不同方法炮制人中黄与甘草镇痛抗炎镇咳药理作用的比较研究

目的比较传统与新方法炮制的人中黄与甘草的镇痛、抗炎、镇咳药理作用的差异,探讨人中黄的炮制目的,验证新法炮制人中黄的可行性。方法以甘草为阳性对照,醋酸扭体法比较镇痛作用;小鼠耳肿胀法比较抗炎作用;氨水致小鼠咳嗽法比较镇咳作用。结果同等剂量下,与空白组比较,传统法炮制人中黄组(P0.01)及新法炮制人中黄中剂量组(P0.001)可显著减少小鼠扭体次数,抑制醋酸致小鼠疼痛反应;传统法炮制人中黄组、新法炮制人中黄中剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀与空白组比较均无抑制作用;传统法炮制人中黄组(P0.05)、新法炮制人中黄中剂量组(P0.001)与空白组比较可显著减少咳嗽次数。传统法炮制人中黄组(P0.01)及新法炮制人中黄中剂量组(P0.001)与甘草组比较扭体次数明显减少;与甘草组比较,传统法炮制人中黄组镇咳作用显著减弱(P0.001),新法炮制人中黄中剂量组镇咳作用无显著差异(P0.05)。与传统法炮制人中黄组比较,新法炮制人中黄中剂量组咳嗽次数显著减少(P0.001)。结论甘草经传统法及新法炮制成人中黄后,镇痛作用显著增强,抗炎作用减弱,新法炮制人中黄镇咳作用略有增强,传统法炮制的人中黄镇咳作用显著减弱;与传统法比较,新法炮制人中黄可达到更好的镇痛、镇咳作用。     

GC-IMS法比较不同方法炮制酒当归特异气味成分差异

目的比较酒洗、酒浸、酒炙等不同方法炮制酒当归挥发性特异气味成分差异,为建立当归不同炮制品鉴别方法和进一步研究当归传统方法炮制作用机制提供研究思路。方法气相色谱-离子迁移谱(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)对不同浓度酒洗当归及不同方法炮制当归样品挥发性成分进行检测并比较成分变化;结合SIMCA 14.1软件进行主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)分析和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)分析其挥发性成分的差异。结果 GC-IMS指纹图谱显示不同浓度酒洗当归的挥发性成分存在差异,明确定性的挥发性成分有55种单体及部分物质的二聚体和聚合物;2-辛醇、E-2-庚醛、丙酮、2-戊酮和5-甲基-2-呋喃甲醇等可作为酒洗当归的特征挥发物质;醋酸乙酯、3-甲基-1-戊醇、2-己醇和2-甲基丁酸乙酯等可作为酒浸当归的特征风味物质;糠醛二聚体、3-甲基丁醇和苯甲醛等可作为酒炙当归的特征挥发性物质;PCA结果显示,各组样品分离度良好;PLS-DA分析结果显示,2-十一烯醛、2-丁酮、丙酮等为不同浓度酒洗当归样品差异成分;OPLS-DA分析结果显示,2-十一烯醛、辛酸乙酯及二聚体、丙酮等为不同方法炮制的当归样品主要差异成分。结论 GC-IMS技术结合化学计量学方法证明当归酒洗、酒浸与酒炙挥发性成分存在差异,为进一步挖掘经方中传统炮制方法的研究提供参考。     

