新基因Betatrophin原核重组蛋白表达及纯化

目的 构建人Betatrophin基因(h-Betatrophin)原核表达载体,诱导Betatrophin重组蛋白表达及纯化,为制备Betatrophin蛋白多克隆抗体及其功能研究打下基础.方法 体外克隆Betatrophin cDNA序列,酶切后连接到PET32 a(+)原核表达载体上,构建重组载体h-Betatrophin-PET 32 a,然后转入大肠杆菌BL 21(DE 3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色及Western blotting检测蛋白表达情况,然后用Ni-NTA His·Bind(R)Resin纯化目的蛋白.结果 成功构建Betatrophin基因原核表达载体,诱导表达Betatrophin重组蛋白表观分子量正确,经纯化后可以得到纯度较高的Betatrophin重组蛋白.结论 重组载体h-Betatrophin-PET 32 a转入大肠杆菌BL 21后通过诱导及纯化可获取到纯度很高的Betatrophin重组蛋白,为后期研究Betatrophin基因功能奠定基础.     

大鼠机械式胸外按压心肺复苏模型的建立

目的 探索用机械式胸外按压复制大鼠心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）模型的可行方法。方法 成年雄性SD大鼠，随机分为对照组（n=6）与模型组（n=10）。10%水合氯醛腹腔注射麻醉后行气管插管和左侧股动脉插管。在监测心电图与动脉血压条件下，模型组行气管阻塞（tracheal obstruction，TO），心脏骤停（cardiac arrest，CA）出现2 min用呼吸机辅助和自制动物胸外按压仪行CPR。结果 模型组TO后迅速出现自主呼吸停止，紫绀，心律失常，4～5 min出现心脏停搏，动脉收缩压降至40 mmHg以下，脉压消失，CA出现。2 min后给予CPR，8只大鼠自主循环恢复（return of spontaneous circulation，ROSC），并出现一过性再灌注心律失常，6只大鼠恢复意识并存活24 h。血液生化分析提示模型组大鼠存在电解质紊乱、酸中毒、肾功能损害、心肌酶谱升高。病理学切片观察发现模型组大鼠心肌横纹溶解，肾小球无复流，神经元减少，肺淤血等器官损害。结论 机械式胸外按压可以提供CA大鼠CPR所需的基本心输出量，可以成功建立大鼠CPR模型。     

蛋白酶体抑制剂诱导大鼠帕金森病模型的建立

目的探讨用蛋白酶体抑制剂乳胞素(lactacystin)建立帕金森病(PD)大鼠模型的方法,并对模型进行综合评价。方法 应用立体定向单针道双靶点方法在大鼠黑质致密部注射乳胞素,观察大鼠行为变化、黑质细胞形态及黑质致密部酪氨酸羟化酶的变化。结果 注射乳胞素1周后,大鼠出现活动迟缓、震颤、少动、头向健侧倾斜、竖毛等行为改变,阿扑吗啡诱导后出现向左旋转;给药后4周,每组大鼠运动活跃性均低于生理盐水组。病理学检查发现进针部位均有小胶质细胞增生、多巴胺能神经元胞体肿胀或萎缩;8μg组变化较明显,部分黑质细胞内出现嗜伊红包涵体;2、4、8μg组的酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞数与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.01),随着注射剂量的提高TH免疫阳性细胞数逐渐减少。结论 采用单针道双靶点注射Lactacystin能成功建立临床症状和病理特征均符合PD要求的大鼠模型。     

《实验动物学》教学实践

实验动物学的基础理论和实验操作是医学类院校学生必须具备的基础知识和基本技能。针对学生的实际情况,本文对课程专业设置、教材选择、师资队伍建设、课程考核等方面进行了探讨。注重理论与实践相结合,同时特别强调学生科研综合素质的培养。在课程建设中,课程教师争取不断完善课程建设体系,努力提高教学质量。