过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制

目的：探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶（inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B）对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法：将携带INPP4B的重组质粒载体pEAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系（Flag-INPP4B组）,同时设立未处理组为对照（Mock组）。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2（Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2）以及磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinase,PI3K）下游信号分子蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/AKT）和血清糖皮质激素调节激酶-3（serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3）蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞内PI（3,4）P2和PI（3）P的水平。结果：INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升（mRNA：t=9.724,P=0.000;蛋白：t=19.520,P=0.000）,提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强（F=31.870,P=0.000）。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率（t=6.999,P=0.002）;使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降（t=24.710,P=0.000）、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加（t=6.398,P=0.003）。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平（t=10.470,P=0.000）,而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响（t=0.285,P=0.790）。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI（3,4）P2的水平（t=4.515,P=0.011）,同时明显升高PI（3）P的水平（t=5.681,P=0.005）。结论：本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。     

胸段食管鳞癌术后复发模式及术后放疗靶区的研究北大核心

目的:研究胸段食管鳞癌术后复发模式,为术后放疗靶区勾画提供参考。方法:回顾分析我院2012年7月至2017年5月收治术后复发的81例胸段食管鳞癌患者的临床资料,参照AJCC第八版食管癌分期,将第1-8M站定义为上中纵隔淋巴结区,8Lo、9、15站定义为下纵隔淋巴结区,16-20站定义为上腹部淋巴结区。标记患者的复发部位,并分析局部复发、区域复发和远处转移的模式。结果:中位复发时间为12个月(2~103个月)。6例(7.4%)患者发生单纯局部复发,64例(79.0%)患者发生区域复发,11例(13.6%)患者发生远处转移。区域淋巴结复发中最高危的复发区域为上中纵隔淋巴引流区,此区域包含了82.8%的复发淋巴结,其次为上腹部淋巴结引流区(13.6%)。11例患者发生上腹部淋巴结复发,其中10(90.9%)例为胸下段,7例(63.6%)患者术后分期≥Ⅲ_(b)期。结论:胸段食管鳞癌术后复发模式以区域淋巴结复发为主,上中纵隔淋巴引流区为最高危复发区域,术后放疗靶区应重点包含。对于术后分期较晚的胸下段食管鳞癌,上腹部淋巴结引流区可能需要涵盖在放疗靶区内。吻合口、瘤床和下纵隔复发风险低,可不必常规涵盖在放疗靶区内。     

经扩增的脐血细胞在小鼠体内短期造血重建的研究

目的 探讨体外扩增后人脐血细胞在小鼠体内的短期造血重建能力。方法 采用脾结节形成法和祖细胞培养等技术,观察受体小鼠外周血、脾脏和骨髓的短期造血恢复情况。结果 照射小鼠脐血移植后其生存时间延长,外周血象恢复加速。脾脏有多系细胞组成的造血结节(CFU-S-13d),移植后d30骨髓中培养出粒单系(CFU-GM)和红系祖细胞(CFU-E),且CFU-S、CFU-GM和CFU-E计数较新鲜脐血细胞组无明显差异。从30d活存的小鼠外周血液中检出了人核型血细胞。结论 经扩增的人脐血造血细胞同新鲜细胞一样能够在致死性照射小鼠体内短期造血重建。     

过表达Beclin1可促进黑色素瘤A375细胞的自噬并抑制其上皮间质转化

目的 探讨Beclin1的过表达对黑色素瘤A375细胞自噬及EMT过程的影响。方法 采用脂质体转染法将人恶性黑色素瘤细胞A375分为3组,分别为空白组(只转染试剂,无质粒)、NC组(转染空质粒)、转染组(转染携带Beclin1质粒),3组细胞分别接种于3组裸鼠皮下,观察成瘤后21 d各组移植瘤的生长情况。采用RT-PCR和Western blotting分别检测各组肿瘤组织中Beclin1、LC3Ⅱ、Vimentin、N-cadherin和E-cadheirn mRNA及蛋白表达水平。结果 3组接种A375细胞的裸鼠成瘤率100%,转染组肿瘤生长速度低于空白组和NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,空白组与NC组比较,各基因mRNA的表达无明显差异(P>0.05);相对于空白组与NC组,转染组Beclin1、LC3Ⅱ和E-cadherin的mRNA表达均升高,Vimentin和N-cadherin的mRNA表达均降低,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果显示,空白组与NC组比较,各基因蛋白的表达无明显差...     

带蒂无覆盖颊脂垫瓣在腭裂松弛切口的临床应用

目的探讨带蒂无覆盖颊脂垫瓣在腭裂修复手术中,即刻移植覆盖于松弛切口的裸露创面,观察其临床应用效果。方法选取该院2013年1—6月收治的70例1~8岁腭裂患儿作为研究对象,按照收治时间分为对照组与研究组各35例,对照组采用碘仿纱条疗法;研究组采用带蒂无覆盖颊脂垫瓣方法进行治疗,比对两组患儿临床治疗效果（穿孔、发热、并发症发生情况）。结果研究组腭裂患儿通过采用带蒂无覆盖颊脂垫瓣方法,穿孔3例（8.6%）、发热4例（11.4%）、并发症0例,与对照组穿孔10例（28.6%）、发热14例（40%）、并发症5例（14.3%）相比较,经统计学分析,差异有统计学意义（P〈0.05）。手术后,随访观察颊脂垫瓣一月左右上皮化,经6~9个月追踪观察,颊脂垫瓣完全上皮化,其外观、色泽与周围组织无异,无明显瘢痕。结论带蒂无覆盖颊脂垫瓣血供丰富、抗感染能力较强、临床治疗效果显著,具有较高的临床应用价值,值得在今后临床工作中推广使用。     

