基于转录组测序技术探讨复方蛇龙胶囊治疗膜性肾病大鼠潜在机制

目的:应用高通量转录组测序(RNA-seq)技术检测膜性肾病大鼠肾组织基因表达变化,分析复方蛇龙胶囊可能的作用机制。方法:采用改良Border法建立膜性肾病大鼠模型,设置模型组和复方蛇龙胶囊高、中、低剂量组(1.5、0.75、0.375 g/kg),每天灌胃1次,连续干预8周。采用RNA-seq技术检测复方蛇龙胶囊干预前后的差异表达基因,通过基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、蛋白质相互作用(PPI)及关键基因分析,筛选关键基因以及关键通路。结果:与模型组相比,复方蛇龙胶囊低、中、高剂量组共筛选出差异表达基因685个,其中535个上调基因,150个下调基因。GO富集分析显示差异表达基因主要涉及细胞膜结构,参与物质跨膜运输、细胞粘附与迁移,调控跨膜转运蛋白活性,KEGG富集分析显示差异表达基因主要富集在PI3K/Akt和MAPK信号通路。蛋白质相互作用网络筛选出Egfr、Fn1、Rac3、Frk、Cdh1、Agt、Hspg2、Itga8、Akt3和Fgfr2共10个关键基因,GO功能富集分析显示关键基因主要富集在细胞膜表面及间质,参与跨胞外基质组织及粘附过程,调控激酶活性,KEGG富集分析结果显示关键基因主要富集在PI3K/Akt信号通路。结论:调控肾足细胞自噬与凋亡可能是复方蛇龙胶囊作用的重要机制,与PI3K/Akt信号通路相关基因表达有关。     

山药化学成分及皂苷类成分药理作用的研究进展

山药是薯蓣科植物的干燥根茎,性平,味甘,归脾、肺、肾经,具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精等功效,临床用于脾虚食少、久泻不止、肺虚喘咳、肾虚遗精、带下、尿频、虚热消渴等.本文通过查阅近年来国内外有关山药的文献资料,对其化学成分进行分类整理,并对其中皂苷类化合物的药理活性进行了综述.发现山药含有丰富的甾体皂苷类、多糖、尿囊...     

淫羊藿苷对失血性休克复苏模型小鼠认知功能及星形胶质细胞焦亡的影响

目的探讨淫羊藿苷对失血性休克复苏模型小鼠认知功能及星形胶质细胞焦亡的影响。方法 48只SPF级健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为4组(每组n=12):假手术对照组(C组)、失血性休克复苏组(H组)、失血性休克复苏+淫羊藿苷组(HI组)和失血性休克复苏+淫羊藿苷+SSK1组[HIS组, 其中SSK1为p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化激动剂]。H、HI和HIS组小鼠通过股静脉放血回输法建立失血性休克复苏模型;HI和HIS组在复苏第2天行淫羊藿苷(10 mg/kg)灌胃, 连续7 d;C组和H组仅向小鼠灌胃含二甲基亚砜的等量0.9%氯化钠溶液。HIS组小鼠在复苏第2天行SSK1(0.5 mg/kg)腹腔注射, 连续7 d;C、H和HI组仅向腹腔注射含二甲亚砜的等量0.9%氯化钠溶液。于术后15 d, 采用新物体识别实验和恐惧条件实验评价小鼠认知功能。通过免疫荧光染色法测定小鼠海马区神经元特异标记蛋白微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2, MAP2)及焦亡神经胶质细胞特异蛋白并计算海马CA1区神经元含量及星形胶质细胞焦亡...     

穿山龙总皂苷通过Nrf2信号通路对阿霉素诱导MPC-5细胞氧化应激损伤保护作用研究

目的 探讨穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法 通过阿霉素诱导MPC-5细胞建立细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,考察阿霉素对MPC-5细胞的毒性及穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞凋亡的影响;采用探针DCFH-DA检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内活性氧（ROS）的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）试剂盒检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内氧化应激因子的影响;采用Western Blot法检测MPC-5细胞内相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达以及细胞质、细胞核和细胞整体内核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)蛋白的表达。结果 与空白组相比,阿霉素模型组中细胞活力显著降低（P<0.01）;细胞内MDA含量、ROS含量、细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,SOD活性、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）;细胞核和细胞总体中Nrf2蛋白表达显著升高（P<...     

脂多糖致大鼠肾小管慢性炎症模型的探究

目的：通过尾静脉注射脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）不同剂量以及不同周期探究肾小管慢性炎症大鼠模型的合适给药剂量以及周期。方法：无特定病原体动物级雄性SD大鼠63只,按照随机原则分为9组：正常组、0.41组（0.4 mg/kg剂量给药1周）、0.42组（0.4 mg/kg剂量给药2周）、0.43组（0.4 mg/kg剂量给药3周）、0.44组（0.4 mg/kg剂量给药4周）、0.21组（0.2 mg/kg剂量给药1周）、0.22组（0.2 mg/kg剂量给药2周）、0.23组（0.2 mg/kg剂量给药3周）、0.24组（0.2 mg/kg剂量给药4周）。每一周期结束,将相应周期0.4 mg/kg组以及0.2 mg/kg组大鼠麻醉取血,检测外周血中白细胞总数、淋巴细胞比例、中性粒细胞比例、单核细胞比例和血清中超敏C-反应蛋白（High-sensitivity C-reactiveprotein,hs-CRP）、白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)以及肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)水平的变化;取肾脏...     

