微小核糖核酸-204和211在人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞分化过程的变化

目的 观察人胚胎干细胞（hESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞诱导分化过程中微小核糖核酸（miRNA）-204和211的变化特征。方法 采用自然分化法诱导hESC向RPE细胞分化,细胞鉴定。按细胞诱导分化时间秩序,分为hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组和原代培养的人胎RPE（hfRPE）细胞组。行miRNA基因表达谱芯片分析、miRNA-204和211实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测。 结果 miRNA芯片分析结果显示,随细胞诱导分化过程, miRNA-204持续上调。其中,含色素细胞组是hESC组的5.026倍,hESC 源性RPE细胞组是含色素细胞组的3.337倍;hfRPE细胞组是hESC源性RPE细胞的13.574倍。miRNA-211在细胞诱导分化过程中上调不明显,但从hESC源性RPE细胞到hfRPE细胞,上调倍数为44.333倍,是miRNA表达谱中差异最大的miRNA。RT-PCR检测结果显示,hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组、hfRPE细胞组miR-204相对表达量分别为91.81±4.43、2 263.09±206.39、5 996.80±235.42、171 676.45±999.82,差异有统计学意义（t=18.22、20.66、279.38,P＜0.001）;miRNA-211相对表达量分别为2.23±0.31、129.33±3.75、125.76±4.78、16 682.00±352.97。含色素细胞组和hESC细胞组、hfRPE细胞组和hESC源性RPE细胞组miR-211相对表达量比较,差异均有统计学意义（t=58.58、81.24,P＜0.001）。结论 miRNA-204和211在hESC向RPE细胞诱导分化过程中持续单一变化。     

激光辅助孵出对冻融胚胎着床潜能的影响

目的:探讨激光辅助孵出(LAH)对前次冻融胚胎移植失败患者临床妊娠率及胚胎种植率的影响。方法:对前次IVF-ET失败并排除子宫内膜、胚胎质量等因素的116例患者,根据是否采用激光辅助孵化分为LAH组(56例)和对照组(60例),对LAH组患者的胚胎采用部分透明带薄化后进行移植。比较两组患者临床妊娠率和胚胎种植率。结果:LAH组的临床妊娠率为53.3%,与对照组的36.7%比较差异有显著性(P<0.05),胚胎种植率为29.3%,显著高于对照组的17.9%(P<0.05)。结论:LAH可提高前次FET失败患者的临床妊娠率和胚胎种植率。     

OHSS高危胚胎移植与全胚胎冷冻移植不孕患者结局分析

目的:分析比较存在卵巢过度刺激综合征(OHSS)高危因素患者进行新鲜周期体外受精-胚胎移植(IVF-ET),以及日期为预防OHSS的发生进行全胚胎冷冻,后进行解冻胚胎移植2种治疗方法的效果.方法:选择2005年1月-2008年4月在本中心进行IVF-ET治疗的患者.OHSS高危人群但行新鲜周期胚胎移植患者239例,为A组;同期行全胚胎冷冻,2～3个周期后行胚胎解冻移植的患者164例,解冻周期203例次,为B组.对2组患者超促排卵(COH)情况、获卵数、冷冻胚胎数、新鲜周期以及解冻周期临床妊娠率等情况进行比较.结果:A组促卵泡生成素(Gn)始量以及Gn总量高于B组(P＜0.01);A组注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)日雌激素(E2)水平、发育卵泡数、获卵数、冷冻胚胎数低于B组(P＜0.01);2组患者的年龄、COH时间、OHSS的发生率以及临床妊娠率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在IVF-ET时,全胚胎冷冻然后行胚胎解冻移植,与新鲜周期移植比较并未影响不孕症患者的治疗结局.     

“coasting”防止卵巢过度刺激综合征：无事生非？

控制性超促排卵（COH）最严重和潜在致命的并发症是重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）。任何经历COH的妇女都有发生OHSS的可能。血清雌二醇（E2）水平高、卵泡数量多的患者这种危险性增加．可能是因为颗粒细胞分泌导致OHSS发生的类固醇激素和血管活性物质。为避免周期的取消，维持高妊娠率并减少发生重度OHSS的危险，提倡应用“coasting”方案，即停用GnRH，而继续使用GnRH类似物（GnRHa）直至血清E2水平降至安全水平，此时给予hCG，安排取卵。     

