中医药院校中药生物技术分章教学实践

针对中医药院校中药生物技术学时短、讲授内容难度大、学生底子薄的特点,结合多年教学体会,总结该门课程分章教学的重点章节、逻辑顺序和讲授内容以及课外网络教学活动与考核方式。     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

基于全电性离子色谱的6味中药药性的蛋白质分子标记研究

目的：提出分子标记法检测中药药性物质基础研究的新思路，探讨全电性离子色谱技术用于筛选中药药性蛋白质分子标记的可行性。方法：联合应用阴、阳离子交换色谱技术，将特定pH条件下中药的全部水溶性蛋白的色谱峰呈现出来，形成全电性离子色谱图，平行比较不同药性中药的全电性离子色谱图，筛选出相同药性中药间共有的药性标识峰，对药性标识峰组分作SDS—PAGE，比较分析药性相关的共有蛋白条带，作为中药药性的蛋白质分子标记。结果：干姜、肉桂、仙茅3味热性中药在阴离子交换色谱的收集部分编号为30附近，存在多个共有特征峰；黄连、知母、金银花3味寒性中药在阴离子交换色谱的收集编号为35附近会存在多个共有特征峰；3味热性中药的共有特征峰组分在分子质量为50ku（1u=1．66054×10^-27）附近存在一条共有条带，在分子质量约为31ku处，存在2条共有条带；3味寒性中药共有特征峰组分在分子质量为31ku附近，存在2条共有条带。结论：收集编号为35和30附近的共有色谱峰在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药的寒、热药性标识峰。标识峰的共有条带分别是3味寒性中药与3味热性中药所特有的，在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药药性的蛋白质分子标记。全电性离子色谱法是一种可行的中药药性分子标记研究的新方法。     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

藏药灰兜巴基原辨析

目的:藏药灰兜巴具有良好的降糖效果,民间广泛用于治疗糖尿病及其并发症,但此药材基原描述混乱,有菌类植物、洞穴红蜘蛛、山蜘蛛、卡氏地蛛、螲蟷之说,本研究对该药材基原作出辨析与鉴定,旨在正本清源。方法:从我国主流中药材批发市场购买的灰兜巴中,采集到多枚困于其中的蜘蛛尸体,通过对蜘蛛尸体进行显微观察与管网长度测量,做出种属鉴定与分析。结果:从管巢长度测量与蜘蛛尸体的解剖结果鉴定,灰兜巴药材的基原动物为节肢动物门蛛形纲蜘蛛目地蛛科地蛛属蜘蛛,以异囊地蛛为主。结论:灰兜巴是以异囊地蛛为主的地蛛属蜘蛛吐丝筑成的条形、袋状的管巢。     

中药抗耐药性菌作用及机制研究进展

抗生素作为临床中最为重要的抗菌手段之一,目前随着耐药性菌的出现和扩散,其在医疗应用上受到了一定的限制。中药种类丰富且安全性高,为解决细菌耐药性问题提供了新途径和新思路,该文针对细菌耐药性的产生机制,将现阶段中药逆转细菌耐药性的研究进展进行总结。     

耐胆汁型牛黄转化菌的分离、鉴定及其牛黄转化活力研究

目的 分离和鉴定能够耐受牛胆汁的牛黄转化细菌,并应用到体外培育牛黄的制备。方法 从形成牛黄的牛胆囊胆汁中分离到可在牛胆汁中长期存活且具有较强牛黄转化能力的菌株（NDZNM-01）,观测其外部形态、理化性状、分类学地位、牛胆汁耐受力,以及牛黄转化活力。结果 根据对NDZNM-01菌株外部形态与生理生化特征的检测结果,判断为柠檬酸杆菌属细菌。进一步根据其16S rDNA序列的聚类分析结果,显示该菌株与其他3种柠檬酸杆菌属的细菌聚在一个分支上,但形成单系,属于新发现的菌株。应用菌株NDZNM-01发酵新鲜牛胆汁,其中的胆红素含量增加了2.35倍,胆酸含量增加了2.13倍。结论 综合对NDZNM-01菌株的形态观察、生理生化鉴定,以及分子鉴定结果,NDZNM-01属于一种能够耐受牛胆汁的柠檬酸杆菌属的肠道细菌,具有高效转化牛胆汁为牛黄的活力。该牛黄转化细菌最终命名为Citrobacter bovis NDZNM-01 Wang Houwei,菌种收藏编号为CGMCC24893。     

《生物技术》实验教学模式改革与创新

本文对《生物技术》实验教学模式进行了改革与创新。提出并实践了实验教学项目与具体科研课题相结合的教学模式。实践表明，该教学模式可以形成有价值的科研成果，有效避免教学实验资源的浪费；同时，可以激发学生的学习与科研兴趣，变被动学习为主动的求知与探索，给学生的自主发展、创造性思维的培养和综合素质的提高提供较好条件。     

低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及纤溶活性的影响

目的:研究低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及其纤溶活性的影响。方法:水蛭的低温炮制采用液氮快速冷冻和冷冻干燥技术;传统炮制参照2005药典;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异检测采用SDS-PAGE,定量分析采用Scion Image软件;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组分的纤溶活性鉴定采用纤维蛋白平板法,溶栓活性分析采用体外溶栓试验。结果:低温炮制工艺的水蛭水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,不仅SDS-PAGE蛋白条带的数量与浓度显著高于传统工艺,而且纤溶活性也显著高于传统炮制工艺。结论:不同炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成与溶栓活性有显著影响;在防止水蛭中蛋白质类活性成分的降解、变性与失活方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。该工艺适用于以蛋白为主要活性成分的动物药研究。     

基于全电性离子色谱的6味中药药性的蛋白质分子标记研究

目的：提出分子标记法检测中药药性物质基础研究的新思路，探讨全电性离子色谱技术用于筛选中药药性蛋白质分子标记的可行性。方法：联合应用阴、阳离子交换色谱技术，将特定pH条件下中药的全部水溶性蛋白的色谱峰呈现出来，形成全电性离子色谱图，平行比较不同药性中药的全电性离子色谱图，筛选出相同药性中药间共有的药性标识峰，对药性标识峰组分作SDS—PAGE，比较分析药性相关的共有蛋白条带，作为中药药性的蛋白质分子标记。结果：干姜、肉桂、仙茅3味热性中药在阴离子交换色谱的收集部分编号为30附近，存在多个共有特征峰；黄连、知母、金银花3味寒性中药在阴离子交换色谱的收集编号为35附近会存在多个共有特征峰；3味热性中药的共有特征峰组分在分子质量为50ku（1u=1．66054×10^-27）附近存在一条共有条带，在分子质量约为31ku处，存在2条共有条带；3味寒性中药共有特征峰组分在分子质量为31ku附近，存在2条共有条带。结论：收集编号为35和30附近的共有色谱峰在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药的寒、热药性标识峰。标识峰的共有条带分别是3味寒性中药与3味热性中药所特有的，在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药药性的蛋白质分子标记。全电性离子色谱法是一种可行的中药药性分子标记研究的新方法。