生物技术文摘

B36-09 维持大肠杆菌中等密度发酵的快速生长 Zawada J等[Biotechnol Bioeng, 2005, 89(4): 407 -415]本研究提出了一种新的补料策略,可延长大肠杆菌发酵的快速生长期至中等高密度。高密度发酵是生产生物产品的一种常规的成功方法。然而,在这些步骤中乙酸的积累是实质性问题     

一种基于可设计核酶的非天然氨基酸的tRNA氨基酰化系统

识别 t RNA身份的能力对基因编码系统的功能是必需的。翻译时氨酰 t RNA合成酶 (ARSs)识别 t RNA的身份并装配上与它们关联的氨基酸。文中证明一种体外进化的核酶也能区分专一的 t RNA,并能将氨基酸转移到关联 t RNA3’端。该核酶能与 CCA-3’末端和 t RNAf Met的反密码子环相互作用 ,且它的 t RNA专一性受这些相互作用控制。利用这一特性能设计核酶对专一 t RNA的选择性 ,从而定制有效的氨酰基转移催化剂。该法可用来产生非天然氨基酸装配的氨酰 t RNA,且它们能通过无细胞翻译系统合成蛋白质一种基于可设计核酶的非天然氨基…     

来自产朊假丝酵母的热稳定固定化S和F型胞外转化酶能在100℃水解蔗糖

当生长在含蔗糖的培养基上时 ,产朊假丝酵母合成和分泌两种转化酶 :一种分子大小为 2 80 ku(S型 -慢速迁移 ) ,另一种新型的分子大小为 6 2 ku(F型 -快速迁移 )。在固定化前 ,纯化的 S和 F型转化酶能使固定化得率提高到 89%～10 0 % ,相比之下转化酶粗制品只有 5 2 %。固定化的纯化 S和 F型转化酶在 10 0℃ 15 m in后仍保有部分活性 ;F型约保留了它最大活性的 30 %。固定化的 S和 F型转化酶在 80℃连续反应超过 5 h几乎能完全水解 6 0 % (w/ v)的蔗糖溶液。来自产朊假丝酵母的热稳定固定化S和F型胞外转化酶能在100℃水解蔗糖@龚家玮…     

β-内酰胺酶抑制短肽SIPIS04-01的表达、纯化与抑制作用测定

通过酵母双杂交系统从一个随机DNA片段文库中筛选到一个编码能与β-内酰胺酶结合的短肽SIPIS04—01的DNA序列，将它克隆到pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pYG205。当用适量的IPTG诱导后，携带pYG205的E．coli DH5α能表达短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白。利用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析介质分离纯化短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白，经凝血酶切割并分离纯化后，体外试验表明短肽SIPIS04-01具有抑制β-内酰胺酶的作用。     

以源于幽门螺杆菌尿素酶的重组抗原作为幽门螺杆菌相关疾病的疫苗

幽门螺杆菌尿素酶的酶活性中心位于β亚基，从它的结构及对其它细菌和植物尿素酶的同源性，确定了β亚基的一段135个氨基酸的重要序列。将这段序列(UreB)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)一起在大肠杆菌中以重组融合蛋白的形式表达。将UreB-GST作为免疫原，得到了17个单克隆抗体(MAb)UA-1～17。所得的MAb表现出对UreB的高度特异性，其中一些能与     

高细胞密度分批补料培养生产DHA的海藻寇氏隐甲藻

分别以葡萄糖和乙酸为碳源 ,研究用分批补料培养海藻寇氏隐甲藻生产 DHA的发酵工艺。在以葡萄糖为碳源的培养基中 ,发酵期间需维持一个相当高的葡萄糖浓度 (5～2 0 g/ L)。而在以乙酸为碳源的培养基中 ,由培养液的 p H值来控制乙酸的添加量。乙酸 (5 0 % ,w/ w)组成的补料相对于葡萄糖 (5 0 % ,w/ v)组成的补料 ,可获得较高的 DHA总发酵指数 (r DHA) ,分别是 38和 14 m g· L- 1· h- 1。用纯乙酸补料可提高到 4 8m g· L- 1· h- 1 ,并获得 10 9g/ L 的干生物量、6 1g/ L,脂类、19g/ L 的 DHA。这是目前已报道的异养藻类所能达到的…     

通过糖基化工程提高治疗蛋白在体内的活性

由于活性低或消除快 ,治疗蛋白需频繁给药。而利用糖基化工程 ,可提高和延长一些蛋白的活性 ,以降低给药的频度。将新 N -连接的糖基化共有序列导入蛋白 ,产生一些糖基化类似物 ,并从中筛选出具额外 N -连接的糖基且有体外活性的物质。单个分子连接合适的共有序列 ,可生成重组人促红细胞生长素 (r Hu EPO )、肥胖蛋白 (leptin)和 Mpl配体的糖基化类似物。这些蛋白分属三种不同类型 ,r Hu EPO是 N -连接的糖蛋白 ,Mpl配体是 O-连接的糖蛋白 ,而 leptin则不含糖基 ,但均可大幅提高体内活性并延长作用时间。糖基化工程 r Hu EPO(darbop…     

快速二步法从复合培养基内大量纯化片球菌素样细菌素及其它带正电荷的抗菌多肽

建立了一种适用于小量和大规模纯化片球菌素样细菌素及其它带正电荷的多肽的快速简单的二步法。第一步 ,将细菌培养物直接上样到阳离子交换柱 (1ml阳离子交换剂 /10 0 ml细胞培养物 ) ,细菌和带负电荷的化合物经柱流出 ,而带正电荷的细菌素随后用 1mol/ L Na Cl洗脱出来。第二步 ,将含细菌素的洗脱液上样到一个低压反相交换柱 ,然后用丙醇洗脱。培养物上清液中的初始活性在两个纯化步骤里都能回收 80 %以上 ,而且通过反相层析和毛细管电泳检测 ,最终得到的细菌素制品的纯度可达 90 %以上快速二步法从复合培养基内大量纯化片球菌素样细菌素…     

钙联结蛋白的过量表达增大了黑曲霉内锰过氧化物酶的产量

与大多数真菌生成的蛋白相反 ,白腐担子菌产生的含血红素的过氧化物酶在工业丝状真菌内的产量很少。已确信过氧化物酶产生的限制因素是在翻译后水平上起作用。尤其是过氧化物酶生物合成中所需的辅基的不足被认为是一个主要的瓶颈。研究了分泌途径的两个元件——伴侣钙联结蛋白和结合蛋白 (Bi P)在真菌过氧化物酶产生中的作用。 Phan-erochaete chrysosporium菌的锰过氧化物酶 (Mn P)在黑曲霉内的表达导致 clx A和 bip A基因表达水平的上升。在一个添加了血红素而使 Mn P高水平过量表达的培养基中 ,clx A和bip A的诱导水平也较高。研究…