RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建

 【摘要】　目的　利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。方法　设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列,构建RYBP shRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素（终质量浓度8 μg／ml）筛选出稳定感染细胞。Western blot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBP shRNA组,用实时定量聚合酶链反应（PCR）进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果　慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBP shRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低（P＜0.01）,其中以shRNA2沉默效果最佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95 %以上（P＜0.05）。结论　慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。     

口服华法林与骨质疏松性骨折的关联性研究

确定口服华法林与骨质疏松性骨折发生是否有关。回顾性分析2004年3月至2015年3月收治的口服华法林患者1519例临床资料,选取基线情况适合患者4704例作为对照组,分别计算口服华法林1年、2年、3年、4年、5年及以上患者发生骨质疏松性骨折的风险优势比（OR）。口服华法林组整体骨质疏松性骨折及髋部骨折发生率均较对照组显著升高（P＜0.05）,而口服华法林5年以上的骨质疏松性骨折发生率极显著升高（P＜0.01）。长期使用华法林将使骨折风险度增高,这种效应在髋部骨折中表现尤为明显。