AMPK-mTOK信号通路参与百草枯致PC12细胞的自噬抑制作用

目的探讨AMPK-mTOR信号转导通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12)自噬异常中的调控作用。方法用终浓度0、25、50、100、200、300、400 μmol/L PQ处理PC12细胞24 h,300 μmol/L PQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞相对存活率,确定剂量/时间-效应关系;终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察自噬溶酶体的表达及分布变化;免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62、Beclin1及AMPK-mTOR信号通路蛋白p-AMPK、p-mTOR表达水平。结果与对照组比较,100、200、300、400 μmol/L PQ染毒组的细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05)。300 μmol/L PQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),细胞存活率随染毒时间的延长而下降,其中12、24、48 h染毒组的差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞上清液中LDH活力明显升高,细胞内ROS荧光强度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);MDC染色结果显示,PQ染毒组的自噬溶酶体在核周分布密度降低、荧光强度减弱、自噬水平降低;免疫荧光结果显示,PQ染毒组的LC3荧光强度减弱,细胞自噬水平下降,与MDC染色结果一致。Western blot结果显示,与对照组比较,PQ染毒组的自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表达水平均明显降低,而p62蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。200、300 μmol/L PQ染毒组的p-AMPK蛋白表达水平降低,p-mTOR蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PQ致PC12细胞损伤过程中,细胞自噬水平降低,AMPK-mTOR信号通路发挥调节作用。     

大鼠和小鼠阴道组织神经血管层的全层铺片技术探索

目的 通过不同实验条件建立一种稳定、可重复的用于显示阴道神经与血管的全层铺片技术。方法 雌性SD大鼠和ICR小鼠各20只,麻醉后分离出阴道组织,分别用中性缓冲福尔马林和丙酮固定,每种固定液分别固定24 h和48 h后,在显微镜下逐层剥离出阴道肌层制作铺片,观察不同固定方式制作铺片的脱片率,并行HE染色、Masson染色、嗜银染色和免疫组化观察组织的形态、肌纤维、血管和神经组织。结果 同种固定液固定24 h和48 h在制作铺片的难易程度上无明显差别。不同的固定液和不同的固定时间在是否容易脱片方面无显著差异(Fisher确切概率法,P_小鼠=0.893和P_大鼠=0.429)。中性缓冲福尔马林固定后组织较韧,更易剥离各层组织,而丙酮固定的组织易碎,组织不完整。不同的固定方法对HE染色、Masson染色和嗜银染色结果影响不大,但对免疫组化染色会产生较大影响,即中性缓冲福尔马林固定使抗体更容易结合。结论 两种固定液都能很好地对阴道组织起固定作用,中性缓冲福尔马林固定液用于制作阴道肌层全层铺片优于丙酮,该铺片技术能很好地显示阴道组织中的肌肉、神经与血管组织...     

益脾补肾方改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能障碍作用及机制

目的 观察益脾补肾方改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能障碍的作用，并探讨其作用机制。方法将30只4周龄健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、益脾补肾方低剂量组（低剂量组）、益脾补肾方高剂量组（高剂量组）、二甲双胍组，每组6只。对照组给予普通饲料，其余各组给予高脂饲料喂养16周，建立肥胖2型糖尿病小鼠模型。低、高剂量组给予益脾补肾方2、4 g/（kg·d），二甲双胍组给予二甲双胍200 mg/（kg·d）灌胃，模型组和对照组灌胃等量的生理盐水，连续灌胃30天。干预前后进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）和胰岛素耐量试验（ITT），计算曲线下面积（AUC）；观察睾丸形态，测量小鼠重量并计算睾丸脏体比；HE染色观察睾丸形态变化；检测精子参数以及空腹血糖（FBG）;ELISA法检测血清中睾酮（T）水平；比色法检测血清中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的变化；Western Blot检测脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果 对照组小鼠睾丸组织结构清晰，生精小管内各级生精细胞排列整...     

糖尿病大鼠膀胱时间依赖性功能和形态学变化

目的：为了研究糖尿病(DM)患者膀胱功能失代偿期的变化，我们在链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠模型中评估了DM大鼠失代偿期的病理生理特征。方法：雄性Wistar大鼠腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立DM模型。通过尿流动力学实验检测DM大鼠膀胱功能；通过HE染色观察膀胱上皮结构变化；采用Masson染色和Western blot研究膀胱逼尿肌病理改变和肌肉含量变化；利用天狼星红染色，改良Gordon-Sweet染色和弹性纤维染色检测膀胱细胞外基质(ECM)纤维成分的变化。结果：膀胱尿流动力学结果显示，DM大鼠(STZ注射后3个月)排尿频率下降，膀胱容量增加，膀胱顺应性下降，随着DM时间进一步增加(STZ注射后5个月)，膀胱功能进一步下降。HE染色结果提示，5个月DM大鼠膀胱上皮褶皱减少，黏膜固有层变薄，膀胱上皮结构缺陷更加明显。膀胱Masson染色和Western blot结果显示，3个月DM大鼠逼尿肌体积明显缩小，肌束排列紊乱，膀胱组织α-平滑肌肌动蛋白含量显著降低。膀胱ECM纤维的病理学染色显示，DM大鼠膀胱中胶原纤维、网状纤维和弹性纤维的结构断裂，含量均减少，且在5个月DM的变化...