基于化学计量学的指纹图谱法鉴别金线莲及其混伪品

目的 建立金线莲高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）指纹图谱分析方法,基于化学计量学对比区分其7种常见混伪品（台湾银线兰、长片金线兰、滇越金线兰、丽蕾金线兰、血叶兰、斑叶兰、虎耳草）,为其真伪鉴别提供技术参考。方法 采用Welch Ultimate XB-C₁₈ 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）,梯度洗脱60 min,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长360 nm,进样量10 μL。建立17批金线莲的指纹图谱,通过聚类分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least square-discriminate analysis,OPLS-DA）用于区分台湾银线兰、长片金线兰、滇越金线兰、丽蕾金线兰、血叶兰、斑叶兰、虎耳草共7种混伪品。结果 建立了金线莲高效液相色谱指纹图谱,确定了16个共有峰（指认11个成分：槲皮素3,7-二葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷-7-O葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、紫云英苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素）,17批金线莲与对照指纹图谱的相似度均＞0.85,7种混伪品与金线莲对照指纹图谱的相似度均＜0.8,通过正交偏最小二乘判别分析筛选出金线莲与混伪品的差异标志物为水仙苷,对差异标志物进行含量验证,金线莲中水仙苷含量（高于1 098.09 μg·g^-1）显著高于其混伪品（低于379.96 μg·g^-1）。结论 高效液相色谱指纹图谱的方法简单、可靠,可用于金线莲与混伪品的区分,水仙苷可以作为区分混伪品的标志物之一。     

三叶青叶指纹图谱研究及8种酚类成分含量测定

采用超高效液相色谱建立三叶青叶指纹图谱,并同时测定8种酚类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷)的含量,为三叶青叶质量评价提供依据。采用UHPLC法,Welch UHPLC Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(含5%甲醇)水梯度洗脱,流速0.4 m L·min~(-1),柱温30℃,采用国家药典委员会"相似度评价软件2004AB"处理分析,建立41批不同产地三叶青叶的指纹图谱,共标定15个共有峰并对不同产地进行聚类分析,然后选择其中8个主要的酚类成分作为定量指标,建立UHPLC同时测定8种主要酚类成分含量的方法,经方法学验证该研究建立的三叶青叶指纹图谱和8种酚类成分含量测定方法简便有效、灵敏、准确,可为综合评价三叶青叶的质量提供参考。     

芍甘浓缩丸制备工艺研究

目的 研究并确立芍甘浓缩丸的最佳制备工艺。方法 验证醋乳香、醋没药挥发油提取工艺,同时以浸出物得率为指标,采用正交试验法,考察提取时间、提取次数、提取水量对芍甘浓缩丸提取工艺的影响,从而确定芍甘浓缩丸水提工艺。通过单因素试验法,考察不同稠膏相对密度、不同药粉细度及不同烘干时间对成型效果的影响,优选芍甘浓缩丸的最佳制备工艺。结果 醋乳香、醋没药粗粉以8倍水量,浸泡10 h,煎煮6 h提取挥发油工艺稳定。醋乳香、醋没药经挥发油提取后药渣与白芍、甘草混合,以8倍量水提取3次,每次2 h,滤液浓缩至稠膏相对密度为1.27～1.28,薏苡仁药粉细度过100目筛,50℃烘干96 h条件下制得的浓缩丸效果最佳。结论 制得的丸剂圆整光滑、色泽一致,符合2020年版《中华人民共和国药典:四部》丸剂项下规定,且工艺稳定。     

金线莲转录组测序及其黄酮类合成相关基因分析

首次采用RNA-seq高通量测序技术对不同种植时期的金线莲进行转录组测序,并通过Q-PCR和HPLC对其结果进行验证和分析。转录组测序共获得金线莲51 370条基因,并注释到Nr、GO、Swiss-Prot、KEGG和KOG数据库,根据同源序列比对,与油棕和海枣的同源性最高。通过比较不同生长时间的金线莲转录组,分析其差异基因主要集中在黄酮类生物合成相关基因,运用Q-PCR对6个黄酮类生物合成相关基因(反式肉桂酸4-单加氧酶、咖啡酰辅酶A O-甲基转移酶、查尔酮合成酶、黄酮醇合成酶、莽草酸O-羟基肉桂酰转移酶、黄酮类3′,5′-羟化酶)表达量进行验证;并结合HPLC对相应的金线莲样品中6种主要黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)进行含量测定。结果表明6种主要黄酮类成分含量随着金线莲黄酮类合成基因的表达量的升高而增加,并结合转录组数据,绘制出金线莲中黄酮类成分的生物合成途径。此研究为金线莲黄酮合成关键基因及黄酮类成分生物合成提供重要的遗传信息,同时为其药用价值开发提供依据。     

