人源抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体的构建

目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZ-αB/ScFv-IFN-α。方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115 ,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS PAGE分析鉴定表达产物。结果DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS PAGE结果显示在相对分子质量约4 4 0 0 0处可见目的蛋白质表达带。结论成功构建了抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体     

皮脂腺细胞体外培养及生长调节的研究进展

皮脂腺是皮肤重要的附属器。皮脂腺体外培养模型的建立为研究相关因子如细胞因子、生长激素及药物等对皮脂腺形态功能、生长发育及病理改变的作用提供了良好的平台。本文对皮脂腺细胞体外培养的实验方法、体外生长特性及影响皮脂腺细胞增殖分化的相关因素作简要综述。     

人表皮发生的机制研究：C／EBP在调控体内外角质形成细胞分化中的作用

目的：探讨CCAAT／增强子结合蛋白(CCAAT／enhancer binding protein，C／EBP)参与表皮角质形成细胞分化调控的作用。方法：①应用免疫组化的方法检测胚胎表皮中C／EBP的表达情况；②通过调节培养的鼠表皮角质形成细胞培养基中钙离子浓度，在不同时间段应用免疫细胞化学检测C／EBPα和C／EBPβ的表达情况。结果：C／EBPα和C／EBPβ主要表达在胚胎期表皮棘层、颗粒层和角质层细胞的胞核内。在培养的角质形成细胞胞核中随分化进行表达增强。结论：说明C／EBP参与表皮角质形成细胞分化调控。     

人源性抗HBsAg噬菌体抗体的筛选及纯化

目的:获得人源性抗HBsAg抗体Fab片段。方法:用预包被HBsAg的ELISA板,从构建的人全套抗体库中筛选出针对HBsAg的噬菌体抗体。并转入大肠杆菌中表达。破裂细胞后,获得可溶性Fab片段。以羊抗人Fab抗体偶联HiTrap柱,用     

预处理的迟发性保护作用

缺血预处理诱发迟发性保护作用发生于预处理后24～72h。腺苷和NO可能是两种独立的保护作用启动因子。通过激活PKC酶、酪氨酸激酶和p38MAP酶，促使HSP27、Mn—SOD等蛋白合成及磷酸化，最终发生迟发性保护效应。KATP是缺血预处理迟发性保护作用的重要中心环节，但其相关机制还不十分清楚。     

人表皮发生的机制研究:C/EBP在调控体内外角质形成细胞分化中的作用

目的:探讨CCAAT/增强子结合蛋白(CCAAT/enhancerbindingprotein,C/EBP)参与表皮角质形成细胞分化调控的作用。方法:①应用免疫组化的方法检测胚胎表皮中C/EBP的表达情况;②通过调节培养的鼠表皮角质形成细胞培养基中钙离子浓度,在不同时间段应用免疫细胞化学检测C/EBPα和C/EBPβ的表达情况。结果:C/EBPα和C/EBPβ主要表达在胚胎期表皮棘层、颗粒层和角质层细胞的胞核内。在培养的角质形成细胞胞核中随分化进行表达增强。结论:说明C/EBP参与表皮角质形成细胞分化调控。     

Survivin对辐射损伤的影响及与caspase-9/6、3的关系

目的观察survivin对辐射损伤的影响及与caspase-9/6、3的关系.方法①将IEC-6细胞放置于2%O2环境中低氧8 h后,复氧24、48h,采用Western-blot检测胞内survivin;②给予不同实验组IEC-6细胞35Gy60Co辐射照射,采用细胞流式PI法检测细胞凋亡率,并使用荧光免疫检测试剂盒检测各组caspase-9/6、3活性.结果低氧预处理方法可诱导IEC-6细胞表达survivin,Survivin可明显降低辐射诱导的细胞凋亡率(P＜0.01),其对caspase-9/6活性无明显影响(P＞0.05),可使caspase-3活性有明显下降(P＜0.01).结论低氧预处理方法诱导的抗凋亡蛋白survivin是通过抑制caspase-3的活性,达到抑制辐射诱导的细胞凋亡的目的.     

重组人源抗HBsAg单链抗体的纯化及亲和常数测定

目的:对融合6×His标签的人源抗乙型肝炎表面抗原单链抗体的包涵体进行纯化和复性, 并对复性产物的抗原结合性质进行鉴定。方法:工程菌表达的包涵体裂解后, 金属螯合亲合层析纯化, 然后以尿素透析、盐酸胍透析和金属螯合亲和层析柱原位复性3种方法进行复性;复性产物以免疫亲和层析精制, 非竞争酶免疫法测定亲和常数结果:盐酸胍透析复性产物的比活性最高, 蛋白回收率为(61.08±1.45)%;精制后的重组单链抗体的亲和常数为(2.30±0.32)×10⁷L/mol.结论:本株单链抗体可以应用优化的透析复性技术, 在体外高效复性, 其抗原结合性质不受N末端纯化标签的影响。     

预处理的迟发性保护作用

缺血预处理诱发迟发性保护作用发生于预处理后 2 4～ 72 h。腺苷和 NO可能是两种独立的保护作用启动因子。通过激活 PKC酶、酪氨酸激酶和 p38MAP酶 ,促使 HSP 2 7、Mn- SOD等蛋白合成及磷酸化 ,最终发生迟发性保护效应。 KATP是缺血预处理迟发性保护作用的重要中心环节 ,但其相关机制还不十分清楚     

抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定

应用重叠ＰＣＲ自人源性ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段中扩增出ＶＨ、ＶＬ 基因 ,以 (Ｇｌｙ4 Ｓｅｒ3)ｌｉｎｋｅｒ连接成单链抗体 ,插入表达载体ｐＱＥ 4 0 ,在大肠杆菌内获得包涵体表达。工程菌表达优化试验表明 ,在Ａ60 0 为 0 .6时开始诱导 ,持续 6ｈ ,目的蛋白表达量最高 ,达菌体总蛋白 34 .2 %。包涵体变性后以金属镍螯合柱一步纯化 ,目的峰透析复性 ,得到纯度为 97%的具有结合ＨＢｓＡｇ活性的重组单链抗体。抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定@任向荣!510602$广州解放军第四五八医院全军传染病中心 @熊盛$华南理工大学…