基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析四妙勇安汤的化学成分北大核心CSCD

基于超高效液相-离子阱-静电场轨道肼质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术分析鉴定四妙勇安汤水煎液的化学成分。采用UPLC BEH C;色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^(-1)。质谱使用加热电喷雾离子源(HESI),负离子模式采集数据。通过对照品比对总结各类成分裂解规律,结合精确相对分子质量和一二级质谱信息,以及相关文献和MassBank、HMDB等数据库的数据支持,从四妙勇安汤中鉴定出72个化学成分,包括30个环烯醚萜苷类,9个有机酸类,15个黄酮类,10个苯丙素类,7个三萜类和1个糖类成分。该研究建立的四妙勇安汤化学成分的鉴定方法较为全面、快速、准确,总结了四妙勇安汤各类型成分的裂解规律,为其物质基础和药效作用机制的阐明奠定基础。     

ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型的中医证型

目的:探讨长期高脂饲养ApoE^-/-小鼠中医的证型,为抗动脉粥样硬化证候中药的研究提供证型动物模型。方法:将20只雄性ApoE^-/-小鼠按随机数字表法分为四妙勇安汤组(SM组)和模型组(M组),每组10只,采用高脂饲料喂养14周建立动脉粥样硬化模型,SM组于造模开始进行预防性给药。同时以C57BL/6小鼠10只作为正常对照组(N组)。检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,观察主动脉和肝脏病理,评价是否为血瘀痰湿证型;通过IL-6、核因子-κB免疫组织化学变化评价是否为毒损证型。结果:与N组比较,M组小鼠血清TC、TG、LDL-C显著提高,HDL-C显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);肝脏病理出现球形脂滴及炎性细胞浸润;主动脉出现明显斑块,血管内膜厚度(IT)、中膜厚度(MT)、斑块面积(PA)及IT/MT明显增大,差异有统计学意义(P<0.05),血管管腔面积(LA)明显减小,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学显示IL-6、核因子-κB在主动脉的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,SM组能够明显降低ApoE^-/-小鼠主动脉PA、IT及IT/MT,明显降低IL-6及核因子-κB表达,差异有统计学意义(P<0.05);减轻肝脏病变;但对血脂水平无明显作用。结论:长期高脂饲料饲养ApoE^-/-小鼠制备的动脉粥样硬化模型为痰湿血瘀毒损型病证结合动物模型。     

四妙勇安汤通过拮抗Ox-LDL脂代谢途径对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化颈动脉斑块的影响

目的：探讨四妙勇安汤通过拮抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)脂代谢途径对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化颈动脉斑块的干预作用及机制。方法：采用2周高脂喂养+右侧颈总动脉外置套管术+8周高脂饲养制备ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化颈动脉斑块模型。实验共分为5组,假手术组和模型组去离子水灌胃,其余各组分别为四妙勇安汤组、吡格列酮组和阿托伐他汀组。全自动生化仪对血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平检测;酶联免疫法对血清OxLDL含量测量;颈动脉应用苏木素-伊红染色察看其病理形态学变化,并对颈动脉参数测定;采用免疫组化和免疫印迹法分别检测小鼠颈动脉组织中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)含量以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR γ)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白变化。结果：与假手术组对比,模型组小鼠血清HDLC升高(P<0.05);与模型组比较,四妙勇安汤组和阿托伐他汀组TC、LDL-C均升高(P<0.05),HDL-C均降低(P<0.05);吡格列...     

酒制豨莶草和生豨莶草对缺氧损伤的H9c2心肌细胞保护作用的比较研究

目的:比较酒制豨莶草和生豨莶草对大鼠心肌细胞缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制,为临床用药选择提供实验依据。方法:采用H9c2细胞缺氧模型,给予不同浓度酒制豨莶草和生豨莶草干预,CCK-8法测定细胞成活率,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,超氧化物歧化酶(SOD)活性;荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测凋亡B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:缺氧16 h成功制备H9c2心肌细胞缺氧损伤模型;筛选确定300 μg/mL是生豨莶草和酒制豨莶草最佳给药浓度;与模型组比较,酒制豨莶草和生豨莶草均可提高细胞成活率(P<0.05),改善损伤细胞形态,减轻LDH外漏(P<0.05),降低ROS的含量(P<0.05),增加SOD活性(P<0.05),上调Bcl2(P<0.05)和Bcl-2/Bax的表达。给药浓度为300 μg/mL时,生豨莶草在提高SOD活力和细胞成活率方面优于酒制豨莶草(P<0.05),酒制豨莶草在抑制LDH外漏的作用强于生豨莶草,在活性氧(ROS)含量和Bcl、Bax蛋白表达方面,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:酒制豨莶草和生豨莶草对缺氧损伤的H9c2心肌细胞具有保护作用,其机制可能是通过抵抗氧化应激,抑制心肌细胞凋亡。