不同证候H22荷瘤小鼠胸腺一致上下调高表达的基因

目的:观察常见证候荷瘤小鼠胸腺中一致上调和下调的高表达基因。方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon1.0ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠在早期邪毒壅盛证、气虚证,中期阳虚证,中晚期阴虚证等4个证候胸腺中一致上调或下调者,重点关注表达量高的基因。结果:肿瘤发生后,胸腺中有34个基因表达发生显著改变。其中一致上调者20个,一致下调9个。结论:(1)Tpp2、per2基因在肿瘤发生的早期表达几乎关闭,与肿瘤发生的早期关系密切。(2)20个高表达基因,如Hey2、MMP-19等,可能在中晚期胸腺退化阶段起到特殊的作用。(3)推测这些一致上调和下调的基因与肿瘤发生及其不同阶段的关系更为密切,而非证候。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠胸腺独特上调的高表达基因

目的 观察邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺基因表达的特征.方法 综合采用荷瘤小鼠及其标准化辨证方法,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array检测不同证候H22荷瘤小鼠胸腺组织基因的表达,并分别筛选2006年及2009年两批数据中邪毒壅盛证独特高表达的基因,进行理论研究.结果 2006年、2009年早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺组织一致独特上调的基因108个,取各自最高表达的15个基因,有8个重叠:Trim30、Sept6、Mcm3、Supt16h、Vps35、Smc3、Rsl1d1、Pa2g4,另分别有Smc1a、Eif3s10、Phf6、Sesn1、Iws1、Lin7c、Itch,以及Tax1bp1、Ifi204、Pnn、Ptbp2、Ascc3、Ddx10、Luc7l2等非重叠基因,这些基因主要涉及细胞的增殖、基因的表达与调控.结论 邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺高表达的基因多涉及促进基因的表达与复制,这与该证候肿瘤增长迅速相关,提示胸腺尚处于被动且积极的免疫代偿状态;鉴于与邪毒壅盛证同期的气虚证,以及与其它对照比较,这些基因独特上调,提示荷瘤小鼠同病异证在胸腺层面是有其物质基础的.     

阳气虚证H22荷瘤小鼠胸腺独特上、下调的高表达基因

目的:观察荷瘤小鼠中期阶段阳气虚证胸腺独特上调和下调的高表达基因。方法:综合采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测在肿瘤中期阳气虚证H22荷瘤小鼠胸腺组织基因的表达,筛选独特上调或下调者,并重点关注表达量高的基因。结果:肿瘤中期阳虚证荷瘤小鼠胸腺独特上调的基因达260个,下调仅15个。结论:(1)荷瘤小鼠发展到中期的阳气虚证,其胸腺虽然已出现萎缩的现象,但仍处于代偿阶段;(2)Hey2、Hivep2、Stat6、Prdm1、Avpr1a、Ralb、Trdn、Mcmdc1、Olfr1351、Avil、Gns、Ros1等高表达上调的基因,可能与促进T细胞的分化成熟有关;(3)St8sia4、Nxph4、Spred2、Bcas3、Tbcd、Ctns等独特下调基因标志着胸腺内基因表达调节在整体上出现了紊乱,可能预示着胸腺衰竭阶段的到来。这些构成了肿瘤中期阶段阳气虚证荷瘤小鼠胸腺基因表达层面的特征。     

同病异证H22肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础

目的:揭示同病异证肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础。方法:采用标准化诊法技术在接种同样H22腹水癌细胞数的肿瘤小鼠中筛选出不同组别的同病异证肿瘤小鼠,ELISA法检测血清内分泌-免疫网络有关激素与分子含量。结果:筛选出邪危组、邪毒组、邪中组、邪微组及邪中兼气虚组等5个同病异证组别小鼠,发现其ACTH、醛固酮、TSH、T3、T4、FT3、FT4、睾酮、IL-2、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ等含量与同病异证有着对应性改变。结论:荷瘤小鼠存在同病异证且有其内在复杂及特征性的内分泌和免疫系统改变,这为荷瘤小鼠个体化辨证论治及其疗效评价提供了客观依据,也为比较和优化辨证论治方案提供了模式生物的依据。     

不同品系H22肝癌小鼠证候特征的比较研究

目的:观察并比较常用不同品系H22肝癌小鼠中医证候的特征与差异。方法:将KM、BALB/c、ICR、C57共4种品系小鼠各30只,分别随机分成正常对照组10只,肝癌组20只。肝癌组小鼠右腋下接种H22细胞造成荷瘤小鼠模型,观察出瘤后各品系肝癌小鼠生存率差异,采用小鼠四诊工作站及其方法,检测小鼠证候的发生与演变。结果:4种品系小鼠腋下接种后均形成实体瘤。在生存率方面,早期各品系肝癌小鼠无明显差异;中晚期差异大,BALB/c肝癌小鼠最低,ICR与KM肝癌小鼠其次,C57肝癌小鼠最高。瘤体积比较,KM肝癌小鼠增长最快,ICR肝癌小鼠增长最慢。去瘤体质量方面,中晚期各荷瘤小鼠呈现下降趋势,ICR小鼠下降最明显,其次是BALB/c与KM小鼠,C57小鼠去瘤体质量变化小。另外,不同品系肝癌小鼠邪毒证与气虚证贯穿疾病始终,且程度逐渐加重,阴虚证与阳虚证在中晚期发生且逐渐加重,其中BALB/c与ICR肝癌小鼠气虚、阴虚、阳虚最严重。结论:KM、BALB/c、ICR、C57等不同品系H22肝癌小鼠均会自发形成证候,KM小鼠最适合于肝癌证候与辨证论治的研究。     

小檗碱等7昧中药有效成分药性的检测

目的 探索和建立中药有效成分药性的实验检测方法.方法 采用优甲乐热证造模小鼠,饲以小檗碱等7味中药有效成分和对应的黄柏等6味中药饮片,检测和观察给药后动物腋温的改变、体表红外热像中最大眼温和尾根部温度改变以及综合温度的改变.结果 大多被测的中药饮片其药性检测结果与中药文献描述一致;小檗碱与黄柏、大黄素和大黄酚与大黄、栀子苷与栀子、知母皂苷与知母、淫羊藿苷与淫羊藿等中药有效成分与其中药饮片的药性一致,一定程度上代表了这些中药饮片的药性;在同一饮片的不同有效成分中,大黄素更接近大黄的药性,而大黄酚差距较大;附子未见热性表现,提示其热性可能与刺激消化道黏膜等作用有关;而乌头碱出现寒象,推测与其剂量偏大所造成的毒性有关.结论 所建立的中药药性实验检测方法可以较为准确、客观地检测中药有效成分的药性,对于鉴别和描述中药有效成分的药性是有益的.