何首乌苷对大脑中动脉栓塞再灌注模型大鼠皮层线粒体自噬的调控作用及神经保护机制

目的 研究何首乌苷（2,3,5,4′-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-O-glucoside,THSG）在脑缺血再灌注（cerebralischemia/reperfusion,CI/R）中对大鼠皮层神经元的保护作用。方法 采用线栓法建立大鼠短暂性大脑中动脉栓塞再灌注（transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,tMCAO/R）模型。雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和THSG低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。采用Longa 5分法评估神经功能缺损情况; TTC染色检测大鼠脑梗死体积百分比;苏木素-伊红（HE）染色检测神经元结构; Nissl染色检测Nissl小体数量; Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、PTEN诱导的激酶1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1）、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、p62的蛋白表达;透射电镜观察皮层神经元线粒体自噬情况;免疫荧光检测神经元Parkin、LC3的表达。结果 THSG显著降低了MCAO/R大鼠脑梗死体积百分比和神经功能缺损评分（P＜0.05、0.001）,降低了MCAO/R大鼠皮层神经元结构损伤和Nissl小体丢失的现象,下调了皮层区cleaved Caspase-3、Bax、p62蛋白表达（P＜0.05、0.01、0.001）,上调了皮层区Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达（P＜0.01）,促进皮层神经元中自噬体的数量增加以及PINK1、Parkin蛋白表达（P＜0.05、0.001）。结论 THSG能显著改善MCAO/R大鼠皮层神经元损伤,其神经保护机制与促进PINK1/Parkin依赖性线粒体自噬途径有关。     

滋肾活血方对2-VO模型大鼠海马CA1区线粒体自噬的调节及神经元再生的影响

目的：探讨滋肾活血方通过调节线粒体自噬促进双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)模型大鼠海马CA1区神经元新生的作用机制。方法：2-VO法建立血管性痴呆大鼠模型,随机将60只SD大鼠分为假手术组、2-VO模型组、盐酸多奈哌齐组、滋肾活血方低、中、高剂量组(8.9、17.8、35.6 g·kg^-1)。Morris水迷宫实验检测各组逃避潜伏期、跨越平台次数;透射电镜观察海马CA1区线粒体自噬情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马CA1区PTEN诱导激酶1(Pink1)、帕金蛋白(Parkin)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马CA1区线粒体自噬信号通路相关蛋白Parkin、抗增殖蛋白2(PHB2)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力学相关蛋白1(Drp1)蛋白的表达;Brdu法检测CA1区神经元再生情况。结果：与假手术组比较,2-VO模型组大鼠学习、空间记忆能力明显下降(P<0.05),海马CA1区见线粒体结构受损,自噬溶酶体形成,Parkin、Pink1 mRNA及Parkin、PHB2、Drp1蛋白...     

逍遥散加味对青幼期抑郁模型大鼠抑郁行为及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨逍遥散加味百合、合欢皮（百欢逍遥汤）通过调节小胶质细胞活化改善青幼期大鼠抑郁样行为的作用机制。方法 应用慢性不可预见性温和应激法（CUMS）创建青幼期（3~8周龄）抑郁大鼠模型，将60只青幼期SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组、百欢逍遥汤低、中、高剂量组（5.36、10.71、21.42 g·kg^-1），蔗糖偏好实验（SPT）检测大鼠糖水偏好值；强迫游泳实验（FST）检测大鼠不动时间；旷场实验（OFT）检测总路程、中心区域路程、水平穿越方格数及前肢离地垂直活动次数；Morris水迷宫实验（MWM）检测逃避潜伏期和穿梭平台次数；免疫荧光检测海马区M1型小胶质细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型小胶质细胞极化标志物巨噬细胞甘露糖受体（CD206）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织iNOS、CD206和促炎细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及抗炎细胞因子IL-4、IL-10的mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马iNOS和CD206的蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马炎症因子IL-4、IL-6的含量。结果 与正常组比较，模型组大鼠蔗糖偏好值明显降低（P<0.05），不动时间明显增加（P<0.05），运动和探索行为明显减少（P<0.05），学习、空间记忆水平明显降低（P<0.05），iNOS的mRNA和蛋白水平均明显提高（P<0.05），促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也明显提高（P<0.05）。与模型组比较，百欢逍遥汤干预后青幼期抑郁大鼠的蔗糖偏好值明显升高（P<0.05），不动时间显著缩短（P<0.01），运动和探索行为明显增加（P<0.05），学习和空间记忆能力显著提升（P<0.01），百欢逍遥汤高剂量组海马区iNOS阳性表达和蛋白含量显著降低（P<0.01），TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著下降（P<0.01）；百欢逍遥汤高剂量组CD206阳性表达显著增加（P<0.01），IL-4、IL-10水平显著上升（P<0.01）。与氟西汀组比较，百欢逍遥汤高剂量组蔗糖偏好率显著升高（P<0.01），不动时间显著减短（P<0.01），中心区域路程显著增多（P<0.01），学习和空间记忆能力显著增强（P<0.01），海马区iNOS阳性表达和mRNA水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显较低（P<0.05，P<0.01）；CD206阳性表达显著更高（P<0.01），IL-4、IL-10水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 百欢逍遥汤对青幼期大鼠抑郁行为的改善作用与抑制海马区小胶质M1型极化，促进M2型极化有关。