-PCR检测,在诱导分化2、4、8、12和16 d时都能检测出KLF4的表达;经Real-time PCR检测,上述各诱导分化时间点的表达量分别为对照组的1.6657±0.2269、2.6790±0.0524、2.6293±0.0280、2.3633±0.1568和2.6146±0.1575倍。这些结果表明,KLF4的表达在猪AMSCs成脂诱导分化的第2天就有显著上调,表达高峰出现在成脂分化的第4天,此后持续高表达。结论在猪AMSCs成脂分化过程中,从早期到晚期,KLF4发挥持续性的调控作用。     

3种方法诱导猪去分化脂肪细胞成肌分化效果的比较

目的 采用3种方法比较诱导猪去分化脂肪细胞（DA）成肌分化的效果，旨在筛选诱导猪DA成肌分化的较优方法。方法 采用糖皮质激素、半乳糖凝集素-1（galectin-1）法、5-氮胞苷（5-aza）分别诱导猪DA成肌分化，于培养6 d、15 d和21 d后，并分别用倒置显微镜观察分化的细胞形态；诱导21 d后用间接免疫荧光法检测成肌特异蛋白结蛋白（desmin）和肌球蛋白重链（MyHC）的表达，用Real-time PCR检测肌细胞生成素（MyoG） mRNA的表达,每种方法诱导3组，每组重复检测3次。 结果 诱导细胞的形态学观察显示，galectin-1法诱导的肌管形态最佳，多核细胞数量也最多；5-aza法次之，但诱导过程中细胞死亡率较高；糖皮质激素法诱导的细胞形态不规则，多形成放射状突起，而且出现较多成脂分化细胞。间接免疫荧光分析显示，galectin-1法和糖皮质激素法诱导的细胞Desmin、MyHC和MyoG mRNA都呈强阳性表达，而在5-aza法诱导的细胞这两种蛋白和基因都呈弱表达。 结论 从诱导细胞的肌管形态，分化的纯度，生存能力，特异蛋白和基因的表达量等综合判断，诱导猪DA成肌分化，galectin-1法优于糖皮质激素法和5-aza法。     

姜黄素对猪骨髓间充质干细胞增殖和成脂分化的影响

目的 探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制。方法 用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂分化的影响,用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测对成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ2）和脂蛋白脂肪酶（LPL） mRNA表达的影响。 结果 当姜黄素用于猪BMSCs的培养,1μmol/L浓度在培养第3天、第5天和10μmol/L浓度在培养第5天开始能够显著促进细胞增殖（P＜0.05）,但高于15μmol/L则具有显著的抑制作用（P＜0.05）;当姜黄素用于猪BMSCs的成脂诱导分化,所用不同浓度的姜黄素都能显著抑制成脂分化（P＜0.05）,用0.5μmol/L获得28.3%的抑制率,而用20μmol/L获得71.24%的高抑制率;当用20μmol/L姜黄素处理和分别诱导分化5、10和15d,PPARγ2 mRNA表达的抑制率分别达到19.11%、49.52%和76.76%,LPL mRNA表达的抑制率分别达到37.58%、49.32%和74.70%。 结论 适当浓度姜黄素具有促进猪BMSCs增殖和抑制猪BMSCs向脂肪细胞分化的作用,对脂肪细胞的分化发挥了重要调控作用。     

shRNA在抗猪瘟病毒中稳定遗传表达的研究进展

RNA干扰 (RNA interference，RNAi)是一种能特异性地介导同源基因沉默的现象，随着对其机制的深入了解，它在病毒性疾病的治疗和预防上发挥出日益重要的作用。本文介绍了RNAi的作用机制，干扰RNA载体短发夹RNA (short hairpin RNA，shRNA)及其与转基因技术结合防治猪瘟病毒的作用，并从供体细胞类型的选择、干扰RNA的设计、位置效应及RNAi脱靶效应4个方面对影响RNAi持续干扰猪瘟病毒复制的因素进行了综述。     

转基因猪体细胞核移植基因载体和供源选择的研究进展

体细胞核移植是动物转基因的常用手段。通过核移植技术获得转基因猪已经成为目前转基因猪新品种培育的主流技术,而载体和供核细胞的选择是转基因能否成功的关键,本文就这两方面的研究进展进行综述。     

猪卵巢卵母细胞体外成熟及体外受精过程中皮质颗粒变化的研究

目的　研究猪皮质颗粒在体外成熟及体外受精过程中的变化 ,以及皮质颗粒与多精受精的关系。　方法　用异硫氰荧光素联接的花生四烯酸 (FITC- PNA)标记体外成熟不同时间及体外受精不同时间皮质颗粒。　结果　皮质颗粒在猪卵母细胞体外成熟过程中逐渐由皮质部向卵质膜下迁移 ,并在质膜下排布成单层。体外成熟过程中所排出的第 1极体也被 FITC- PNA所标记 ,说明第 1极体中含有皮质颗粒。在对不同体外成熟时间的卵母细胞进行授精时发现 ,皮质颗粒的释放速度与体外成熟时间呈正比例关系。为进一步证实皮质颗粒的排放速度与多精受精之间的关系 ,还进行了精子穿透实验。结果显示 ,体外成熟 48h的卵母细胞其多精受精率为 73% ,比体外成熟36 h(83% )、2 4h(80 % )的卵母细胞要低。并且进入卵子的精子数目 (1.7)比后两者 (分别为 3.1和 2 .9)的少。　结论　多精受精率与皮质颗粒释放的速度和数量的大小有关