重组改构人肿瘤坏死因子治疗晚期肺癌癌性胸腔积液疗效的影响因素分析

目的:分析影响重组改构人肿瘤坏死因子(Recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmhTNF)治疗晚期肺癌癌性胸腔积液疗效的因素.方法:回顾性分析我科应用rmhTNF治疗晚期肺癌癌性胸腔积液198例病人的临床资料,分析年龄、性别、病理类别、胸水部位、胸水量、肿瘤远处转移、KPS评分、治疗药物剂最(小剂量rmhTNF 500万IU组、大剂量rmhTNF 1500万IU组)、全身化疗等因素对肺癌癌性胸水疗效的影响,对有意义的因素进一步采用非条件Logistic同归分析.结果:198名患者中CR 53例,PR 95例,总有效率为74.7%.单因素分析显示年龄、胸水部位、胸水量、KPS评分、治疗药物剂量、辅助化疗等对肺癌胸水的疗效有影响;多因素分析显示治疗药物剂量、KPS评分、胸水量与疗效有关.结论:治疗药物剂量、KPS评分、胸水量是rmhTNF治疗肺癌恶性胸腔积液的独立的影响因素.大剂量rmhTNF 1500万IU、KPS评分>60,胸水量少的患者疗效好.     

噻托溴铵治疗中重度支气管哮喘30例临床观察

目的:探讨噻托溴铵在中重度支气管哮喘治疗中的意义。方法:将60例中重度支气管哮喘患者随机分为观察组和对照组,两组患者均依据2009 GINA规范治疗3个月,其中观察组每天增加吸入一次噻托溴铵18μg。比较两组患者治疗前后性别、年龄、病程、哮喘控制测试(ACT)评分、血清免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸细胞计数(EOS)、吸入支气管扩张剂后一秒钟用力呼气量(FEV1)、用力呼气中期流速(FEF25%~75%)值、用力呼气峰速(PEF)及每周急救药使用次数等指标变化并进行统计学分析。结果:①两组间患者性别、年龄、病程、治疗前各指标差异无统计学意义(P0.05)。②治疗后两组各指标与治疗前比较,差异有统计学意义(P0.01)。③治疗后,观察组的ACT评分、FEV1、PEF、FEF及每周急救药使用喷数与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。治疗后观察组EOS、IgE与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:噻托溴铵治疗中重度支气管哮喘有效,且以扩张气道、改善症状和肺功能为主,其是否有非特异性抗炎作用还需进一步研究论证。     

强化他汀类药物治疗对急性冠脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗后炎症-凝血网络的影响

目的通过观察不同剂量阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗后炎性因子及凝血系统的影响,深入探讨阿托伐他汀在ACS二级预防中的作用。方法入选2015年1月至2017年1月于北京市海淀医院行PCI治疗的ACS患者380例,随机分为常规治疗组120例(阿托伐他汀术前20 mg/d,术后10 mg/d)、中剂量组120例(阿托伐他汀术前40 mg/d,后20 mg/d)及高剂量组140例(阿托伐他汀术前80 mg/d,术后40 mg/d),另外入选同期50例行冠状动脉造影术正常者作对照组,观察治疗前、治疗后1个月和3个月患者血脂浓度、血清炎症因子如阿托伐他汀超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)以及凝血指标组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制物(tissuefactor pathway inhibitor,TFPI)浓度。临床随访6个月记录并比较不良反应发生率及主要不良心血管事件(ma-jor adverse cardiovascular events,MACE)发生率。结果治疗前3组ACS患者炎症因子hs-CRP、TNF-α、IL-6及凝血因子TF浓度均高于正常对照组,而TPIF浓度明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);治疗1个月后,高剂量组炎症因子及TF较治疗前均明显降低,凝血因子TFPI浓度较治疗前升高,中剂量组仅hs-CRP浓度降低,差异有统计学意义(P均0.05);治疗3个月后,中、高剂量组炎症因子水平及TF浓度均明显降低,TFPI浓度则显著升高,差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。治疗1个月、3个月后3组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05);而高剂量组MACE发生率均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论强化他汀治疗能够显著降低血浆炎症因子浓度,升高凝血因子TFPI浓度,降低MACE发生率,且不增加不良反应发生。     

调动护士积极性实践优质护理服务

为适应新时代护理发展的要求,顺应现代护理服务的发展,各级医院纷纷推进开展了优质护理。要达到优质护理服务水准,调动护士的积极性是必要条件。只有广大护士积极全身心投入到护理工作中,才能为病人提供优质护理服务。     

MIG(CXCL9)表达载体构建及体外活性鉴定

目的构建MIG（CXCL9）真核表达载体,为利用MIG研究肿瘤基因治疗奠定基础。方法从pBLAST-MIG上切下含MIG全长的cDNA序列,定向插入pORF-mcs真核表达质粒,构建pORF-MIG重组质粒;然后经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染COS-7细胞;再进一步用免疫印迹法鉴定重组质粒的表达活性,用趋化试验鉴定生物学活性。结果pORF-MIG重组质粒经酶切分析和测序证实含有MIG的全长cDNA序列,转染COS-7细胞后高效表达MIG蛋白,对活化的淋巴细胞有趋化作用。结论成功构建了MIG（CXCL9）真核表达质粒,为进一步利用pORF-MIG研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。