铜绿假单胞菌外排泵MexA蛋白原核表达纯化

目的 构建MexA原核表达载体,并实现MexA原核表达、纯化.方法 从多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA,经PCR扩增出mexA1基因与PUC18克隆载体连接,PCR、酶切及测序鉴定,再经PCR扩增出mexA基因,酶切纯化后克隆到原核表达载体PQE30,构建重组表达载体PQE30/mexA,PCR及酶切鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot检测有无蛋白的表达.结果 已获得长约1.5kb PCR产物,酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了mexA基因,序列分析结果与PA01mexA序列相同.SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量40kDa处有表达条带,诱导表达之菌体,超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在.结论 获得mexA基因,并在E.coliM15中成功表达.融合蛋白纯化后作免疫原,为制备多克隆抗体打下基础.     

定量RT-PCR检测多药耐药铜绿假单胞菌中MexAB-OprM外排泵

铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)所涉及耐药机制相当复杂,包括抗生素灭活酶或修饰酶的生成、外膜低渗透性、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成和主动外排等[1].近年来的研究发现,铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)内存在着多种主动外排系统[2],MexAB-OprM是在PA中发现的第一个RND家族外排系统,在PA对多种β-内酰胺类抗生素(包括碳青霉烯类)的固有耐药机制中发挥重要作用,MexAB-OprM是迄今为止最具有临床意义的药物外排系统.本研究用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测临床分离鉴定的多药耐药和敏感铜绿假单胞菌中外排泵MexAB-OprmM mRNA的表达量.     

五种血清肿瘤标志物对肺癌的诊断价值

目的 探讨血清癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA）199、CA125、细胞角蛋白19片段（CYFRA211）及甲胎蛋白（AFP）对肺癌的诊断价值。方法 选择2018年5月至2020年5月医院收治的82例肺癌患者为试验组（TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例,Ⅲ期20例,Ⅳ期19例）,另选择同期收治的82例肺部良性疾病患者为对照组,比较两组及试验组不同TNM分期肺癌患者的血清CEA、CA199、CA125、CYFRA211及AFP水平差异,分析各血清肿瘤标志物单一与联合检测对肺癌的诊断价值。结果 试验组各肿瘤标志物水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;Ⅳ期肺癌患者的各肿瘤标志物水平高于Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ期患者,且Ⅲ期患者高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异均有统计学意义（P<0.05）;联合检测对肺癌的诊断灵敏度、准确度均高于各项单一检测,特异度高于CEA、CA199、AFP单一检测,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 血清CEA、CA199、CA125、CYFRA211及AFP水平与肺癌的TNM分期密切相关,联合检测能够提高诊断效能。