登革2型病毒及其NGC株、M株E基因的原核蛋白对HUVEC通透性的影响

目的：研究登革2型病毒（DENV-2）、登革2型病毒国际参考株（NGC）E基因1-476序列原核蛋白、登革2型病毒贵州蚊虫分离株（M）E基因1476序列原核蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）通透性的影响.方法：将DENV-2 M株和NGC株E基因1-476序列原核表达产物及DENV-2接种于HUVEC单层细胞,用tran-swell法检测HUVEC的通透性,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果：DENV-2、NGC株E基因的原核蛋白、M株E基因的原核蛋白分别在30 min、3h、12 h时对HUVEC通透性的影响最为明显,透射电镜结果显示有细胞超微结构的改变.结论：DENV-2、DENV-2 NGC株E基因原核蛋白、M株E基因原核蛋白对HUVEC通透性、细胞超微结构有明显影响.     

Redon高负压引流系统在跟骨骨折术后的应用

目的观察Redon高负压引流系统在跟骨骨折手术中应用的临床效果.方法将60例跟骨骨折手术患者随机分为观察组(30例)和对照组(30例),两组病例均采用外侧L形切口,行骨折开放复位内固定,术后观察组采用Redon高负压引流系统引流,对照组采用普通负压吸引球引流.术后对2组的引流量、引流时间、术后4 d体温变化、感染率、伤口愈合情况进行比较.结果观察组术后总引流量高于对照组;观察组术后引流时间、术后3d的平均体温均明显低于对照组.对照做组术后2例出现切口延迟愈合,1例切口感染,而观察组无l例切口发生感染及延迟愈合.结论 Redon高负压引流系统引流效果好,可预防伤口感染、促进伤口愈合,便于术后早期功能锻炼.     

登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白多克隆抗体的制备

目的制备登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白的小鼠多克隆抗体并进行鉴定。方法利用SDS-PAGE电泳的方法将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,切割目的条带并研磨制成抗原,皮下多点分次注射BALB/c小鼠,采用Western-Blot、间接免疫荧光法对小鼠血清多克隆抗体进行鉴定。结果经SDS-PAGE电泳成功地将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,并获取了抗登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白的多克隆抗体。结论本实验中所用到的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白为可溶性抗原,通过切胶研磨制成颗粒性蛋白抗原能获得良好的免疫效果,该方法制备的抗原浓度及纯度高,由此获得了高效价高特异性的多克隆抗体。     

解剖钛板内固定治疗跟骨关节内骨折

目的探讨跟骨解剖钛板治疗跟骨关节内骨折的临床效果.方法 自2010年1月一2012年2月应用跟骨外侧L形入路对60足跟骨关节内骨折行切开复位解剖钛板内固定术,观察临床效果.结果 60例均获随访,时间为3个月-16个月;术前B?hler角0-20(10.0±4.5)°,术后,术后B?hler角恢复至25-40(35.0±3.5)°.根据Maryland评分标准进行疗效评定:优40例,良14例,可6例,优良率90%.骨折愈合时间为3-6个月.术后2例发生伤口延迟愈合,1例发生伤口感染,经治疗后伤口愈合.结论 选择恰当的手术时机,精细的术中操作,良好的术后管理,解剖钛板内固定治疗跟骨关节内骨折是一种有效的方法.     

登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究

目的 研究登革病毒Ⅱ型(DENV-2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)通透性的影响.方法 DENV-2病毒滴定,DENV-2接种HUVEC单层细胞,用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况(30 min,l、3、6、12、24、30、36、42、48、72 h),实时定量荧光PCR方法检测病毒载量,transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果 DENV-2对HUVEC通透性的影响30 min时作用最为明显,其次为42 h时.且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关.透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落,胞质溶解,部分核膜间隙增宽,甚至是细胞核中也存在裂隙,部分线粒体嵴消失甚至空化,线粒体髓样变,包膜不完整.结论 DENV-2对HUVEC通透性有影响,为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据.

Abstract：

Objective To research Dengue virus type 2 (DENV-2) to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) permeability. Methods The titration of DENV-2 was detected and HUVEC infection DENV-2 layer of cells. At different time points after infection (30 min, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 30 h,36 h, 24 h, 42 h, 48 h,72 h), the permeability in HUVEC were detected after Dengue virus infection. The virus load in HUVEC was detected by quantitative real-time PCR. And ultrastructure in HUVEC was observed by electron microscope. Results The permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection by time lasting. The most permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection at 30 min and 42 h. And at the same time the virus load were most value in all of time. The results of the cell membrane were changed by electron microscope. The deciduous cell microvillus and dissd endochylema were founded. And some of nuclear membrane blank was wided by Dengue virus. Even the leakage was founded in cell nucleus. The other change included that disappearance mitochondrial and vacuolization crista, elder pith change mitochondria. In addition, the complete of cell membrane were dissolved. Conclusion The permeability of HUVEC was changed by DENV-2. To explore the pathogenesis of Dengue virus provide certain theoretical basis.     

登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核载体的构建及蛋白表达

目的体外扩增登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列,构建pET28a(+)-ME、pET28a(+)-NE,分析其在E-coli BL21中的表达。方法 PCR方法扩增(DENV-2)M株、NGC株E基因部分序列并构建原核重组载体pET28a(+)-ME、pET28a(+)-NE,将重组载体转化E-coli BL21,IPTG诱导表达,采用镍离子亲和层析的方法纯化目的蛋白并用SDS-PAGE电泳和Western-Blot进行鉴定。结果经双酶切、PCR和测序证实成功构建原核重组载体pET28a+-ME、pET28a(+)-NE,Western-Blot证实成功诱导出目的蛋白,SDS-PAGE电泳证实亲和层析法纯化后得到较高纯度的目的蛋白。结论检测到目的蛋白的表达,经纯化后得到纯度约为90%的目的蛋白,为研究登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E蛋白在致病机制方面奠定了一定的基础。     

尺骨干骺端续连症不同手术方法的疗效观察

目的:探讨尺骨骨软骨瘤切除、尺骨微创截骨、外固定尺骨延长术治疗尺骨干骺端续连症前臂畸形治疗效果和安全性.方法:自2005年8月至2013年12月,20例尺骨干骺端续连症患者,男15例,女5例;年龄7～13(10.00±2.34)岁;病程6～11(8.10±1.52)个月;临床表现为患侧前臂短缩并向尺侧弯曲畸形.采用尺骨...     

腕踝针联合股骨头坏死愈胶囊治疗Ⅱ、Ⅲ期股骨头坏死临床研究

目的:观察腕踝针联合股骨头坏死愈胶囊治疗Ⅱ、Ⅲ期股骨头坏死的临床疗效.方法:将我院收治的80例Ⅱ、Ⅲ期股骨头坏死患者随机分为治疗组和对照组各40例.对照组给予股骨头坏死愈胶囊(豫药制字Z 20120237)治疗,治疗组在对照组的基础上联合腕踝针治疗.分别于治疗前及治疗2周、4周、6周时,比较两组患者髋关节疼痛视觉模拟量...