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目的建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物。方法应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证。结果优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为:反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5μg/ml,底物浓度为5nmol/L,ATP浓度为2.5mmol/L。用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为(59.1±17.4)%。结论建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础。 相似文献
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当归内酯对小鼠细胞免疫功能的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
采用体外实验检测当归总内酯(ASDL)对小鼠胸腺细胞增殖、淋巴细胞转化(LT)、白细胞介素-2(IL-2)诱生作用及对LAK细胞活性的影响.结果显示 ,ASDL单独应用及与ConA、LPS合用时均能明显促进脾细胞增殖;单独应用及与ConA合用都能促进胸腺细胞增殖;不同浓度的ASDL可增强IL-2诱导的LAK细胞杀伤活性;可明显增强小鼠脾细胞产生IL-2的能力;ASDL还能拮抗环磷酰胺(100mg/kg)引起的小鼠免疫功能抑制作用,并恢复小鼠脾细胞产生IL-2的能力. 相似文献
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目的建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物。方法应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证。结果优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为:反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5μg/ml,底物浓度为5nmol/L,ATP浓度为2.5mmol/L。用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为(59.1±17.4)%。结论建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础。 相似文献
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