基于肠道菌群及肠黏膜屏障功能探索百药煎治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的 比较百药煎发酵炮制前后对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠道菌群及肠黏膜中闭合蛋白（Occludin）和闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达的影响，探讨五倍子和百药煎治疗UC的作用机制，指导中医临床区别用药。方法 将50只小鼠随机分为5组，每组10只，随机选取1组为空白组，其余4组采用右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导UC模型；造模完成后，空白组和模型组给予生理盐水，给药组分别给予美沙拉嗪（0.8 g·kg^-1），五倍子水煎液（1.8 g·kg^-1）和百药煎水煎液（2.7 g·kg^-1）灌胃7 d；运用16S rRNA测序技术检测小鼠粪便肠道菌群的变化，苏木精-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学变化，免疫组化对比小鼠结肠组织Occludin和ZO-1的表达。结果 UC小鼠肠道菌群丰度、多样性较空白组均明显降低，结肠组织充血增厚，出现明显溃疡，Occludin和ZO-1的表达量显著降低（P<0.01）。经五倍子和百药煎治疗后，菌群丰度及多样性均有提升，门水平主要表现为五倍子组厚壁菌门、变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加（P<0.01），拟杆菌门丰度显著减少（P<0.01）；百药煎组变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加（P<0.01），厚壁菌门相对丰度增加和拟杆菌门相对丰度减少，但差异均无统计学意义。属水平主要表现为五倍子组拟杆菌属、瘤胃球菌属和Allobaculum相对丰度显著降低（P<0.01），罗斯氏菌属、普雷沃菌属、颤螺旋菌属和帕拉普氏菌属相对丰度明显升高（P<0.05，P<0.01）；百药煎组拟杆菌属和Allobaculum相对丰度明显降低（P<0.05，P<0.01），普雷沃菌属、颤螺旋菌属、罗斯氏菌属和瘤胃球菌属相对丰度显著升高（P<0.01）。与模型组比较，五倍子组和百药煎组结肠组织均明显恢复，充血减轻，仅见散在溃疡；Occludin和ZO-1的表达量升高，且百药煎组的表达量高于五倍子组。结论 百药煎治疗UC效果优于五倍子，其机制可能为通过调节肠道菌群的相对丰度和多样性，改善肠道菌群紊乱状况，提高ZO-1和Occludin的表达，保护肠道黏膜屏障功能，起到减轻肠道炎症的作用。     

五倍子发酵炮制百药煎主要药理作用比较研究

目的研究比较五倍子发酵为百药煎后其抗炎镇痛、止咳化痰等药理作用的变化。方法采用二甲苯致耳廓肿胀法评价抗炎作用,采用热板法和醋酸扭体法评价镇痛作用,采用浓氨水致咳法和酚红模拟化痰药效结合分光光度法分别评价止咳化痰作用,分别对比五倍子发酵为百药煎后其药理作用变化;通过测定二甲苯致耳廓肿胀模型血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、白介素6(IL-6)和白介素1β(IL-1β)含量,探究其抗炎机制。结果百药煎能显著抑制热板和醋酸引起的疼痛反应(P<0.05),作用强于五倍子(P<0.05);显著抑制二甲苯致耳肿胀现象(P<0.05),降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量(P<0.05);显著降低咳嗽潜伏期时间,减少咳嗽次数(P<0.05),而五倍子差异无统计学意义(P>0.05);酚红排出量明显高于五倍子组(P<0.05)。结论五倍子发酵为百药煎后抗炎镇痛、止咳化痰作用增强,其抗炎机制可能与抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放有关。     

基于指纹图谱及化学计量学研究不同发酵程度建曲中成分变化

目的 采用指纹图谱技术结合化学计量学分析方法,探究不同发酵程度建曲中化学成分的差异性,筛选差异性标志物,为规范建曲炮制工艺、建立饮片质量标准提供参考。方法 采用Waters SunFire C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.0m L/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样体积10μL,建立不同发酵时间建曲HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A版）进行相似度评价,标定共有峰并进行指认及归属;以共有峰峰面积为指标,利用层次聚类分析法（hierarchicalclusteranalysis,HCA）对不同发酵时间建曲进行区分,再借助正交偏最小二乘-判别分析法（orthogonal partial least square-discriminant analysis,OPLS-DA）筛选出不同发酵程度建曲间差异性标志物;建立多指标成分含量测定方法,对多个差异性标志物进行定量分析。结果 不同发酵时间建曲指纹图谱相似度大于0.900,共标定46个共有峰,指认并归属21个成分;HCA结果显示9...