稳定干扰长链非编码RNA LINC01224结直肠癌细胞株的建立及其对细胞凋亡的影响

目的 建立稳定干扰长链非编码RNA(lncRNA) LINC01224表达的结直肠癌LoVo和SW620细胞株,并探讨下调LINC01224表达对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 使用GEPIA2数据库分析LINC01224在结直肠癌组织中的表达情况;qPCR法检测LINC01224在10种人结直肠癌细胞中的表达水平。3种不同的LINC01224 siRNA分别转染人结直肠癌LoVo细胞,取抑制LINC01224表达效果最显著的siRNA序列构建LINC01224 shRNA慢病毒载体。在HEK293T细胞内包装成重组慢病毒颗粒,再感染LoVo和SW620细胞,经嘌呤霉素筛选后以有限稀释法获得稳定干扰LINC01224的单克隆细胞。MTS法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 LINC01224在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠组织,其在10种结直肠癌细胞中的表达也高于正常结直肠上皮细胞HCOEPic。siRNA-3对LoVo细胞内LINC01224表达的抑制率高于siRNA-1和siRNA-2。故选择siRNA-3设计LINC01224 shRNA。与对照组(sh-NC组)...     

用ICP-MS法测定5种抗病毒中药中的有害金属元素

用微波消解-ICP-MS法对黄莲、穿心莲、金银花、甘草、鱼腥草5种中药材原药的有害金属元素进行含量测定分析。结果表明,5种药材中的汞均未测出,铅、砷均未超标。黄连、穿心莲、鱼腥草中镉超出国家标准,虽然在边缘位置,但应该予以重视。     

饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响

目的 研究饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响.方法 用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(饱和脂肪酸)和DHA(不饱和脂肪酸)分别处理肺癌细胞A549,绘制细胞生长曲线并计算克隆形成率以检测细胞增殖.采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞24h后,采用激光共聚焦显微镜从形态学方面观察细胞自噬情况.采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,用Western blotting检测细胞自噬相关蛋白的表达.结果 30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549细胞增殖的作用(P<0.05),硬脂酸、DHA处理A549细胞24h后均检测到细胞出现明显的自噬;Western blotting结果 显示,硬脂酸、DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P<0.05).结论 饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸均有抑制肺癌细胞增殖、诱导肺癌细胞自噬的作用,其机制可能与p-mTOR(ser2481)信号通路有关.     

槲皮素精氨酸复合物的制备研究

目的：制备水溶性槲皮素精氨酸复合物（QAC），拓宽槲皮素的给药途径。方法：取一定量槲皮素（QUE）和L－精氨酸在乙醇中回流制备QAC，通过胶束纸色谱，紫外吸收光谱、红外吸收光谱和X射线衍射图谱对QAC进行结构鉴定。结果：摩尔比为1：1的QUE和L－精氨酸形成了QAC，并且QAC常温下稳定存在。与QUE比较，QAC的水溶性明显增大，仍然对抑制细胞生长具有较强的活性。结论：该制备方法简捷实用，有助于提高QUE的生物利用度。     

芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力,探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对HaCaT细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20～80μg／mL范围内可抑制HaCaT细胞增殖且呈剂量依赖性;镜下观察到细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长,细胞被阻滞于S期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制HaCaT细胞的增殖、诱导HaCaT细胞的凋亡。可用于治疗银屑病。     

急性单核细胞白血病全基因组微小RNA的表达谱分析

目的研究急性单核细胞白血病（AMoL）全基因组的微小RNA（miRNA）表达谱。方法应用Illumina高通量测序技术对10 例AMoL 患者和10 例非恶性血液病患者骨髓样本的miRNA 表达水平进行检测,分析两者的表达差异,并通过茎环引物实时荧光定量PCR（Stem-loop qPCR）技术对部分Illumina 测序结果进行验证。结果两组样本共发现差异表达的miRNA 285个,其中,199 个miRNA 在AMoL组呈表达上调,86 个miRNA呈表达下调。6 个miRNA 的Stem-loop qPCR 验证结果与其测序结果具有相同的变化趋势。结论miR-126-3p 和miR-29b-3p 可作为潜在的分子靶点用于AMoL发病机制的进一步研究。     

HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的：建立用高效液相色谱（HPLC）法测定载脂蛋白A‐1（apoA‐1）介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP‐1用160 nmol／L佛波酯（PMA）诱导24 h分化为贴壁巨噬细胞（PMA组）,再用50μg／mL乙酰化低密度脂蛋白（ac‐LDL）处理48 h ,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞（ac‐LDL组）;加入含apoA‐1的1640培养基培养24 h（apoA‐1组）。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用 HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA‐1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 T HP‐1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac‐LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于 PMA组（P＜0．01）。ac‐LDL处理细胞48 h后,ac‐LDL 组内总胆固醇水平为80．25μg／mg 细胞蛋白,胆固醇酯水平为47．65μg／mg 细胞蛋白,占总胆固醇的59．38％,与PMA组相比,差异有统计学意义（P＜0．01）。 HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA‐1介导泡沫细胞内apoA‐1组胆固醇流出率分别为5．63％和7．08％（P＜0．01）。结论本研究成功建立了酶促反应结合 HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。     

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化及其体外增效作用

目的　寻找半边旗中二萜类有效成分之一 5F纯化的新方法 ,研究 5F对常用抗肿瘤药物的体外增效作用。方法　应用结合了AgNO3的普通层析用硅胶来纯化 5F ,应用台盼蓝拒染法测定药物对细胞的抑制率。结果　纯化后所得到的产品中 5F的含量达到 99%以上 ,是迄今为止纯度最高的产品。较低浓度的 5F分别与氟尿嘧啶 (5 Fu)、顺铂 (CD DP)及长春新碱 (VCR)合用可以增强它们对HL 60、K562细胞株的杀伤作用。结论　结合了AgNO3的普通硅胶可有效地分离纯化 5F。 5F可增强上述几种药物对HL 60、K562细胞的杀伤作用 ,可能与几种药物对细胞周期影响不同有关