甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭迁移的影响及其机制研究

摘要：目的 检测甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭转移的影响并探讨其机制。方法 应用Western blot、免疫组 化以及 Real-time PCR 等方法检测 37 例肝癌及对应癌旁组织标本中 SETDB2 蛋白及 mRNA 表达情况。将靶向 SETDB2 的短发卡 RNA（sh-SETDB2）和空载体（sh-NC）分别转染至人肝癌 MHCC97H 细胞构建稳转细胞系,应用 Tanswell侵袭实验、细胞划痕实验检测2组细胞的侵袭和迁移能力。通过基因芯片检测敲低SETDB2后表达有变化 的基因。敲低SETDB2后,运用Real-time PCR检测PTEN的mRNA的表达变化以及Western blot检测PTEN和组蛋白 H3第9位赖氨酸的三甲基化（H3K9me3）的表达变化,CHIP 检测H3K9me3在PTEN 的启动子区域的变化。在敲低 SETDB2的同时敲低PTEN的表达,Tanswell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 （1）Western blot和Real-time PCR的结果均表明肝癌组织中SETDB2蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织;SETDB2表达的高低与肝癌组织学 分级和TNM分期有关。（2）转染sh-SETDB2的MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力均明显低于sh-NC组。（3）基因芯 片、Western blot以及Real-time PCR等实验结果显示敲低SETDB2后PTEN表达上调。（4）在敲低SETDB2后H3K9me3 表达下调,PTEN启动子区域的H3K9me3减少。（5）与敲低SETDB1组相比,敲低SETDB2的同时敲低PTEN后细胞的 侵袭能力恢复。结论 SETDB2通过下调PTEN的表达促进肝癌细胞的侵袭迁移。     

Sebastian综合征四例

Sebastian综合征 (Sebastianplateletsyndrome ,SBS)是一种少见的常染色体显性遗传性疾病。我们发现一个家系中 4人同患SBS ,并对其中性粒细胞包涵体的超微结构进行了观察 ,报道如下。例 1,先证者 ,女 ,4 6岁 ,已婚 ,教师。因皮肤反复出现瘀斑 ,牙龈出血 18年。 1990年在当地医院诊断为特发性血小板减少性紫癜 (ITP)。以泼尼松、血康等治疗 1个月 ,无明显疗效。之后数年BPC为 (30～ 5 0 )× 10 9 L。 2 0 0 3年 4月患者因双下肢、躯干出现瘀点、瘀斑而入我院治疗。查体 :贫血外貌 ,全身皮肤黏膜无黄染 ,浅表淋巴结未触及 ,心、肺正常 …     

遗传性Sebastian综合征1例家系调查并文献复习

遗传性Sebastian综合征（hereditary Sebastian syndrome．SBS）是一种遗传性出血性疾病，临床较为少见，易误诊为特发性血小板减少性紫癜（ITP）。为了便于临床医师更好地认识该病，我们报道1例SBS患者以及对其家系调查．并复习相关文献如下。     

转染慢性粒细胞白血病总RNA对树突状细胞介导的抗白血病作用的体外研究

目的体外诱导和鉴定慢性粒细胞白血病-树突状细胞（CML—DC）,并探讨人慢性粒细胞白血病（CML）总RNA体外转染对其介导的特异性细胞毒T淋巴细胞（CTLl对慢性粒细胞白血病细胞杀伤作用的影响。方法分离14例CML患者骨髓单个核细胞．加入rhIL-4、rhGbl—CSF、rhTNF-α诱导培养CML—DC。分别于培养第1、3、6、14d用倒置显微镜进行形态学观察．流式细胞术检测免疫学表型,染色体G显带技术检测其染色体核型,逆转录聚合酶链反应（RT—PCRIl检测bcr—abl融合基因。并于CML-DC培养第5d,加人CML细胞总RNA脂质体转染,或裸总RNA转染,或不加任何试剂继续培养的DC,共三种CML—DC．分别致敏T淋巴细胞．另设以IL-2培养的T淋巴细胞为对照组,比较不同组别的致敏T淋巴细胞的杀伤活性。结果CML骨髓单个核细胞诱导前CDlct、CD83表达均在5％以下。而诱导成熟的CML—DC细胞CDla、CD83阳性表达率分别为20．13~3．43％、26．76＋2．79％,较诱导前均明显增高（P〈0．01）。CML-DC细胞均存在Phl染色体,并表达bcr-abl融合基因。总RNA脂质体转染CML—DC、裸总RNA转染CML—DC、单纯CML—DC分别致敏的T淋巴细胞在效：靶比为20：1时对CML单个核细胞的杀伤效率分别为75．33±3．11％、37．23±2．92％、29．62±1．61％,均明显高于对照组f9．87＋3．43％,P〈0．01）。总RNA脂质体转染的CML—DC所诱导的CTL杀伤活性最强．与后三组杀伤活性均有显著性差异（P〈0．001）。结论CML—DC既具有CML白血病源性．又具有DC细胞的特性,并能诱导特异性CTL杀伤白血病细胞。经脂质体转染CML细胞总RNA可以提高CML-DC介导的CTL特异性杀伤慢性粒细胞白血病细胞。     