影响ICSI受精因素的探讨

自从1992年首例经卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术获得试管婴儿诞生至今,ICSI已成为治疗男性不育的重要手段,大大提高了人类辅助生育的成功率.ICSI技术是将精子直接注入卵细胞浆内,避免了自然受精过程中精子穿过透明带,与胞浆融合等生物反应.ICSI后的受精情况受多方面因素的影响,其机制复杂,笔者仅就部分因素作如下综述。     

冻融胚胎移植周期患者年龄及移植胚胎个数与妊娠结局的关系

目的:探讨冻融胚胎移植周期患者的年龄、移植胚胎个数对妊娠结局的影响.方法:解冻胚胎移植周期中可供移植的1 052个周期按年龄分为≤34岁为A组、35～39岁为B组、≥40岁为C组,按移植胚胎个数分为单胚胎移植为D组、2个胚胎移植为E组、3个胚胎移植为F组,分析年龄、移植胚胎个数与冷冻胚胎解冻移植(FET)结局的关系.结果:A组、B组、C组间着床率差异有统计学意义(P＜0.01).A组与B组妊娠率差异无统计学意义(P＞0.05).但均高于C组(P＜0.05).A组与B组流产率比较差异有统计学意义(P＜0.05).D组妊娠率与E、F组比较差异有统计学意义(P＜0.05).E组多胎率与F组比较差异有统计学意义(P＜0.05).E组减胎率与F组比较差异有统计学意义(P＜0.05).D、E、F组间宫外孕率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:≥40岁患者妊娠率显著降低.宫外孕、流产与移植胚胎个数无关.冻融周期移植2个胚胎是合理的选择.     

健康成人尿源性干细胞的分离、培养与鉴定

目的:分离培养和鉴定健康成人尿源性干细胞(USCs).方法:收集3名健康成人新鲜尿液,采用贴壁培养法分离培养细胞.进一步观察细胞形态,对细胞进行染色体核型分析,流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD34和CD45的表达情况,采用茜素红及油红O染色分别检测钙结节和脂质的形成以验证细胞成骨和成脂分...     

利用人体外成熟卵母细胞获得孤雌活化胚胎的研究

目的:了解人体外成熟卵母细胞经电脉冲联合6-甲基氨基嘌呤(6-dimethylamiuoputine,6-DMAP)作用后的发育潜能.方法:以未见第1极体(polar body,PB)排出的不成熟人卵母细胞作为研究对象,经过体外培养成熟,采用电脉冲联合6-DMAP进行孤雌激活处理,观察其活化效率和胚胎早期的体外发育效率.结果:电脉冲联合6-DMAP孤雌激活人体外成熟卵母细胞,处理组活化率为32.20%,对照组活化率为12.07%,处理组活化率明显高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:电脉冲联合6-DMAP能有效激活人体外成熟卵母细胞,但活化胚胎的早期发育能力显著下降.     

胚胎发育对囊胚形成的影响

目的:分析体外受精胚胎移植治疗周期中胚胎发育的速度和质量与对囊胚形成的影响。方法:接受体外受精治疗的196例不孕症患者第3天胚胎移植后剩余无冻存价值的406个废弃胚胎,在患者签署知情同意书后进入本试验。将胚胎于第3天转移至囊胚培养液CCM中,每天观察胚胎发育的情况直至受精第5～7天,观察是否形成囊胚并且对形成的囊胚进行分级,分析不同细胞数、不同质量的胚胎对囊胚形成的影响以及废弃胚胎的形成对妊娠结局的预测价值。结果:406个废弃胚胎中共有102个(25.12%)形成囊胚,其中优质囊胚有28个(27.45%),全部由Ⅱ+级以上胚胎形成。196例患者中有囊胚形成的患者64例,其中有32例(50.00%)获临床妊娠,132例无囊胚形成的患者中有38例(28.79%)获得妊娠,妊娠率比较差异有统计学意义(χ2=10.43,P<0.05)。结论:第3天胚胎细胞数、质量与囊胚形成率呈显著正相关关系,剩余胚胎囊胚的形成对妊娠具有间接的预测意义。     

运用三维多普勒超声检测体外受精前垂体对卵巢的降调作用

由于在体外受精(IVF)技术开展以后，促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对垂体的抑制作用能提高受孕几率，所以被广泛运用于人工授精的治疗过程中。为评估脑垂体的降调过程中卵巢发生的变化，应用二维(3D)多普勒超声评估卵巢的体积、多普勒信号定量和组织回声亮度。将接受IVF的40例妇女纳入研究，并排除子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫内膜样瘤、单卵巢、输卵管切除木、