活血通督汤对大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的修复作用

目的：通过对大鼠脊髓损伤（SCI）后的行为学评分、脊髓组织病理分析以及血-脊髓屏障（BSCB）功能的评测,观察活血通督汤对大鼠SCI后BSCB的影响。方法：将24只雌性SD大鼠随机均分为假手术组、模型组及活血通督汤组,每组8只。假手术组仅咬除椎板不损伤脊髓,模型组和活血通督汤组采用改良Allen’s法建立SCI模型。分别于第1、3、5、7天行BBB评分,7 d后取材。采用HE染色观察大鼠脊髓组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,透射电镜观察BSCB紧密连接超微结构,EB染色检测BSCB通透性。结果：与假手术组比较,模型组和活血通督汤组相同时点BBB评分显著降低（P<0.01）,在干预第7天时,活血通督汤组大鼠BBB评分显著高于模型组（P<0.05）。HE染色结果显示：与模型组比较,活血通督汤组炎症细胞浸润有所减少,神经细胞形态结构较完整且数量增多,但仍存在脊髓空洞样病变;尼氏染色结果显示：与模型组比较,活血通督汤组神经细胞形态较好且数量增多,尼氏体数量较多,空泡样改变减少,瘀血面积较小或消失;透射电镜结果显示：与模型组比较,活血通督汤组大鼠脊髓血管内皮细胞紧密连接较完整,血...     

香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化

背景：选择一种高效、细胞损伤低的诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的方法是其应用于临床的前提。 目的：拟采用传统中药香丹注射液联合生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子的诱导作用进行比较。 设计、时间及地点：免疫细胞化学水平的细胞观察实验,于2006-09/2008-04在潍坊医学院组织胚胎学教研室完成。 材料：人脐血标本取自潍坊市妇幼保健院,香丹注射液的有效成分为丹参素。 方法：采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法筛选出人脐血间充质干细胞,体外扩增,以免疫荧光方法检测表面抗原。分为2组进行诱导分化,香丹注射液联合生长因子诱导组采用30 g/L香丹注射液联合表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子诱导组进行比较。 主要观察指标：采用免疫细胞化学方法和免疫荧光方法检测诱导前后神经元特异性标志（神经元核抗原、β-TubulinⅢ）和神经胶质纤维酸性蛋白的表达。 结果：香丹注射液联合生长因子诱导法对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高。脐血间充质干细胞经香丹注射液诱导后出现类似神经细胞的形态改变,胞体呈椭圆形,伸出长突起。免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元核抗原和β-TubulinⅢ,而神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较少。香丹注射液联合生长因子诱导组的 β-TubulinⅢ和神经元核抗原的阳性细胞率显著高于生长因子诱导组（P < 0.05）,神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率明显低于生长因子诱导组（P < 0.05）。 结论：香丹注射液联合生长因子诱导对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高,优于生长因子诱导法。且体外诱导后细胞主要分化为神经元样细胞,而非星形胶质细胞。     

体外不同诱导条件对人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的研究

目的观察体外不同诱导条件对人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的作用,探讨最佳诱导方法。方法取第3代脐血MSCs进行诱导,分为化学诱导剂组、生长因子诱导组、丹参素联合生长因子诱导组。采用免疫细胞化学方法和免疫荧光方法检测诱导前后神经元特异性标志小鼠抗神经元核抗原(NeuN)、兔抗微管蛋白(β-TubulinⅢ)和星形胶质细胞特异性标志神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。结果 MSCs经3种方法诱导后出现类似神经元样细胞的形态改变,伸出长突起。免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NeuN和β-TubulinⅢ,而GFAP阳性细胞较少。丹参素联合生长因子诱导组β-TubulinⅢ及NeuN的阳性细胞率均明显高于生长因子诱导组和化学诱导剂组,而GFAP阳性细胞率明显低于生长因子诱导组,差异均有统计学意义。结论丹参素联合表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在体外可定向诱导人脐血MSCs分化为神经元,诱导效果最佳。     

基因差异表达筛选技术在神经干细胞研究中的应用

神经干细胞（neural stem cells，NSCs）具有自我更新、自我增殖和多向分化潜能，它的发现为人们深入研究中枢神经系统的发育、分化以及探索治疗神经系统疾病的新途径开辟了新的思路。研究证实，哺乳动物的胚胎和成体内均存在NSCs。在胚胎时期，神经干细胞存在于大脑皮质、纹状体、海马、嗅球、小脑、脊髓等区域；在成体NSCs存在于脑室带、     

