表型少见的慢性T淋巴细胞增殖性疾病2例报告

慢性T-淋巴细胞增殖性疾病在临床实践中较少遇见，其中的少见表型和变异型更是罕见。现报告1例CD4＋CD8-的大颗粒淋巴细胞白血病，1例由T慢性淋巴细胞白血病／小淋巴细胞性淋巴瘤转化的T-幼淋白血病，结合文献就其诊治进行讨论，以提高临床医生对该类疾病的了解和认识。     

系统性红斑狼疮患者CD4+T淋巴细胞CD45RO/CD45RA的表达

目的：检测系统性红斑狼疮患者CD4^ T辅助淋巴细胞CD45RO和CD45RA亚群的变化及临床意义。方法：用流式细胞术检测了8例活动期SLE患者CD4^ T辅助细胞CD45RO、CD45RA的表达率，并与对照组进行了比较。结果：SLE患者CD4^ T辅助淋巴细胞CD45RO的表达率与对照组无显著性差异（59．30％vs.59.74%),CD45RA下降（21．40％vs.31.64%),CD45RD、CD45RA双阳性T辅助淋巴细胞显著增高（18．57％vs.7.92%)。结论：SLE患者体内CD45RA^ T辅助淋巴细胞被激活，向CD45RO^ 细胞转化。CD45RA^ T辅助细胞的减少是导致机体免疫功能失去平衡的重要原因。     

心肌梗塞患者单核细胞-血小板聚合率的检测

目的建立流式细胞术检测循环全血中单核细胞与血小板聚合率的方法。方法全血与CD14-FITC和CD61-PE单克隆抗体共同孵育15min，加溶血素溶解红细胞，洗涤后用流式细胞仪检测。以CD14区分出单核细胞，检测单核细胞中CD61的表达率。CD14和CD61双阳性的细胞是单核细胞与血小板聚合物。结果心肌梗塞组循环全血中单核细胞－血小板聚合率为25.8±8.3％，显著高于正常对照组6.2±3.5％。结论流式细胞术可用于检测全血中单核细胞－血小板聚合率。单核细胞－血小板聚合率的检测对心肌梗塞患者具有一定的诊断价值。     

CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用

目的观察CpG-ODN 2006和CpG-ODN 2216对健康人外周血单个核细胞中B淋巴细胞抗原递呈相关分子MHC-I、MHC-Ⅱ及共刺激分子CD 80、CD 86表达的影响,探讨CpG-ODN对B淋巴细胞抗原递呈功能的作用。方法CpG-ODN 2006、CpG-ODN 2216与健康人PBM C共培养48 h,用流式细胞技术以CD 19-P reCP“设门”其中B淋巴细胞,检测其表面CD 69、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD 80及CD 86的表达状况,并与未加CpG-ODN组进行比较。B淋巴细胞MHC-I、MHC-Ⅱ的表达量以几何平均荧光强度表示(M F I);CD 80、CD 86的表达量以阳性细胞百分率表示。结果CpD-ODN 2006和CpG-ODN 2216均显著提高B淋巴细胞CD 69、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD 80及CD 86的表达,与未加CpG-ODN组比较有显著性差异(P<0.05)。CpG-ODN 2216使B淋巴细胞表面抗原递呈相关分子的增加量更为明显。结论CpG-ODN能够提高B淋巴细胞表面抗原递呈相关分子和共刺激分子的表达,能增强B淋巴细胞递呈抗原的能力。     

体外诱导小鼠骨髓干细胞转化为肝细胞的实验研究

目的模拟体内肝脏发生发育的环境和条件，建立以细胞因子为主的体外诱导培养体系，探讨骨髓干细胞体外转化肝细胞的可行性。方法获取小鼠骨髓干细胞，建立以细胞因子为细胞诱导的培养体系。在细胞培养过程中，观察细胞形态和数量，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝细胞特异性基因的表达。Western blot和流式细胞仪检测ALB和CK18在蛋白水平的表达情况。糖元染色法行细胞糖原染色、尿素合成试验检测细胞的合成和代谢功能。结果在诱导培养12d，可以观察到多极性的肝细胞样细胞。且细胞逐渐增多、集落不断增大。诱导细胞在培养7d开始表达AFP mRNA并维持到第21天。此后表达逐渐减弱；培养7天开始表达ALB mRNA和CK18 mRNA。随着培养时间的延长表达不断增强；培养14d开始表达TTR mRNA，随着培养时间的延长表达不断增强。通过Western blot检测，诱导21d的细胞表达ALB和CK18蛋白，流式细胞术分析ALB阳性细胞的比例为60．45％，CK18阳性细胞的比例为67％。诱导培养21d，细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒；诱导培养6d，细胞开始合成尿素，尿素合成功能随诱导时间的延长而增强，于第15天达到高峰。结论我们建立的以细胞因子FGF、HGF、OSM、EGF为主的细胞诱导培养体系能促使骨髓干细胞定向转化为肝细胞。     