急性白血病化疗前后细胞形态计量学分析

目的 :探讨急性白血病 (AL)化疗前后细胞形态学参数及临床意义。方法 :用细胞形态计量学方法 ,利用普通光镜手工测试急性白血病化疗前后白血病细胞长轴 (CL)、短轴 (CS)、核长轴 (NL)、短轴 (NS) ,换算出细胞平均轴(CM)、细胞面积 (CA)、核平均轴 (NM)、核面积 (NA)及核面积与细胞面积之比 (NA/CA)共 9个参数 ,并结合临床疗效与预后进行分析。结果 :急性髓性白血病 (AML)化疗后细胞形态参数值均增大 ,AML、M3 、M4 、M5型化疗后增大更明显。急性淋巴白血病 (ALL)化疗前后细胞形态参数值无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :化学治疗能改变AML的形态参数且有预后意义 ;而不能改变本组ALL的形态计量值     

血液学检验教学中开展设计性实验的探索与思考

设计性实验是学生根据特定目的和要求，运用所掌握的理论知识和实验技能，对实验的材料、手段、方法、步骤等进行设计和准备，并最后完成正式实验。通过设计性实验，可以培养学生全面运用知识的能力、动手操作的能力、独立解决及处理问题的能力。探讨在临床血液学检验课程教学中开展设计性实验，并对其在实验教学中的效果进行评价。     

遗传性Sebastian综合征1例家系调查并文献复习

遗传性Sebastian综合征（hereditary Sebastian syndrome．SBS）是一种遗传性出血性疾病，临床较为少见，易误诊为特发性血小板减少性紫癜（ITP）。为了便于临床医师更好地认识该病，我们报道1例SBS患者以及对其家系调查．并复习相关文献如下。     

应用rhIL-11治疗急性淋巴细胞白血病化疗相关性血小板减少的疗效观察

目的观察重组人白介素-11（rhIL-11）对急性淋巴细胞白血病化疗后血小板恢复的影响及其不良反应。方法60例接受化疗的急性淋巴细胞白血病患者随机分为rhIL-11治疗组和对照组。rhIL-11治疗组患者在血小板〈60×10^9/L时给予rhIL-1150μg/kg·d,皮下注射,当血小板≥70×10^9/L时停药或按药物说明最长用药时间14d;对照组患者仅接受对症支持治疗。期间观察外周血小板计数变化、血小板升至≥70×10^9/L所需的时间以及药物的毒副反应。结果rhIL-11治疗组患者血小板从最低点恢复至〉70×10^9/L的平均时间为6d,对照组平均为11d,后者较治疗组延长5d（P〈0.01）。实验组在治疗过程中10例患者共输注血小板悬液11个治疗量,而对照组有19例输注血小板,共输注血小板悬液25个治疗量,实验组与对照组相比同期血小板输注量明显减少,差异具有统计学意义（P〈0.001）。实验组用药前后肝肾功能及凝血功能无明显改变,仅有1例出现感冒样症状,2例出现轻度水肿和血压升高。结论急性淋巴细胞白血病化疗后应用rhIL-11有加速血小板恢复的作用,且该药安全、耐受性好。     

骨髓增生异常综合征患者循环microRNA-144的检测及其临床意义

目的探讨mi RNA-144在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法收集MDS患者24例,健康对照12例,q RT-PCR检测外周血mi RNA-144相对表达量,统计分析mi RNA-144在MDS中的表达情况及与其预后相关性。结果 mi RNA-144在MDS亚型难治性血细胞减少伴单系病态造血(RCUD)、难治性血细胞减少伴多系病态造血(RCMD)、难治性贫血伴环形铁粒幼细胞(RARS)、难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)及难治性贫血伴原始细胞增多-2(RAEB-2)中的相对表达量分别为3.81、3.64、4.56、6.49及8.73,均显著高于健康对照组,P<0.01;mi RNA-144在预后好和预后差组中的相对表达量分别为3.81和7.18,差异具有统计学意义,P<0.01。结论 mi RNA-144在MDS中高表达,且可作为潜在的预后评估指标。     

幽门螺杆菌感染在特发性血小板减少性紫癜中的临床意义

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)在特发性血小板减少性紫瘢(ITP)患者的感染情况、Hp感染与ITP患者临床特点的相关性及针对Hp感染的ITP患者采用糖皮质激素联合根治性Hp治疗的临床疗效。方法对ITP患者57例及正常对照30例采用14 C-尿素呼气试验(14 C-UBT)和抗Hp抗体IgG(Hp-IgG)检测确定是否合并Hp感染,阳性组和阴性组分别采用糖皮质激素联合根治性Hp治疗和单用糖皮质激素治疗,观察血小板数、T细胞亚群变化,并进行疗效比较。结果 ITP患者Hp感染率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性组和阴性组平均年龄、骨髓巨核细胞数、临床表现比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前T细胞亚群比例均有不同程度的失调,且阳性组CD3+CD4+百分比及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值降低、CD3+CD8+百分比升高分别较阴性组明显。Hp根除治疗成功率为82.50%(33/40)。根除Hp成功组平均血小板计数上升及升高幅度、T细胞亚群失调改善及改善幅度均高于根除Hp失败组和阴性组(P<0.05)。阳性组有效率高于阴性组(P<0.05)。治疗后14 C-UBT检测与临床疗效相符,而Hp-IgG检测与临床疗效不完全相符。结论 ITP患者Hp感染率高于正常人群。Hp阳性组患者平均年龄及骨髓巨核细胞代偿性增生程度高于阴性组,ITP患者T细胞亚群比例均有不同程度失调。糖皮质激素联合根治性Hp治疗有助于阳性组患者血小板数的提升及T细胞亚群比例失常的改善。14 C-UBT和Hp-IgG是两种简便的非侵入性Hp的检测方法,需根据不同特点用于临床。