特异性抑制海马CA1区GABA能神经元NLRP3表达对小鼠TBI后认知障碍的改善作用研究

目的探讨海马CA1区γ-氨基丁酸(GABA)能神经元NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)基因敲除对小鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后认知障碍的改善作用。方法将48只清洁级健康雄性NLRP3flox/flox小鼠按随机数字表法分为假手术+对照病毒组(SV组)、假手术+GABA能神经元NLRP3基因特异性敲除组(SG组)、TBI+对照病毒组(TV组)及TBI+GABA能神经元NLRP3基因特异性敲除组(TG组), 每组12只。其中, TV组、TG组小鼠采用自由落体法构建TBI模型, SV组、SG组小鼠仅行头皮剪开及开骨窗等外科操作、不予打击, SG组、TG组小鼠于TBI造模前21 d于海马CA1区注射腺病毒制备GABA能神经元NLRP3基因特异性敲除模型, SV组、TV组小鼠仅于海马CA1区注射空载病毒作为对照。TBI造模后第30、31天应用新物体识别实验评价各组小鼠的认知功能, 第32～36天应用Morris水迷宫实验评估各组小鼠的学习及记忆功能, 第31天应用在体电生理记录小鼠在新物体识别实验中探索新物体时海马CA1区场电位。上述实验结束后, 处死小鼠并取材, 采用免疫荧光染色...     

基于p38 MAPK信号通路探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的作用

目的：探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护和抗炎的作用,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在其中的作用。方法：将SPF级雄性SD大鼠分为正常组和造模组,采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白复制膜性肾病大鼠模型,剔除不符合条件的大鼠后,将造模成功大鼠按照阳性药物组(雷公藤多苷片)、复方蛇龙胶囊低、中、高剂量组(0.375、0.75、1.5 g·kg^-1)对应剂量给药干预8周,期间检测尿蛋白变化,给药结束后进行肾功能以及炎症相关指标检测,检测24 h尿蛋白(24 h UP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)及总胆固醇(TC)的变化;流式细胞术检测CD4⁺/CD8⁺的变化;留取肾脏组织在光镜及电镜下观察病理改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠24 h UP显...     

复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠PI3K/Akt信号通路及足细胞凋亡的影响

目的 探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠肾保护作用及其减轻肾组织细胞凋亡的相关机制。方法 60只6周龄SPF级雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常组,其余按照改良Border法制备膜性肾病大鼠模型,随机分为模型组、雷公藤多苷片组(7.5mg/kg)和复方蛇龙胶囊低、中、高剂量组(0.375 g/kg, 0.75 g/kg, 1.5 g/kg),正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水,每日1次,连续8周。采用全自动生化分析仪检测血清肌酐、甘油三脂、总胆固醇、白蛋白、总蛋白含量;酶联免疫吸附法检测尿微量白蛋白含量;观察肾组织病理学变化;流式细胞术检测肾组织细胞凋亡;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测肾脏组织Nephrin、Podocin、Bcl-2、Bad的mRNA和蛋白表达水平,WB检测磷酸化蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-Akt)蛋白表达水平。结果 (1)与正常组比较,模型组血清白蛋白和总蛋白明显降低,总胆固醇、甘油三酯、肌酐和尿微量白蛋白不同程度升高(P<0.05);肾小球结构紊乱,炎性细胞浸润,纤维组织沉积,肾小球基底...     

下丘脑外侧区星形胶质细胞NLRP3在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用

目的评价下丘脑外侧区星形胶质细胞NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠48只, 10周龄, 体质量25～30 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(C组)、失血性休克复苏组(H组)、失血性休克复苏+腺病毒组(HI组)和失血性休克复苏+对照腺病毒组(HIV组)。H组、HI组和HIV组小鼠通过股静脉放血-回输法建立失血性休克复苏模型;建模前21 d时, HI组小鼠在立体定位仪引导下向双侧下丘脑外侧区注射AAV-GfaABC1D-EGFP-Cre腺病毒, HIV组注射AAV-GfaABC1D-EGFP对照腺病毒。复苏后14 d时, 采用埋珠实验和高架十字迷宫实验评估焦虑样行为;行为学实验结束后立即处死小鼠, 取含有下丘脑外侧区的脑组织, 采用免疫荧光染色法, 测定紫藤凝集素荧光强度反映细胞外基质表达, 测定NLRP3和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位情况, 计算cleaved caspase-1/GFAP、IL-18/GFAP阳性细胞数占总细胞的百分比。结果与C组比较, H组、HI组和HIV组埋珠数量减...