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目的 基于空间代谢组学技术结合药理指标,解析川贝母粉改善博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组及川贝母高、中、低剂量组,每组12只。除空白组外,其他组大鼠均采用气管注射博莱霉素建立肺纤维化模型。术后川贝母高、中、低剂量组分别给予0.36、0.18、0.09 g·kg-1川贝母粉的水溶液,连续给药28 d,空白组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。末次给药后收集肺组织及血液,通过苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色综合评估大鼠肺组织病理状况,利用空气动力辅助解吸电喷雾离子化质谱成像技术对不同实验组大鼠肺组织进行质谱成像分析,依据HE染色图选择模型组和川贝母高剂量组肺组织纤维化区域进行空间代谢组学分析,采用有监督的正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)获得的变量重要性投影(VIP)值>1、t检验P<0.05及变异倍数分析来筛选组间差异代谢产物;采用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对筛选出的差异代谢物进行代谢通路分析。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肺组织中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达;生化检测大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、核因子E2相关因子2(Nrf2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,对筛选出的部分相关性强的信号通路进行验证。结果 质谱成像实验结果显示,肺纤维化大鼠在灌胃川贝母粉28 d后,其肺组织纤维化区域的L-精氨酸含量与模型组大鼠比较具有明显差异,磷脂酰胆碱含量低于模型组大鼠肺纤维化区域中磷脂酰胆碱含量。Western blot结果表明,与模型组比较,在灌胃给药川贝母粉28 d后,可以抑制肺纤维化大鼠肺组织中NF-κB p65蛋白表达量上升,高剂量川贝母粉灌胃给药后能够明显抑制HO-1表达量降低(P<0.05)。细胞因子检测结果显示,与模型组比较,川贝母高、中、低剂量组大鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α的含量均降低,高剂量川贝母粉灌胃后能够明显抑制由博莱霉素引起的SOD、GSH、Nrf2含量降低及MDA含量升高的趋势。结论 川贝母粉灌胃给药可一定程度改善博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其作用机制可能与调控炎症(NF-κB p65)、氧化应激(Nrf2/HO-1)等相关途径有关。 相似文献
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目的:优选小檗皮总生物碱提取物的大孔树脂纯化工艺,并建立其质量标准,为该有效部位的制剂开发提供参考。方法:采用酸性染料比色法考察小檗皮总生物碱提取物的纯化工艺,考察的工艺参数包括上样液质量浓度、上样速度、树脂柱径高比、水洗用量、洗脱剂体积分数及用量、洗脱流速等。采用HPLC测定小檗皮总生物碱提取物中4种生物碱类成分(木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱)的含量,流动相乙腈-0. 1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长270 nm,确定最佳纯化工艺。按2015年版《中国药典》的要求进行小檗皮总生物碱纯化物的薄层色谱鉴别、含量测定、特征图谱等质量标准研究。结果:小檗皮总生物碱提取物的最佳纯化条件为采用HPD100型大孔树脂10 g,树脂柱径高比1∶8,上样液质量浓度11 g·L~(-1),上样液体积50 mL,上样流速1 mL·min~(-1),加4 BV水洗脱(1 BV=15 mL),加30%乙醇9 BV洗脱;纯化后小檗皮总生物碱的转移率 80%,纯度 65%。建立了小檗皮总生物碱纯化物的质量标准,特征图谱中共有峰有19个,整体相似度均 0. 99。结论:优选的纯化工艺稳定可行,建立的质量标准可靠,适用于小檗皮总生物碱提取物的纯化及质量控制。 相似文献
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目的:比较不同厂家生产的盐酸小檗胺片在不同溶出介质中的溶出度。方法:根据《中国药典》2015年版溶出度测定方法第二法,以人工胃液(不加酶)和人工肠液(不加酶)为溶出介质,转速为50 r/min,于279 nm处采用紫外分光光度法测定吸光度并计算溶出度,采用相似因子、主成分分析和分层聚类分析对溶出度进行数据分析。结果:盐酸小檗胺片在人工胃液(不加酶)和人工肠液(不加酶)中累积溶出度在40%~50%之间。结论:相似因子、主成分分析和分层聚类结果表明,在相同溶出条件下盐酸小檗胺糖衣片与薄膜衣片有不同的溶出行为,且薄膜衣片比糖衣片更加稳定,可见盐酸小檗胺薄膜衣片规格的工艺较糖衣片更加合理。 相似文献
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糖尿病肾病(DN)是一种严重的糖尿病(DM)并发症,是引起终末期肾衰竭最常见的原因之一。DN的发生率随着DM患者数量增加而增高,早期防治是关键。DM和DN属于藏族医药(简称藏医和藏药)的特色优势病种,基于体内三大因素(三因,包括隆、赤巴、培根)动态平衡的"整体观"是藏医对DM和DN的独特认识,有着丰富而独特的临床用药经验。该文论述了基于"整体观"对DM及DN的藏医认识,挖掘临床治疗DN的常用藏药及藏医方剂,以期为DN的治疗及新药发现提供新思路,进一步发挥藏族医药的特色优势。 相似文献
