雷公藤多苷治疗强直性脊柱炎的疗效及安全性分析研究

目的：研究雷公藤多苷治疗强直性脊柱炎的有效性及安全性。方法：选取我院2009年1月-2013年12月收治的强直性脊柱炎患者50例,采取随机数字表法分为两组,每组25例。对照组给予柳氮磺胺吡啶片治疗,试验组给予雷公藤多苷片治疗,观察与比较两组患者经不同药物治疗的临床疗效及安全性。结果：试验组优良率明显高于对照组（P〈0.05）,差异具有统计学意义。两组患者分别出现肝功能异常、腹泻及月经推迟的患者数无明显差异（P〉0.05）,差异不具有统计学意义。结论：雷公藤多苷片治疗强直性脊柱炎的临床效果显著,且不良反应的发生率无明显增加,提升了用药的安全性,值得广泛推广。     

人BAFF转基因斑马鱼的构建及早期免疫基因表达检测

目的:建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用。方法：RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-hBAFF,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达。重组载体经显微注射斑马鱼受精卵后,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼。qPCR法检测早期免疫相关基因表达情况。结果：人BAFF-GFP融合蛋白可成功表达,利用Tol2-hBAFF重组质粒显微注射斑马鱼受精卵可获得表达人BAFF的转基因斑马鱼,且表达人BAFF斑马鱼1dpf胚胎中TCRAC明显高表达,而Ikaros则表达量显著降低,表明在斑马鱼胚胎中表达人BAFF蛋白会造成早期淋巴系统中基因的过早表达。结果:研究所建立的表达人BAFF的转基因斑马鱼可为系统性红斑狼疮等与BAFF功能亢进密切相关的自身免疫性疾病的治疗及相关机制研究提供一种具有诸多优点的新型工具。     

过表达BAFF转基因斑马鱼的构建

目的体外克隆斑马鱼baff基因并分别构建pEGFP-C1-baff、pEGFP-N1-baff、pIRES2-EGFP-baff重组质粒,通过胚胎显微注射获得过表达baff的转基因斑马鱼,以探讨其作为人类SLE模型和用于SLE药物筛选的意义。方法通过RT-PCR法由斑马鱼脾脏克隆出斑马鱼baff基因全长807 bp蛋白编码区域,分别构建baff过表达载体pEGFP-C1-baff,pEGFP-N1-baff及pIRES2-EGFP-baff重组质粒,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达后,通过胚胎显微注射过表达载体,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼。结果通过体外细胞转染实验与免疫印迹法验证了pEGFP-C1-baff,pEGFP-N1-baff转染后细胞Baff-GFP融合蛋白的成功表达,通过胚胎显微注射与GFP荧光筛选,成功获得过表达baff的转基因斑马鱼。结论本研究所构建pEGFP-C1-baff、pEGFP-N1-baff、pIRES2-EGFP-baff重组质粒均可通过显微注射获得过表达baff的阳性转基因斑马鱼,为进一步探讨其作为人类SLE疾病模型的意义及Baff拮抗药物的筛选奠定基础。     

γ-GCS及TGF-β1在MRL/1pr雌性小鼠肾组织表达研究

目的:对狼疮小鼠肾组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达水平进行研究,发现γ-GCS的表达量改变在转化生长因子β1(TGF-β1)促纤维化中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为对照,荧光定量PCR法检测MRL/1pr雌性小鼠肾组织γ-GCS和TGF-β1的mRNA表达.结果:狼疮小鼠组肾组织中γ-GCS的mRNA及蛋白表达减少,TGF-β1的mRNA表达水平升高,与C57BL/6小鼠组比较有显著差异(P＜0.05).结论:γ-GCS表达降低导致谷胱甘肽(GSH)合成减少,抗氧化能力减弱,促使肾间质纤维化.     

