中医药对肺纤维化大鼠肺组织超微结构的影响

肺纤维化是一种发病机制尚不明确的慢性炎症性肺疾病,中医药(包括针灸)等治疗方法在对其治疗上有着独特的优势。随着现代医学科学技术的发展,许多新的研究手段逐渐应用于肺纤维化的研究,本文查阅近十余年来应用透射电子显微镜研究肺纤维化的文献,总结了传统中医药及针灸治疗对肺纤维化超微结构的影响,以期获得临床用药的实验室基础。     

转化生长因子-β介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路在上皮-间质转化过程中的影响

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一个细胞重新编程的过程,在此过程中细胞失去上皮形态,获得以纺锤形为特征的间质形态,运动性和侵袭能力增强。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号在EMT过程中发挥着重要的作用。同时,中医药在良性肿瘤恶性转化以及器官纤维化的EMT过程中发挥着很大的作用,但中医药治疗尚处于探索阶段,临床研究目前尚缺乏严谨的设计,检测指标没有统一的标准,阳性对照物较少,研究结果没有说服力,不能更好地向国际医学界推广。这就要求我们在中医药研究过程中更注重科学性,以器官、细胞、分子、基因等作为靶点结合信号通路,充分发挥中医药的特色优势。     

瓜蒌薤白汤含药血清抗博来霉素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞致纤维化作用及机制研究

目的:探讨瓜蒌薤白汤含药血清抗博来霉素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383致纤维化作用及其部分机制。方法:首先应用CCK-8法检测瓜蒌薤白汤含药血清对NR8383细胞增殖的影响,接着将NR8383细胞分组。除正常组外,其余各组细胞应用150μg/mL博来霉素(BLM)刺激,其中,BLM组正常培养,其他刺激组中,阳性对照组用2μg/mL的地塞米松(DEX)干预,空白对照血清组分别用5%、7.5%、15%的空白血清作对照,含药血清组分别用5%、7.5%、15%的含药血清干预。结果:BLM刺激后,与正常组比较,部分细胞的形态发生变化,呈长梭形或者纺锤形,出现伪足样改变,类似于成纤维细胞的形态;与BLM组和空白对照血清组比较,瓜蒌薤白汤含药血清干预能显著改善上述现象。结论:瓜蒌薤白汤含药血清能抑制BLM诱导的大鼠肺泡巨噬细胞的纤维化,具有治疗肺纤维化的应用前景。     

红花黄色素对TGF-β1 诱导的人肺泡上皮A549 细胞转分化的 抑制作用及其信号转导机制研究

目的:通过体外培养人肺泡上皮细胞A549,用TGF-β1刺激其发生上皮-间质转化,运用现代分子生物学和超微病理学实验技术,探讨红花黄色素在防治肺间质纤维化上皮间质转化中的干预作用及机制。方法:将正常培养的人肺泡上皮细胞A549分6组:正常对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1终浓度为5ng/ml,诱导24h)、地塞米松组(地塞米松2μg/mL)、红花黄色素低、中、高3个剂量干预组(红花黄色素25μg/mL+TGF-β1 5ng/mL、红花黄色素中剂量组红花黄色素50μg/mL+TGF-β15ng/mL、红花黄色素高剂量组红花黄色素75μg/mL+TGF-β1 5ng/mL)。TGF-β1 5ng/L干预A549细胞生长24h,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测不同剂量红花黄色素作用于TGF-β1刺激A549细胞后其发生上皮-间质转化后各组的吸光值(OD值),计算其增殖活性,绘制细胞增殖曲线。采用倒置显微镜观察各组细胞的生长状态与形态变化。结果:(1)MTT检测结果显示:与正常对照组相比较,TGF-β1诱导组细胞活力略高,差异具有统计学意义(P0.05);红花黄色素中药干预组细胞的增殖活力下降,与正常对照组和TGF-β1诱导组相比较,差异有统计学意义(P0.05)。(2)倒置显微镜观察显示:经过TGF-β1刺激后,A549细胞由正常的铺路石样贴壁生长呈现出间质细胞的特征,呈明显的拉长状态,由鹅卵石状转变为纺锤型或梭型,出现伪足样改变,藤索样生长,类似于成纤维细胞,且细胞之间间隙增大。结论:通过观察红花黄色素各剂量组发现,细胞的形态逐渐接近正常的A549细胞,视野内细胞的数目按一定的剂量效应关系减少。     

瓜蒌薤白汤含药血清对博来霉素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞纤维化的影响

目的:观察瓜蒌薤白汤含药血清作用于博来霉素诱导的NR8383细胞功能变化,探讨瓜蒌薤白汤抗纤维化作用与细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路的关系。方法:实验分为正常对照组、博来霉素组、地塞米松组、空白对照血清低体积分数组、瓜蒌薤白汤含药血清低体积分数组、空白对照血清中体积分数组、瓜蒌薤白汤含药血清中体积分数组、空白对照血清高体积分数组、瓜蒌薤白汤含药血清高体积分数组。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原(collagen type-Ⅰ,COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagen type-Ⅲ,COL-Ⅲ)、蛋白质免疫印迹法检测ERK与p-ERK蛋白表达情况。结果:博来霉素组TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达均增加,不同体积分数瓜蒌薤白汤含药血清干预后,以上指标表达量均下降,中体积分数效果最好(P0.05);蛋白质免疫印迹法结果显示,博来霉素组p-ERK1/2的表达水平均升高,不同体积分数瓜蒌薤白汤含药血清干预后,p-ERK1/2的表达水平均降低,中体积分数效果最好(P0.05)。结论:瓜蒌薤白汤含药血清可通过ERK1/2信号通路降低TGF-β1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达,这可能是瓜蒌薤白汤治疗肺纤维化的作用机制之一。