不同寄主桑寄生水提物对斑马鱼模型的急性毒性及肝损伤

目的 用斑马鱼模型对桑树、漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃6种寄主桑寄生水提物进行急性毒性及肝损伤研究,探索寄主对桑寄生毒性的影响,为桑寄生用药安全提供理论依据。方法 以受精后3 d（3 dpf）发育正常的AB系斑马鱼为对象进行急性毒性研究,根据毒性预实验结果,对不同寄主桑寄生水提物分别设置6个不同剂量浓度对斑马鱼进行处理,统计其72 h死亡率,采用GraphPad Prism 6.0软件绘制量-毒曲线,计算不同寄主桑寄生水提物的半数致死浓度（LC₅₀）和10%致死浓度（LC₁₀）。以受精后4 d（4 dpf）发育正常的gz15Tg/+（AB）肝脏荧光蛋白转基因斑马鱼为对象进行肝损伤研究,将不同寄主桑寄生水提物分别设置低、中、高3个剂量浓度组,设对乙酰氨基酚组,以胚胎水为空白组,给药72 h后观察斑马鱼肝脏形态和荧光面积变化,检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性。结果 急性毒性实验结果显示,桑树、漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃寄主桑寄生水提物的LC₅₀分别为1.24,0.94,0.51,0.38,0.11,0.09 g·L^-1;LC₁₀分别为0.70,0.60,0.35,0.28,0.08,0.07 g·L^-1。肝损伤实验结果,与空白组比较,对乙酰氨基酚组的斑马鱼的肝脏形态变形和荧光面积减小（P<0.01）,ALT和AST活性升高（P<0.01）,结果表明对乙酰氨基酚对斑马鱼有肝毒。桑树寄主桑寄生水提物低、中、高3个剂量浓度组斑马鱼的肝脏形态和荧光面积均无变化,ALT和AST活性均降低;漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃5种寄主桑寄生水提物中、高剂量浓度组斑马鱼均不同程度地表现出肝脏形态变化和荧光面积减小（P<0.05,P<0.01）,ALT和AST活性均明显升高（P<0.05,P<0.01）。结果表明桑树寄主桑寄生对斑马鱼没有肝脏毒性,漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃5种寄主桑寄生对斑马鱼表现出不同程度的肝损伤。结论 桑寄生毒性有无或强弱具有寄主依赖性,桑树寄主桑寄生无肝损伤,其他5种寄主桑寄生均不同程度地表现出一定的肝损伤,规范寄主来源可能是实现桑寄生用药安全的重要举措。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分相关性分析

目的:建立超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)的红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分鉴定方法,以桂花树寄主的红花寄生及其寄主桂花树样品为对照,通过与强心苷对照品或文献报道比对,鉴定其中的强心苷化学成分,分析红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分的相关性,并且评价寄主对桑寄生药材质量影响。方法:采集红花寄生及其寄主夹竹桃样品,用桂花寄主及其红花寄生为对照样品,样品用70%乙醇超声提取。采用ACQUITY UPLC HSS T3C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),以流动相0. 1%甲酸水-乙腈梯度洗脱,流速0. 6 m L·min~(-1),柱温40℃,进样量0. 5μL。以Masslynx4. 1软件分析数据,根据正、负离子模式质谱数据及元素组成分析,结合强心苷对照品和相关文献,对红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分进行鉴定,并分析各成分之间的相关性。结果:共鉴定出26个强心苷成分,其中夹竹桃寄主鉴定出强心苷成分25个,夹竹桃寄主的红花寄生鉴定出强心苷成分5个,桂花寄主及其红花寄生没有强心苷。结论:UPLC-Q-TOFMS/MS技术能快速、准确、全面地鉴定夹竹桃及其红花寄生强心苷成分,红花寄生本身不含强心苷,其强心苷为来自其寄主夹竹桃。     

GC-MS分析来自不同药性寄主的桑寄生挥发性成分

目的:通过研究来自寒热药性不同的寄主药材柳枝、桂枝,及寄生其上的桑寄生的挥发性成分,探讨不同药性寄主对桑寄生挥发性成分的影响。方法:采用水蒸气蒸馏法提取桑寄生及寄主桂枝、柳枝的挥发性成分,用GC-MS进行分析鉴定,用峰面积归一化法测定各成分的相对含量,对样品的总离子流图进行比较。结果:柳树桑寄生识别鉴定挥发性成分68个,相对含量最高的2种挥发性成分分别为反式-橙花叔醇和芳樟醇,柳树桑寄生与其寄主柳枝共有的特征性成分为15个(桑寄生的相对总含量为7.520%);肉桂桑寄生识别鉴定挥发性成分52个,相对含量最高的两个挥发性成分分别为6,10,14-三甲基-十五烷-2-酮和8-庚癸烯,肉桂桑寄生与其寄主桂枝共有的特征性成分为9个(桑寄生的相对总含量为4.878%)。结论:不同寒、热药性寄主桑寄生的挥发性成分组成及含量不同,寄主会通过寄主和桑寄生之间的特殊寄生关系,将寄主的特征性挥发性成分由寄主向桑寄生转运。