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1.
目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1( )真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础. 相似文献
2.
增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。 方法 据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。 结果 成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。 结论 获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。 相似文献
3.
诱骗受体(decoy receptor)是指那些胞膜外区与功能性的受体胞外区结构相似,具有结合配体,但胞浆区缺乏转导信号能力的受体.因此,诱骗受体可与功能性的受体竞争性结合相同的配体,从而在受体水平对免疫功能进行负向调控.从新的角度改变了对传统受体的认识,同时为感染,肿瘤的研究和治疗策略提供了新的资料、线索与思路.本文就近年来发现的有关诱骗受体及其功能作一综述. 相似文献
4.
年龄及其行为因素与糖尿病患者饮食控制及其相关危险因素的关系:4265例分析 总被引:3,自引:1,他引:3
目的:通过对糖尿病患者饮食治疗情况调查,分析不同依从性患者临床特点及疾病与代谢控制情况,为进一步搞好糖尿病饮食治疗提供依据。方法:对1994-06/2003-07在解放军第三。六医院糖尿病中心首次进行糖尿病并发症筛查的4265例糖尿病患者进行饮食治疗情况调查。按照尚未控制饮食(未控制组)、饮食控制好(优组)、饮食有时控制不好(良组)、饮食经常控制不好(中组)、不控制饮食(差组)进行分组。比较各组间临床特点(年龄、病程、吸烟及饮酒情况、受教育与职业状况、体质量指数、腰围、)、代谢控制(糖代谢、脂代谢、胰岛功能等)情况、糖尿病并发症患病等疾病状况之间的差异。对饮食控制情况与临床特点、代谢控制指标及并发症之间的关系进行分析。结果:未控制组717例(16.8%),优组1006例(23.6%),良组1402例(32.9%),中组801例(18.8%),差组339例(8.0%)。除未控制组外,其余各组间病程、空腹胰岛素及餐后胰岛素间差异均无显著性意义(P&;gt;0.05)。饮食控制顺从性差的患者腰围、体质量指数、空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油、尿微量白蛋白、眼底病变及酮症酸中毒均显著高于饮食控制好的患者(t=1.961~&;gt;3.291,P&;lt;0.05~0.01),而年龄及受教育程度高的患者饮食控制相对较好。结论:饮食控制好的患者血糖、血脂、腰围、体质量指数均得到明显改善,糖尿病的并发症与合并症减少;年轻的及受教育程度低的患者在饮食控制较差问题相对严重。 相似文献
5.
罂粟碱的体内与体外代谢物研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用HPLC-MSn检测罂粟碱及其在大鼠体内(大鼠粪便)和体外(肝微粒体, 肠道菌)代谢物。体内与体外的代谢物经C18小柱进行富集和纯化后, 直接采用优化的HPLC-ESI/ITMSn方法对样品进样分析。以罂粟碱标准品为对象优化高效液相色谱/电喷雾离子阱质谱(HPLC-ESI/ITMSn )实验条件, 分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律, 作为罂粟碱大鼠体内与体外代谢物结构分析的依据。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱HPLC-ESI/ITMSn电离规律。在大鼠粪便中有原药及其8种代谢产物。体外代谢物检测到原药的脱甲基和羟基化。 相似文献
6.
7.
8.
目的通过对糖尿病患者饮食治疗情况调查,分析不同依从性患者临床特点及疾病与代谢控制情况,为进一步搞好糖尿病饮食治疗提供依据.方法对1994-06/2003-07在解放军第三○六医院糖尿病中心首次进行糖尿病并发症筛查的4 265例糖尿病患者进行饮食治疗情况调查.按照尚未控制饮食(未控制组)、饮食控制好(优组)、饮食有时控制不好(良组)、饮食经常控制不好(中组)、不控制饮食(差组)进行分组.比较各组间临床特点(年龄、病程、吸烟及饮酒情况、受教育与职业状况、体质量指数、腰围、)、代谢控制(糖代谢、脂代谢、胰岛功能等)情况、糖尿病并发症患病等疾病状况之间的差异.对饮食控制情况与临床特点、代谢控制指标及并发症之间的关系进行分析.结果未控制组717例(16.8%),优组1006例(23.6%),良组1 402例(32.9%),中组801例(18.8%),差组339例(8.0%).除未控制组外,其余各组间病程、空腹胰岛素及餐后胰岛素间差异均无显著性意义(P>0.05).饮食控制顺从性差的患者腰围、体质量指数、空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油、尿微量白蛋白、眼底病变及酮症酸中毒均显著高于饮食控制好的患者(t=1.961~>3.291,P<0.05~0.01),而年龄及受教育程度高的患者饮食控制相对较好.结论饮食控制好的患者血糖、血脂、腰围、体质量指数均得到明显改善,糖尿病的并发症与合并症减少;年轻的及受教育程度低的患者在饮食控制较差问题相对严重. 相似文献
9.
10.
目的 克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况。结果测序证实得到HRSVF基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带。结论成功克隆HRSVF基因,并在真核细胞中获得表达。 相似文献