足月小样儿及正常胎儿脐血间充质干细胞的分离培养及形态学观察

目的建立一种简单实用的脐血间充质干细胞(MSCs)的分离培养方法,观察其生物学特性,为脐血MSCs在临床的广泛应用奠定基础。方法无菌条件下采集足月小样儿和足月正常胎儿分娩脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,采用MesencultTM培养基培养,观察脐血MSCs的生物学特性,免疫荧光方法检测其表面标记物的表达情况。结果采用MesencultTM培养基,正常儿脐血MSCs培养成功率为66.67%,相同培养条件下,足月小样儿脐血培养成功率低于正常体重胎儿的脐血。人脐血MSCs强表达CD29、CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志CD34。结论我们建立了最佳的脐血MSCs的分离培养方法。     

丹参素联合生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的研究

人脐血间充质干细胞(MSCs)是从脐带血中分离和培养的一种多潜能成体干细胞。本实验通过密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法筛选出脐血MSCs,体外扩增,免疫荧光方法检测表面抗原。传3代的脐血MSCs经20ng/mlbFGF预诱导24h、3μg/μl丹参素诱导6h、20ng/mlEGF和20ng/mlbFGF诱导分化5d后出现类似神经元样细胞的形态改变,伸出长突起。免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元特异性标志NeuN和β-TubulinⅢ,而星形胶质细胞特异性标志GFAP阳性细胞较少。上述结果表明,丹参素联合生长因子EGF和bFGF在体外可定向诱导人脐血MSCs分化为神经元样细胞。     

人脐血MSCs的生物学特性及其向神经细胞分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从脐带血中分离和培养的一种多潜能成体干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,在一定条件下可以分化成为神经细胞。脐血间充质干细胞的这些特性吸引了许多学者用它来治疗神经系统疾病如神经退行性疾病,神经损伤和中风等,并取得了一定进展。本文就脐血间充质干细胞的分离纯化和培养方法、生物学特性以及向神经细胞的分化作一简要综述。     

香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化

背景:选择一种高效、细胞损伤低的诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的方法是其应用于临床的前提.目的:拟采用传统中药香丹注射液联合生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子的诱导作用进行比较.设计、时间及地点:免疫细胞化学水平的细胞观察实验,于2006-09/2008-04在潍坊医学院组织胚胎学教研室完成.材料:人脐血标本取自潍坊市妇幼保健院,香丹注射液的有效成分为丹参素.方法:采用密度梯度离心法分离人脐皿单个核细胞,贴壁法筛选出人脐血间充质干细胞,体外扩增,以免疫荧光方法检测表面抗原.分为2组进行诱导分化,香丹注射液联合生长因子诱导组采用30 g/L香丹注射液联合表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质下细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子诱导组进行比较.主要观察指标:采用免疫细胞化学方法和免疫荧光方法检测诱导前后神经元特异性标志(神经元核抗原、β-TubulinⅢ)和神经胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:香丹注射液联合生长因子诱导法对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高.脐血间充质干细胞经香丹沣射液诱导后出现类似神经细胞的形态改变,胞体呈椭圆形,伸出长突起.免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元核抗原和β-TubulinⅢ,而神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较少.香丹注射液联合生长因子诱导组的β-TubulinⅢ和神经元核抗原的阳性细胞率显著高于生长因子诱导组(P＜0.05),神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率明显低于生长因子诱导组(P＜0.05).结论:香丹注射液联合生长因子诱导对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高,优于生长因子诱导法.且体外诱导后细胞丰要分化为神经元样细胞,而非星形胶质细胞.     

羊膜干细胞免疫调节新进展

羊膜干细胞是从新生胎儿羊膜上分离得到的干细胞,包括羊膜上皮细胞(Amnion Epithelial Cells,AECs)和羊膜间充质干细胞(Amnion Mesenchymal Stem Cells,AMSCs).近年来研究证实,羊膜干细胞具有强大的分化能力,可在体外可分化为心肌细胞、胰岛β细胞、肝脏细胞、骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及神经元等来自三个不同胚层的细胞,还可分泌大量的细胞因子,通过旁分泌作用达到抑制炎症、参与免疫调节的功效,在多种器官损伤修复中发挥重要作用.本文简要综述了羊膜细胞免疫调节研究新进展.     

β-catenin在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

目的探讨高温致神经管畸形（neural tube defects,NTDs）的分子机制。方法在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后16、40、64 h（相当于胚龄第8.5、9.5、10.5 d）处死孕鼠,剖腹取鼠胚,应用免疫组织化学染色技术和Western-blot法检测NTDs发生过程中β-catenin在神经上皮细胞中的表达变化。结果免疫组化结果显示：β-catenin在各个时间点实验组和对照组的神经上皮细胞以及周围间充质细胞都有表达,高温处理后16 h和40 hβ-catenin与对照组相比表达减弱（P〈0.05）。Western-blot结果显示：高温处理后16和40 h,β-catenin在实验组神经上皮细胞内的表达均比对照组明显减弱;高温处理64 h,实验组与对照组表达无明显差异。结论β-catenin的表达变化与神经管的发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。