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目的 利用空间代谢组学技术结合常规药理实验探究川贝母Fritillariae Cirrhosae Bulbus抗肺纤维化的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组及川贝母高、中、低剂量组,每组12只。除空白组外,均采用气管注射博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,川贝母高、中、低剂量组连续28 d ig 0.36、0.18、0.09 g/kg川贝母粉的水溶液,空白组和模型组ig等体积蒸馏水。末次给药后对大鼠肺组织样本进行苏木素-伊红和Masson染色病理分析,并采用空气动力辅助解吸电喷雾离子化质谱成像技术对空白组和川贝母中剂量组大鼠肺组织纤维化区域进行空间代谢组学分析,基于代谢组学分析结果结合生物信息学筛选出相关性强的信号通路,并通过检测常规药理指标对川贝母在上皮-间质转化方面的作用机制进行验证。采用ELISA法测定血清中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量,采用羟脯氨酸测定试剂盒测定肺组织中羟脯氨酸含量,采用Western blotting法测定肺组织中Smad 2/3、p-Smad 2/3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt表达。结果 空间代谢组学分析出71个差异代谢物及其空间信息,并富集出精氨酸脯氨酸、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路等8条代谢途径。与模型组相比,给药川贝母后,大鼠肺组织中炎症细胞浸润和纤维组织增生现象减少,胶原蛋白纤维下降;血清中TGF-β1和肺组织中羟脯氨酸含量降低(P<0.05),肺组织中Smad 2/3磷酸化水平和α-SMA蛋白表达水平降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 川贝母粉能够在一定程度上改善博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,其作用机制可能是通过调控上皮-间质转化、抑制细胞外基质沉积等相关途径实现的。 相似文献
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川贝母Fritillariae Cirrhosae Bulbus是最具代表性的川产名贵道地药材之一,作为质优效佳的中医临床化痰止咳药,应用历史悠久,具有重要的临床价值和广阔的全产业链应用开发潜力。资源供应短缺、质量评控薄弱、技术标准缺失、终端产品缺乏、政策支持不够等瓶颈问题,制约了当前川贝母产业健康发展。基于广义中药学理论,从观念和理论上将中药理论、临床应用、综合开发、产业发展、健康服务、资源保护、生态环境、文化传承等相关的要素整合为一,概述了川贝母的化学成分、药理作用、质量控制、专利申请、新药研发及大健康产品等研究进展,从全产业链探讨川贝母产业发展中遇到的挑战,提出相应的发展策略与方法,为川贝母产业高质量发展提供科学支撑。 相似文献
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目的:建立牛血清中盐酸小檗碱浓度的分析方法,测定不同浓度盐酸小檗碱与牛血清蛋白结合率。方法:采用HPLC法,流动相乙腈(A)-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(p H=2.8)(B)梯度洗脱(0~32 min,20%~28%A),检测波长345 nm;采用平衡透析法测定盐酸小檗碱与牛血清蛋白结合率。结果:当盐酸小檗碱浓度在10~80μg/m L时,牛血清蛋白结合率在20%~30%之间。当盐酸小檗碱浓度在10~20μg/m L时,牛血清蛋白结合率随着浓度升高而降低;当盐酸小檗碱浓度在20~80μg/m L时,牛血清蛋白结合率随着浓度升高并无明显变化。结论:盐酸小檗碱与牛血清蛋白属于中等程度的蛋白结合率,且当药物浓度在10~20μg/m L时,具有浓度依赖性。 相似文献
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目的:建立一种基于荧光检测的流感病毒神经氨酸酶(NA)中药抑制剂快速筛选方法。方法:方法的构建原理是供试品和一定数量的NA作用后,部分NA的活性会被供试品抑制,加入底物后仍具有活性的NA与荧光底物结合后在特定波长下可以产生荧光,根据测得的荧光强度计算供试品对NA的抑制率,从而评估供试品对NA的体外抑制活性。利用建立的方法对来源于12味中药的49个化学成分进行体外抗NA活性评价。利用NA蛋白受体与供试品对接后的结合能和抑制常数的理论计算值来证明实测结果的准确性。将建立的方法应用于检测不同批次板蓝根颗粒和抗病毒颗粒在体外抑制NA的活性,以评价不同批次样品间的质量一致性。结果:方法学考察结果表明该方法具有较好的准确性和重复性。49个成分的筛选结果显示,其中22个成分在体外对NA的抑制活性强于帕拉米韦[半抑制浓度(IC50)131.2μmol·L-1],如夏佛塔苷、异荭草苷、诃子酸、胡薄荷酮、异夏佛塔苷等,其余27个成分在体外对NA的抑制活性弱于帕拉米韦。分子对接结果显示,大部分化合物的结合能和抑制常数理论计算结果和实测结果基本一致。12批板蓝根颗粒... 相似文献
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目的制备抗Enolase 1的兔多克隆抗体(pAb)并进行特异性鉴定。方法以人宫颈癌细胞系HeLa细胞cDNA为模板,构建重组表达质粒pET-32a-ENO1。His-ENO1融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,纯化后作为免疫原制备兔多克隆抗体。采用ELISA、Western blot和免疫组化法鉴定抗ENO1兔多克隆抗体针对重组蛋白和天然蛋白的特异性。结果 His-ENO1融合蛋白在相对分子质量约29 000处呈现明显表达条带。Western blot鉴定表明,制备的抗ENO1兔多克隆抗体可特异性地识别ENO1重组蛋白和不同肿瘤细胞系HeLa、MCF7、HepG2和K562中的ENO1蛋白。免疫组化结果表明该多抗可特异性识别肾组织中的ENO1蛋白。结论成功制备出兔抗人ENO1抗血清,为进一步研究ENO1的功能奠定了基础。 相似文献
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