利用基因芯片技术筛查腮腺多形性腺瘤差异表达基因的研究

目的:研究腮腺多形性腺瘤和瘤旁组织中差异表达的基因。方法:分别从5例腮腺多形性腺瘤组织和与其相对应的瘤旁组织中提取总RNA并纯化为mRNA,两种不同组织的mRNA分别逆转录合成有荧光分子标记的探针,然后与Agilent人全基因组芯片进行杂交,杂交信号用Agilent扫描仪扫描,结果用ImgGene 3.0软件分析。结果:腮腺多形性腺瘤和瘤旁组织有差异表达的基因447个,其中表达上调185个,下调262个。结论:运用基因表达谱芯片可以筛选出腮腺多形性腺瘤相关基因。     

BMSC/β-TCP修复犬下颌骨缺损的实验研究

目的:通过动物实验探索β-磷酸三钙(β-TCP)复合组织工程骨应用于颌骨缺损修复的可行性。方法:3只杂交犬的双侧下颌骨人工制备3 cm×1 cm×1 cm缺损后,采用自体对照实验方法。实验侧植入骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物(BMSC/β-TCP),对照侧仅植入β-TCP,在植入后均使用四环素荧光标记。分别于术后1、3、6个月进行CT扫描,之后处死实验犬,制备组织标本,进行HE染色、苦味酸品红染色、四环素荧光检测,并加以评价。对分析数据结果使用SAS 6.0进行统计学分析,P<0.05为有统计学意义。结果:BMSC/β-TCP修复犬颌骨缺损,有大量的编织骨生成;对照组虽然在6个月后也有一定量的骨质形成,但未见到编织骨。四环素标记结果显示,实验组术后6个月,骨质形成速率较对照组高;对照组在最初的3个月,骨质形成明显比实验组低。在第3～6个月期间,实验组和对照组骨质形成均明显加快。结论:BMSC/β-TCP修复犬的颌骨缺损可以形成质量较高的板层骨,而单纯β-磷酸三钙所形成的骨质纤维较紊乱,哈弗氏骨管的数量也较少。     

犬自体血清培养骨髓基质细胞的实验研究

目的:探讨犬自体血清培养骨髓基质细胞的可行性方法:获取犬自体血清,配制成含10%和20%自体血清的培养液,与含10%胎牛血清的培养液在相同条件下培养犬骨髓基质细胞(BMSCs)。通过倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数以及MTT法对细胞增殖情况进行检测。并且对第2代细胞用3种不同血清成分培养液(均加入β-甘油磷酸钠、抗坏血酸及地塞米松)进行成骨诱导分化,采用免疫组化检测碱性磷酸酶及钙结节形成。对检测到的量化数据做统计学分析,比较各组间的差异,以评价不同血清成分培养液对细胞增殖分化的影响。结果:3组细胞的生长及形态无明显差别,经过诱导培养均能形成钙结节。对3组间量化检测做统计学分析,各组间差异无统计学意义。结论:制备的犬自体血清能完全替代胎牛血清对骨髓基质细胞进行诱导培养。     

PLGA/HA支架材料生物相容性的动物实验研究

目的:通过动物实验评价新型多孔聚乳酸乙醇酸/羟基磷灰石(polyaiticglycolic acid/hydroxyapatite,PLGA/HA)支架材料的生物相容性。方法:分别将5%和10%HA掺量的PLGA/HA支架材料注射到昆明小鼠腹腔内、植入到新西兰大白兔体内,选择全身毒性试验、亚急性毒性试验、血液相容性试验、肌肉刺激试验等,对其生物相容性进行评价。结果:全身急慢性毒性试验显示材料种植到小鼠及兔子体内后,动物一般情况良好,2周后体重、红细胞计数、白细胞计数等生理参数未见明显变化;实验显示两种材料对兔混合血浆凝血功能无影响;溶血试验结果显示5%和10%的PLGA/HA的溶血率分别为2.67%和3.62%,均小于5%,完全符合医用材料对溶血试验的要求;肌肉刺激试验结果显示两种材料埋植后局部未见红肿,4周时部分PLGA/HA材料开始降解,降解部分有大量的纤维结缔组织生长;HE染色结果显示PLGA/HA基本不存在抗原性,植入机体4周后,材料周围未见明显炎症细胞浸润。结论:5%和10%HA掺量的PLGA/HA均具有良好的生物相容性和体内安全性。     

