补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞BMP-4、Smad-4 mRNA及蛋白表达的影响

目的研究补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白(BMP)通路BMP-4、Smad-4mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞,并将其分为空白组、西药组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,向成骨细胞诱导,干预28天后提取mRNA及蛋白,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测BMP-4、Smad-4 mRNA及其蛋白的表达。结果(1)RT-PCR结果发现,与模型组比较,中药低剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药中、高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。与西药组比较,中药低、中、高各剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA水平均降低(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。(2)Western blot结果发现,与空白组比较,模型组BMP-4蛋白表达降低(P0.05);与模型组比较,西药组、中药低、中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达均降低(P0.05);与西药组比较,中药中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达水平降低(P0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过BMP通路抑制BMP-4及Smad-4的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。其中中药低剂量组可以降低BMP-4表达水平,而中、高剂量组可以降低BMP-4、Smad-4表达水平。     

血小板衍生膜微粒对内皮细胞增殖及血管生成的影响

目的探讨血小板衍生膜微粒（PMP）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生成的影响。方法在血小板悬液中加1.0U/ml的凝血酶,37℃下作用10min后,800g离心20min,取上清,17000g离心分离出PMP,采用BCA法测定PMP含量（以蛋白含量计）,将HUVEC与不同浓度的PMP和血管内皮细胞生长因子（VEGF）共同孵育培养24h后,采用MTT法测定细胞增殖;将20μl的PMP（40μg/ml）和VEGF（10μl/ml）分别接种于CAM上,孵育72h后,观察PMP对CAM血管生成的影响。结果HUVEC的增殖与PMPs呈剂量依赖关系,在培养液中添加40μg/mlPMP时,HUVEC增殖是空白对照组的（1.83±0.33）倍;而VEGF（10μl/ml）组HUVEC的增殖是空白对照组的（1.91±0.47）倍,两者相比差异无显著性（P〉0.05）。PMP组及VEGF组在接种点周围可见不同程度放射状密集生长的血管网,而对照组无特异性密集血管生成。PMP组及VEGF组的CAM血管分支点数分别为112.5±11.3、128.4±10.0,均显著高于空白对照组82.6±8.1。结论PMP可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和CAM血管的生成。     

复方芩兰口服液治疗儿童急性上呼吸道感染（风热感冒证）多中心随机对照临床研究

目的复方芩兰口服液治疗儿童急性上呼吸道感染（风热感冒证）的有效性及安全性评价。方法采用多中心、随机对照、剂量探索、临床研究的方法,将108例急性上呼吸道感染（风热感冒证）患儿随机分为3组,高剂量组患儿口服复方芩兰口服液,2支/次,3次/d。低剂量组患儿口服复方芩兰口服液,1支/次,3次/d;复方芩兰口服液模拟剂,1支/次,3次/d。对照组患儿口服复方芩兰口服液模拟剂,2支/次,3次/d。疗程均为3 d。观察3 d痊愈率及中医证候疗效。结果对照组、低剂量组、高剂量组的全分析数据集（FAS）3 d痊愈率分别为47.22%、80.56%和91.67%,低剂量组和高剂量组3 d痊愈率显著优于对照组（P<0.05）。在中医证候疗效方面,以痊愈、未痊愈分布分析结果显示：对照组和高剂量组的主症鼻塞、对照组和低剂量组的主症流浊涕和兼症口渴组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。以有效、显效、痊愈和无效分布情况分析中医证候疗效,3组间总有效率无统计学差异。研究中未发生严重不良事件。结论复方芩兰口服液治疗儿童急性上呼吸道感染（风热感冒证）疗效确切,安全性好,高剂量使用能明显改善鼻塞症状,低剂量使用在改善流浊涕、口渴症状方面显示出良好作用。     

以尿苷二磷酸半乳糖为添加剂冷藏兔血小板的研究

本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。     

强直性脊柱炎异位骨化机制研究进展

强直性脊柱炎(AS)是一种累及骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织及外周关节,并伴发关节外表现的一种慢性炎性疾病,严重者可导致骨性强直和畸形。其病理特点归结为软组织的钙化导致新骨形成—异位骨化,这种结构性损伤很难逆转,究其发病机制尚不明确,是多通路、多靶点、多因子共同参与的网络化过程。本研究从信号通路及细胞因子方面汇总近几年AS异位骨化机制的研究进展,有助于拓展临床试验及动物实验。对AS异位骨化机制的了解还有助于深层次研究疾病的诊疗、预防、发展及转归,为传统医学与现代医学相结合的实验研究奠定基础。     