HPLC法测定杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量

目的 建立一种测定杨梅树不同药用部位杨梅苷含量的HPLC方法,并对野生杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量进行测定。方法 采收并加工3批杨梅树的不同药用部位,包括根木质部、根韧皮部、树韧皮部、枝韧皮部、枝木质部、叶和果,采用HPLC法,以Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,乙腈-0.1%磷酸水溶液（20∶80）为流动相,流速1 mL/min,柱温40℃,进样量10μL,检测波长260 nm,建立测定杨梅树不同药用部位中杨梅苷含量的定量分析方法,并对杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量进行测定。结果 杨梅苷在3.891 8～194.590 0μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 9）,精密度、稳定性、重复性检测结果 RSD均低于3%,平均加样回收率为97.703 5%,RSD为2.271 3%。杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量在0.043 0%～13.917 0%,其中以韧皮部和叶含量较高,杨梅苷含量由高到低的部位为：树韧皮部>根韧皮部>枝韧皮部>叶>枝木质部≈根木质部>果实。果实中杨梅苷含量随着果实成熟逐渐下降。结论 本研...     

基于GEO数据库及网络药理学探究杜仲健骨丸治疗股骨头坏死的作用机制研究

目的:利用GEO数据库及网络药理学方法研究杜仲健骨丸治疗股骨头坏死(ONFH)的作用机制。方法:ONFH疾病靶点通过GEO数据库筛选以及DrugBank、PharmGKB、GAD、OMIM、DisGeNET、GeneCards、CTD、KEGG等数据库检索获取;杜仲健骨丸的化学成分通过TCMSP和BATMAN-TCM数据库获取,并以口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18为标准筛选有效成分,通过检索TCMSP数据库并结合经Swiss Target Prediction数据库预测的靶点作为有效成分作用靶点,将药物靶点与疾病靶点取交集,通过Cytoscape软件构建“药物-有效成分-靶点”调控网络并进行蛋白互作网络(PPI)构建及拓扑分析,利用R软件进行GO和KEGG富集分析。结果:杜仲健骨丸中主要有槲皮素、山柰酚、黄芩素、木犀草素和异鼠李素等200个有效成分,对应的靶基因1 038个;GEO数据库中筛选共得到差异基因7 375个,各疾病数据库获得疾病相关靶点1 140个;PPI核心网络共包含AKT1、TP53、TNF和IL6等94个蛋白;GO和KEGG富集分析表明杜仲健骨...     

UPLC-MS/MS同时测定使君子药材中9个成分的含量

目的：建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定使君子药材中9个成分（葫芦巴碱、香草酸、阿魏酸、丁香酸、儿茶素、鞣花酸、苹果酸、没食子酸和没食子酸甲酯）的含量。方法：采用Welch Xtimate C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,流速0.25 mL·min-1,柱温45 ℃。质谱采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测模式。检测34批次不同产地（福建、四川、广西、广东）使君子中9种成分的含量,并结合化学计量学分析筛选出使君子的质控标志物。结果：在所设定的色谱、质谱条件下,8 min内完成使君子中9个成分的定量分析。9个成分分别在考察的质量浓度范围内与峰响应值呈良好的线性关系,平均加样回收率均大于95%,RSD均小于4%。34批次不同产地使君子的含量经热图聚类,按照地域福建、四川、广西、广东分别独立聚类,主成分分析筛选出主要贡献成分为胡芦巴碱、鞣花酸和苹果酸。结论：首次建立UPLC-MS/MS同时测定使君子中9个成分的含量,分析方法快捷准确、灵敏度高,为使君子药材质量控制提供参考。建议胡芦巴碱、鞣花酸和苹果酸3个成分可作为使君子的质控标志物。     

HPLC法测定安胎饮合剂中黄芩苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定安胎饮合剂中黄芩苷的含量。方法以乙腈-0.1%甲酸水溶液30∶70(v/v)为流动相;色谱柱Welch Ultimate XB-C18(5μm,250×4.6 mm);柱温:30℃,进样量:10μL,流速:1.0mL·min~(-1),检测波长为280 nm。结果黄芩苷在0.484μg·mL~(-1)～29.04μg·mL~(-1)(r=0.999 9)浓度范围内与其峰面积具有良好的线性关系,黄芩苷的平均回收率为100.0%,RSD为2.90%。结论所建立方法可以准确测定安胎饮合剂中黄芩苷含量的方法,适用于该制剂的质量控制。