血液透析所致假性动脉瘤的显微手术临床探讨

部分尿毒症血液透析患者因动静脉瘘未建立或不愿意行深静脉留置导管建立临时血液透析通路、医护人员会选择表浅的动脉,如腕部桡动脉或足背动脉,反复穿刺使用有意建立临时血液透析通路,但是,某些患者的假性动脉瘤形成则可能是医源性操作引起的不良反应，尤其是血液透析时上肢桡动脉或肱动脉反复穿刺极易引发血肿或损伤性假性动脉瘤，我科自2005年2月-2010年8月对19例透析所致假性动脉瘤患者给予显微外科手术治疗，效果满意，体会如下。     

四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立

目的 探索tet-on四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线,构建四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼,为条件型功能基因研究及组织特异转基因斑马鱼疾病模型的建立奠定基础。方法 构建肝脏特异启动子fabp10启动rtTA蛋白表达的重组质粒pfabp10-rtTA,联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒转染HeLa细胞后给予doxycycline诱导,Western blot法验证;pfabp10-rtTA联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒注射斑马鱼1-细胞期受精卵后,30礸/ml doxycycline诱导,荧光筛选稳定整合个体。结果 共转染pfabp10-rtTA与 pTRE-Tight-BI-AcGFP1的HeLa细胞经1礸/ml浓度doxycycline诱导培养液诱导, GFP表达量显著高于不加doxycycline培养液对照组;筛选获得的稳定整合斑马鱼幼鱼,在浓度为30礸/ml doxycycline条件下,肝脏明显有绿色荧光表达,对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光。结论Tet-On四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑马鱼肝脏特异表达外源基因;利用该技术可建立诱导肝脏表达GFP建立转基因斑马鱼品系,为建立条件型转基因斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供良好的模式动物工具     

脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型

目的：建立机械性损伤引起星形胶质细胞反应性增生的体外培养模型,方法：体外分离培养新生Wistar大鼠脊髓的星形胶质细胞,培养至16d进行划伤实验,分为划伤组和对照组（未划伤）;每组有7个时间点,分别为划伤后0,2h,6h,12h,24h,48h,72h。用免疫组织化学的方法进行染色,观察划伤组和对照组星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达;并且进行半定量图像分析。结果：从划伤后2h-72h,同对照组相比,划伤组星型胶质细胞明显增生,细胞内GFAP的表达明显增高。结论：星形胶质细胞反应性增生的体外培养划伤模型能模拟髓组织受到机械损伤后,胶质细胞反应性增生及细胞内GFAP表达升高的过程。     

趋化因子和小胶质细胞在阿尔茨海默病神经炎症中的作用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以痴呆为主要症状的慢性进行性神经退行性疾病,主要神经病理学特征包括老年斑、神经原纤维缠结、神经炎症和神经元丢失.AD中的β-淀粉样蛋白沉积和错误折叠的Tau蛋白诱导小胶质细胞的激活,引起细胞因子、趋化因子的分泌,共同形成神经炎症反应影响AD的发展.本文总结了...     

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×10^8个／ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0．04ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7d可见较小肿瘤块生长;14d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21d肺转移率达100％。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卯圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。     

GSH对MRL/lpr小鼠肾小管上皮细胞CTGF表达的影响研究

目的研究还原型谷胱甘肽(GSH)对MRL/lpr小鼠(狼疮小鼠)肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达,明确抗氧化药GSH对肾小管上皮细胞表达CTGF的影响。方法传代培养正常小鼠及狼疮小鼠肾小管上皮细胞至第3代,使用GSH干预生长MRL/lpr小鼠肾小管上皮细胞,培养5 d后检测CTGF蛋白及mRNA的表达。结果狼疮小鼠肾小管上皮细胞内CTGF表达明显高于正常对照组(P<0.01)。经GSH干预后MRL/lpr小鼠模型肾小管上皮细胞CTGFmRNA表达较未处理组显著降低(P<0.01)。结论狼疮小鼠肾小管上皮细胞内CTGF表达明显升高,抗氧化剂GSH干预可抑制狼疮小鼠肾小管上皮细胞CTGF表达。