人肿瘤特异抗原MAGE-3基因疫苗的构建和表达

目的：克隆肿瘤特异性共享抗原mage-3基因，制备基于α－病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法：用RT-PCR方法从黑色素瘤细胞系LB373中制备mage-3基因，以含α－病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体，构建重组DNA疫苗。重组子用载体中的T7和T3启动子序列为测序引物进行自动测序。再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化293细胞，用免疫印迹法和免疫组化法鉴定转化细胞中mage-3蛋白的表达。结果：正确构建了mage-3/pSMART2a重组质粒，并且在转化此质粒的293细胞中检测出了mage-3蛋白的表达。结论：此重组mage-3/pSMART2a质粒可以作为肿瘤特异的DNA疫苗，可进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及相关免疫学效应研究。     

多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子／睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架，按一定连接方式设计、合成新抗原35肽，并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB／C小鼠。结果 在430A固相自动肽合成仪上成功地合成35肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95％以上；免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达1：6000，阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：300；小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达50％左右，淋巴细胞分泌的INF－γ和IL－4分别为60、108μg/ml；实验组BALB／c雌鼠妊娠率平均降至60％，每胎产仔数平均降低58％－71％。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫，并使小鼠受孕率下降，为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础。     

α-病毒载体在基因治疗中的作用

基因治疗是近10年来随着现代医学与分子生物学相结合而出现的，基因治疗的研究已迅速扩大到肿瘤、艾滋病、心血管病和神经系统疾病等。而且，基因载体(包括质粒、病毒和脂质体等)的研究也进展迅速，各种新型载体不断出现。近10年来，α-病毒的多个成员已经被作为表达载体，并被引入基因治疗领域，其中最常用的是森林病毒(Semliki forest virus，SFV)、     

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

目的：检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法：采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞和CD8^high T细胞表面KIR分子表达，并与正常外周血比较。结果：慢性乙型肝炎患者外周血中CD8^high T细胞KIR表达明显高于对照组CD8^high T细胞。正常外周血CD4^＋T细胞几乎不表达KIR，慢性乙型肝炎患者外周血中CD4^＋T细胞表达KIR。结论：慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。     

磁转联合脂质体实现高效细胞转染

目的优化体外培养细胞的外源基因转染方案。方法采用磁性微粒联合脂质体，将重组人绿色荧光蛋白表达载体（pAAV-IRES-GFP）外源DNA定向转染COS-7细胞，荧光显微镜下观察外源基因的表达，比较不同转染条件及DNA载量的细胞转染效果。结果DNA与Combimag按1：1的比例混合转染可以得到很高的转染效率，过高的DNA载量使转染效率减低。结论利用磁转结合脂质体可使低剂量的DNA达到快速、简便和高水平的转染。     

肿瘤疫苗的研究现状

肿瘤在体内的排斥/控制主要依赖于肿瘤抗原特异性T淋巴细胞.T淋巴细胞通过TCR与肿瘤细胞表面表达的HLA-抗原肽复合物的相互作用来识别其靶分子.与特异性HLA-抗原肽复合物有价值的相互作用诱导了淋巴细胞克隆的扩增以及一系列的免疫反应.目前,从理论上已经提出了以整个肿瘤细胞,或纯化的肿瘤抗原作为疫苗(包括整个蛋白质分子和抗原肽及纯化的DNA分子)来提高免疫系统对肿瘤的识别和排斥.本文从免疫系统对肿瘤细胞的识别、疫苗诱导的体内抗肿瘤免疫的假设机制、疫苗接种所诱导的抗肿瘤反应以及临床结果几个方面,对当前肿瘤疫苗的研究现状作一简要综述,并对肿瘤疫苗研究中尚待解决的问题作了简单的归纳.     

CTL细胞毒作用的颗粒依赖性途径

管孝鞠 (1 970 - ) ,女 ,安徽省马鞍山市人 ,博士 ,讲师 ,主要从事药学方面的研究 ,发表论文 2 0篇。电话 :(0 2 3) 68752 2 36细胞毒Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)是机体防御细胞内感染的主要成员之一 ,分为ＣＤ8+ＣＴＬｓ、ＣＤ4+ＣＴＬｓ和双阴性ＣＤ4-ＣＤ8-ＣＴＬｓ(ＤＮＣＴＬｓ)几个亚群。ＣＴＬ细胞毒性通过两条接触依赖性途径杀伤靶细胞 :Ｆａｓ配基 (ＦａｓＬ) Ｆａｓ介导的细胞凋亡作用和颗粒 胞吐途径介导的溶细胞作用。研究表明 ,在ＣＴＬ中起主要作用的ＣＤ8+ＣＴＬｓ通过颗粒依赖性途径识别和杀伤靶细胞和病原体 ,并可通过分泌细胞…     

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原Ｐ８１５ＡＢ抗原肽为模式抗原,研究ＣｐＧ寡聚脱氧核苷酸（ＣｐＧ ＯＤＮ）对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法研究ＣｐＧ ＯＤＮ体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ＥＬＩＳＰＯＴ和［＾３Ｈ］－ＴｄＲ释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性ＣＴＬ应答的效应。结果 ＯＤＮ１８２６在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖,经４次免疫,在“肽＋ＯＤＮ１８２６＋ＩＦＡ”组中,４     

小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达

目的 克隆小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞株的ＰＩＡ基因以制备肿瘤ＤＮＡ疫苗,方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法制备ＰＩＡ基因,以哺乳细胞高效表达质粒ｐＣＩ－ｎｅｏ为载体,构建重组ＤＮＡ疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的Ｔ７和Ｔ１３启动了序列为测序引物,用自动测序仪测定鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化２９３细胞,用ＲＴ－ＰＣＲ法鉴定转化细胞中ＰＩＡ基因的表达。结果 正确构建了ＰＩＡ／ｐＣＩ－ｎ     

肿瘤抗原MAGE-3预测CTL表位的合成与鉴定

目的 合成并鉴定已预测出的４个ＭＡＧＥ－３ ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位多肽,为后续研究奠定基础。方法 采用固相合成法合成多肽,经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化、纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果 ４个合成肽的纯度都在９５％以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,结论 所得多肽为高纯度的目标肽,为后续研究提供了可靠的保证。