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用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:以构建缺失第109~226位氨基酸密码子的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡmolecule transactiva-tor,CⅡTA)突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法.方法:首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段,再将两片段混合,在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸,然后再加入引物进行目的片段指数扩增,将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES.结果:成功地构建出缺失第109~226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体.结论:优化后的重叠延伸PCR法(OE-PCR)克服了传统方法的诸多弊端,非常适合于构建中间缺失突变体,值得推广. 相似文献
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目的 通过构建CT影像组学的Logistic回归模型鉴别乏脂肪型肾血管平滑肌脂肪瘤(fp-AML)与肾透明细胞癌(RCC)。方法 选取并分析经病理证实的22例fp-AML和62例RCC患者,进行三期CT扫描(平扫期,UP;皮质期,CMP;髓质期,NP)。在ITK软件上勾画整个肿瘤的感兴趣区。在A. K.软件上通过影像组学特征选择,构建UP组、CMP组和NP组三个Logistic回归模型。通过ROC曲线来评估其诊断效能。结果 常规CT分析显示fp-AML相对年轻,而RCC病灶易出现瘤肾界面成角征、囊变、假包膜特征。影像组学分析显示,UP组Logistic回归预测模型在训练集中曲线下面积(AUC)为0.950,测试集为0.917; CMP的AUC分别为0.839及0.827; NP组的AUC分别为0.840及0.865。三组比较UP组AUC,敏感性及特异性分别为0.941,90.3%,90.9%,优于CMP组及NP组。结论 基于CT影像组学的Logistic回归模型有助于鉴别fp-AML和RCC,平扫期鉴别效能较优。 相似文献
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目的:观察腺病毒介导MHC Ⅱ类分子(major histocompatibility complex class Ⅱ molecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis, EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制。方法:31只健康雌性CBA/J小鼠随机分成EAT模型组(n=8)、CⅡTAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)和正常对照组(n=5)。除正常对照组不作特殊处理外,其余3组均以猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin, pTg)+弗氏佐剂(complete or incomplete Freund adjuvant, CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治疗组和GFP对照组分别静脉注射重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP进行治疗,EAT模型组注射等量生理盐水。首次免疫后第29日处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHC Ⅱ类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中CD4+ T淋巴细胞上可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)的表达水平。结果:H-E染色结果表明,CⅡTAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.3±0.5)低于EAT模型组(1.4±0.4)和GFP对照组(1.5±0.2,P<0.01)。免疫组化结果显示,EAT模型组和GFP对照组甲状腺组织有弥漫性MHC Ⅱ类分子表达,而CⅡTAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性。80 μg/ml pTg刺激下,CⅡTAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.05);培养上清各组IFN-γ分泌水平与SI结果类似(P<0.01)。CⅡTAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01);CⅡTAm治疗组外周血和脾脏CD4+ T细胞ICOS分子阳性表达率亦显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01)。结论:重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHC Ⅱ类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低自身抗体滴度,对EAT有一定的治疗作用。 相似文献
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详细介绍了气功推拿治疗冠心病的操作步骤与要领。共治疗50例,对缓解心悸、胸闷、头晕头痛尤为明显。治疗后 a/E-o 比值、PEP/LVET 比值明显下降,说明推拿可降低左心室舒张末压力,提高心肌收缩力和降低动脉压。 相似文献
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加强新鲜冰冻血浆的输血管理 减少新鲜冰冻血浆的不合理应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的合理使用新鲜冰冻血浆(以下简称FFP),节约血源;减少不良输血反应;最大限度地降低经输血传播的疾病发生。方法通过对我院2007年11月1日-2008年4月30日成分输血及FFP输血合理性的统计分析,并与三甲医院成分输血的国家强制标准及先进国家成分输血的情况对比,找出目前我院成分输血中存在的问题。结果FFP使用率28.69%,远远高于先进国家,不合理使用率高达88.83%。结论加强FFP输血管理,降低FFP使用辛,防止FFP滥用。 相似文献
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目的:分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者及正常志愿者的上气道CT定量参数的差异,探讨COPD患者及健康志愿者气管指数(TI)与肺功能参数的相关性.方法:对54例COPD患者和57例健康志愿者进行肺功能检查和胸部CT检查.按照COPD GOLD分期将COPD患者分为Ⅰ~Ⅳ级,根据COPD高危因素(吸烟>10包年)将健康志愿者分为吸烟组和非吸烟组,测量主动脉弓上缘1 cm气管和左、右主支气管开口处的前后径(APD)和横径(TRD),并计算TI(TI=TRD/APD).分析COPD患者和健康志愿者的气道CT定量参数的差异,同时评估TI与肺功能的相关性.结果:COPD组和对照组间年龄、身高、体重及BMI差异无统计学意义(P>0.05).COPD组和对照组在左、右主支气管开口处TI差异有统计学意义(P=0.001、0.002),在主动脉弓上缘1 cm水平TI差异无统计学意义(P=0.134).COPD组和对照组的右主支气管TI分别与FEV1(r=0.345,P=0.000),与FVC(r=0.277,P=0.002),与FEV1/FVC(r=0.339,P=0.000)有一定的相关性.左主支气管TI与FEV1 (r=0.233,P=0.008)、FVC(r=0.184,P=0.039)、FEV1/FVC(r=0.218,P=0.014)有一定的相关性.而主动脉弓上缘1 cm水平TI与FEV1、FVC、FEV1/FVC均无明显统计学差异(P>0.05).COPD各级主支气管TI、左主支气管TI、右主支气管TI差异均无明显统计学意义(P>0.05);对照组内吸烟组和非吸烟组主支气管TI,左、右主支气管TI差异均无统计学意义(P>0.05).结论:COPD组左、右主支气管TI值均低于对照组(P<0.05),且COPD左、右主支气管的TI值与肺功能参数(FEV1、FVC、FEV1/FVC)具有一定的相关性,因此TI可作为评价COPD肺功能的量化指标. 相似文献
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目的:探索皖北地区孕妇人群中IgG3同种异型p.Arg435His(p.Arg435His-IgG3)的阳性率,为后续进一步研究p.Arg435His-IgG3与胎儿和新生儿溶血病的发生发展奠定理论基础。方法:提取177例孕妇血液样本DNA,设计特定引物,采用PCR技术对IgG3重链恒定区CH2和CH3的基因片段进行扩增,再通过Sanger测序法对扩增产物进行基因测序。将测序结果与参考序列AJ390235(IMGT基因库登录号)进行比对,以384位氨基酸密码子突变作为实验内参,查找435位氨基酸密码子是否发生突变并计算出p.Arg435His-IgG3的阳性率。结果:177例孕妇血样中有3例无效样本,在其余174例有效样本中检测到一例为IgG3同种异型p.Arg435His(g.1053927G>A),阳性率为0.57%;通过比对384位氨基酸密码子测序结果提示,在174例样本中有纯合子AGC 30例、AAT 61例,杂合子AG/AC/T 83例。结论:皖北地区孕妇人群中存在p.Arg435His-IgG3同种异型,其阳性率与继往研究相比偏低。 相似文献
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自1995年以来,笔者用补阳还五汤加减治疗糖尿病并发末梢神经病变50例,疗效显着,现报道如下。 相似文献