血小板4℃冷藏保存方法的实验研究

目的探讨以尿嘧啶二磷酸半乳糖为添加剂的血小板冷藏保存方法。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PCs),在悬液中添加5g/L的尿嘧啶二磷酸半乳糖(UDP-Gal),于37℃孵育2h后,放4℃冰箱储存10d。而后观察血小板(PLT)数量、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板聚集功能(PagF)、血小板促凝活性(APCT)和血小板膜AnnexinV结合率的变化;将添加UDP-Gal冷藏保存的兔血小板输入兔血小板减少症模型体内,检测输注后1h和24h兔耳出血时间和血小板回收率(PPR)。结果添加UDP-Gal冷藏保存10d的PCs中PLT数量、MPV、PDW、APCT与新鲜PCs相比,差异均无显著性(P>0.05);其血小板凋亡率与新鲜PCs相比有所增高,但显著低于冷藏对照组(P<0.01),血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上;而冷藏对照PCs的PLT数量显著减少,MPV、PDW显著增大,且血小板促凝血活性减低,血小板PagF丧失。UDP-Gal冷藏保存的兔血小板可明显缩短兔耳出血时间(P<0.01),而冷藏对照PCs输注前后兔耳出血时间的变化无显著性(P>0.05);新鲜血小板组、UDP-Gal+冷藏血小板组、冷藏血小板对照组输入兔血小板减少症模型体内1h和24h的PPR分别是66.1%±0.5%、47.8%±0.6%,60.9%±0.3%、41.6%±0.4%、47.7%±0.5%、9.4%±0.5%,UDP-Gal+冷藏兔血小板组与新鲜兔血小板相比,其PPR的差异无显著性(P>0.05),UDP-Gal+冷藏兔血小板组和新鲜兔血小板组的PPR均显著高于冷藏血小板组(P<0.01)。结论添加尿嘧啶二磷酸半乳糖的兔血小板冷藏保存后的体内外功能良好。     

龙虎人丹治疗晕动病(湿浊中阻证)的多中心临床研究

目的评价龙虎人丹治疗晕动病(湿浊中阻证)的有效性和安全性。方法纳入符合标准的360例晕动病(湿浊中阻证)患者,采用区组随机化方法分为A组(216例):龙虎人丹+仁丹模拟剂+盐酸倍他司汀片模拟剂;B组(72例):龙虎人丹模拟剂+仁丹+盐酸倍他司汀片模拟剂;C组(72例):龙虎人丹模拟剂+仁丹模拟剂+盐酸倍他司汀片。观察各组治疗后晕动病发生率、呕吐症状出现时间,以及治疗前后中医证候总分和湿浊中阻证候病情程度构成比的变化。结果①晕动病发生率:A组为51.90%(109/210),B组为71.83%(51/71),C组为47.76%(32/67),差异有统计学意义。②呕吐症状出现时间:因用药后仅A组出现1例,无法比较3组间的差异。③治疗后中医证候总分以及湿浊中阻证候病情程度构成比,3组比较差异有统计学意义。A组与B组比较差异有统计学意义。A组较B组中医证候总分下降更明显,与C组相当,且A组较B组更能改善湿浊中阻证候病情程度均成比。结论龙虎人丹在治疗晕动病方面具有一定疗效,能改善湿浊中阻临床症状和体征。     

血小板衍生膜微粒对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

本研究探讨血小板衍生膜微粒(platelet-derived membrane microparticles,PMP)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影响。用凝血酶激活血小板释放出PMP,再经高速离心分离出PMP,用流式细胞仪检定PMP,并用BCA法测定PMP的含量。将PMP接种于鸡胚绒毛尿囊膜上,观察PMP对CAM血管生成的影响。结果显示:当PMP的浓度为80μg/ml时,孵育72小时后混合纤维素滤膜周围可见到放射状密集生长的血管网,血管分支数为112.5±11.31,血管面积为(6.19±1.29)(,而在对照组无特异性密集血管生成,血管分支数为82.6±8.05,血管面积为1.78±0.33,二组比较有显著性差异(P<0.05);而与VEGF组比较,后者的血管分支数为128.4±10.02,血管面积为7.44±1.36,二组比较差异无显著性。结论:PMP对CAM新生血管的生成有促进作用。     

通督活血汤对椎动脉型颈椎病模型兔IL-1β、TNF-α的影响

目的观察通督活血汤对椎动脉型颈椎病(cervical spondylosis of vertebal artery type,CSA)模型兔的白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探讨其治疗CSA的作用机制。方法采用氢化可的松肌肉注射和硬化剂局部注射联合法建立复合型肾督虚瘀CSA模型兔,并设立正常对照组、模型组、塞来昔布组、颈复康组、通督活血汤高剂量组、通督活血汤中剂量、通督活血汤低剂量组,共7组,连续给药4周。酶联免疫吸附法(ELISA)测定模型兔血清IL-1β和TNF-α的含量;免疫组化法检测模型兔椎间盘组织IL-1β、TNF-α的表达水平。结果模型组血清IL-1β和TNF-α的含量显著高于正常组(P0.05),通督活血汤高、中、低剂量组血清IL-1β和TNF-α含量均低于模型对照组,其中高、中剂量组与模型组比较有显著差异(P0.05)。免疫组化结果显示,模型组椎间盘组织中IL-1β、TNF-α阳性表达较正常组明显升高(P0.05),通督活血汤各剂量组阳性表达均低于模型组,其中高、中剂量组与模型组比较有显著差异(P0.05)。结论通督活血汤可明显减少CSA模型兔血清中IL-1β和TNF-α的含量,降低椎间盘组织中的表达,可能是其治疗CSA的作用机制。     

补肾舒脊颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞Wnt5a、β-catenin mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨补肾舒脊颗粒延缓异位骨化的可能作用机制。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为空白组、模型组、对照组及中药高、中、低剂量组。空白组加入基础培养基(3.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);模型组加入诱导培养基(4.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);西药组加入诱导培养基(3.8 ml)+5%洛索洛芬钠含药血清(0.2 ml);中药高、中、低剂量组分别加入诱导培养基(3.8 ml)+5%补肾舒脊颗粒含药血清(0.2 ml)。28天后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,对照组和中药各剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低,中药中剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);与中药低、中剂量组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组Wnt5a蛋白表达降低,中药高剂量组β-catenin蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。