造血干细胞移植中CD34+细胞最佳分选的应用效果评价

目的探讨联合化疗加细胞因子动员自体外周血CD34+细胞的采集及临床级磁性分选仪(CliniMACS)分选的最佳方法,评价分选后CD34+细胞在造血干细胞移植中的应用效果.方法2001-03/2002-01在南京市鼓楼医院血液科病房收治自身免疫性疾病患者9例.符合纳入标准患者9例,男3例,女6例.采用环磷酰胺[2～4 g/(m2·d)]+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)[5～10 μg/(kg·d)]作为动员剂,CS-3000Plus血细胞分离机采集外周血单个核样细胞,CliniMACS作CD34+细胞分选,观察分选前后的细胞计数、纯度、细胞活力,流式细胞术进行细胞表型检测及粒巨细胞集落形成单位(CFU-GM)培养.计算CD34+细胞的采集得率和分选回收率.观察CD34+细胞移植后造血功能恢复的情况.结果经环磷酰胺加G-CSF动员后,采集时机多以一次采集能够获得足够数量的CD34+细胞(CliniMACS分选和冷冻保存的耗损计算在内)为原则,外周血白细胞总数＞6×109 L-1或CD34+细胞＞0.4%时开始采集,其中8例采集1次,1例采集2次.每例患者可获单个核样细胞(MNC)总数(0.924～5.360)×1010,MNC(2.6～19.5)×108/kg,CD34+细胞(2.4～37.2)×106/kg,经CliniMACS系统分选后,CD34+细胞回收率为51%～93%,平均回收率为87%,CFU-GM回收率为35%～62%.CD34+细胞纯度为94.3%～98.4%,平均96.71%.CD3+,CD19+,CD56+,CD14+细胞去除2～4个对数级.经冰冻保存后的CD34+细胞的回收率为78%～99%,CFU-GM回收率为82%～99%,实际回输CD34+细胞为(2.0～8.3)×106/kg,移植后均获造血重建.结论掌握最佳动员、采集及分选方法,CD34+细胞可获较高产率,移植后造血功能恢复较快.     

网织血小板检测在血小板减少性疾病诊断中的意义

网织血小板(ＲＰ)检测对血小板减少性疾病的病因分析具有重要意义,同时也是判断骨髓移植后造血功能恢复的良好指标之一。骨髓巨核细胞数量与ＲＰ密切相关,巨核细胞增加或正常者,ＲＰ显著升高;而巨核细胞减低组,ＢＰ下降或正常。因此,临床中主要用ＲＰ循证血小板减少的病因。２００１年６     

长期液氮保存PBSC细胞凋亡及死亡检测

目的比较外周血干细胞（peripheral blood stem cell，PBSC）采集物中有核细胞经长期深低温保存后细胞凋亡及死亡率与新鲜采集物的差异，便于对PBSC进行活力评价。方法47份外周血干细胞采集物标本，新鲜对照标本12份，实验Ⅰ组为液氮保存2～4年的PBSC26份，实验Ⅱ组为液氮保存5～7年的PBSC9份，以流式细胞仪检测各组有核细胞中核酸染料7AAD着色的细胞百分比（代表死亡率），以及有核细胞中表达活化的caspase-3的细胞百分比（代表凋亡率）。结果两实验组的细胞死亡率和凋亡率均高于对照组（P〈0．05），实验Ⅱ组凋亡率为35．6％±17．51％，与实验Ⅰ组（24．14％±16．87％）的差异有显著性（P=0．031）。结论深低温保存2～7年的PBSC采集物中有核细胞活性较新鲜PBSC采集物低，凋亡率及死亡率升高。     

兔脑组织凝血活素的提取及临床应用

组织因子(tissue factor,TF.factor Ⅲ,tissue thromboplastin,)是膜结合脂依赖糖蛋白,能与凝血因子Ⅶ形成复合物,显著提高因子Ⅶ和Ⅶ_a 对因子Ⅹ和Ⅸ的活化能力.Bach 和pitlick 纯化了牛脑TF.我们参照他们的方法提取了兔脑TF.方法是先用Triton X-100使膜结合的TF 溶解,再以ConA-Sepharose 亲和层析,得到比较纯的组织因子脱辅基蛋白(tissue factor apoprotein),将它与磷脂再脂化(relipidation)后,即为具有高促凝血活性的组织凝血活素。我们用经此提取的组织凝血活素与兔脑粉浸液、人脑粉浸液及Simplastin 进行了比较,证明组织凝血活素对凝血酶原时间(PT)异常标本检出的敏感性优于兔脑粉及人脑粉,与Simplastin 相似。