尼妥珠单抗联合PF方案治疗舌鳞状细胞癌的临床研究

目的探究尼妥珠单抗注射液联合PF方案治疗舌鳞状细胞癌的临床研究。方法选取2010年3月—2017年4月郑州大学附属郑州中心医院口腔颌面科收治的舌鳞状细胞癌患者60例为研究对象,根据其自愿选择的术后化疗方法不同分为对照组和治疗组,每组各30例。对照组采用PF化疗方案,第1天静脉滴注注射用顺铂20 mg/m~2;第1~5天静脉滴注复方氟尿嘧啶注射液750 mg/m~2。治疗组在对照组治疗基础上第1天静脉滴注尼妥珠单抗注射液400 mg。3周为1个疗程,两组患者均连续治疗2个疗程。观察两组的临床疗效,比较两组的生存质量和血清因子水平。结果治疗后,对照组和治疗组的总缓解率分别为63.33%、86.67%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,对照组和治疗组的生存质量改善率分别为63.33%、80.00%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、血管内皮生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)水平均明显下降,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组血清因子水平明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论尼妥珠单抗注射液联合PF方案治疗舌鳞状细胞癌具有较好的临床疗效,可改善患者生活质量,降低外周血中Cyclin D1、VEGF、BCL-2水平,安全性较好,具有一定的临床推广应用价值。     

新型多孔PLGA/HA复合支架体外细胞相容性的实验研究

目的研究新型多孔聚乳酸乙醇酸／羟基磷灰石（PLGA/HA）支架材料的体外细胞相容性。方法采用贴壁法对兔骨髓基质细胞（BMSCs）进行体外矿化诱导培养，扩增后与实验A组（含5％HA的PLGA／HA），实验B组（含10％HA的PLGA／HA）及对照C组（仅含PLGA）分别进行体外复合培养；并通过定性及定量法检测BMSCs在材料表面的粘附能力、增殖活力，验证细胞材料复合体的成骨活性。比较分析各组之间的差异。结果兔BMSCs在每组材料的表面均能生长，经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节，A、B组细胞的粘附及增殖能力均强于C组（P〈0．05），A、B组之间无差异。结论兔BMSCs与新型多孔PLGA／HA支架材料有良好的相容性。     

骨髓基质干细胞与β-TCP生物相容性的实验研究

目的:研究骨髓基质干细胞(BMSC)和生物陶瓷的生物相容性以及生物陶瓷对BMSC内钙离子的影响,为BMSC和支架材料联合应用修复颌骨缺损提供理论依据.方法:杂交犬4只,取各自的BMSC进行体外培养诱导,将经诱导培养的细胞和生物陶瓷结合后,检测细胞内钙离子的浓度和吸光度(OD)值,与2个对照组的实验数据进行比较.采用SAS8.0对数据进行统计学分析.结果:将经过体外成骨诱导形成的成骨样细胞(OBL)和支架材料结合后,细胞内的钙离子浓度显著增高,与对照组两两比较,存在显著性差异(P＜0.05).细胞增殖率检测结果显示,其生长速度较单纯OBL组和BMSC组加快.结论:BMSC具有多向分化潜能,经过成骨诱导后,表现出一定的成骨能力.BMSC和磷酸三钙结合后,表现出一定的增殖能力.     

热致相分离法制备聚（乳酸-乙醇酸）/羟基磷灰石复合骨组织工程支架材料的生物相容性

目的：观察热致相分离方法制备的聚（乳酸-乙醇酸）/羟基磷灰石复合骨组织工程支架的生物相容性,为其临床应用提供生物学依据. 方法：①采用热致相分离法制备聚（乳酸-乙醇酸）/羟基磷灰石复合组织工程支架,用扫描电镜观察支架的微观形貌,应用比重瓶法测定支架的孔隙率.②将兔骨髓基质细胞与多孔支架进行体外联合培养,观察和测定细胞在支架上的黏附率和生长情况.③将支架植入兔背部皮下组织,观察活体情况,并于第4周麻醉后处死动物,剖开植入材料部分肌肉,分别用肉眼和苏木精-伊红染色切片观察肌肉组织周围有无明显的炎症反应、有无组织生长. 结果：①支架的微观结构和孔隙率：支架的表面和内部都有着较均匀的孔径分布,孔径在100～150 μm,孔隙呈近圆形,孔壁上还存在着很多小孔,孔隙之间有着较好的连通性,羟基磷灰石掺量在5%时候复合支架的孔隙率能达到80%以上.②细胞黏附情况：细胞能在复合支架上黏附、增殖,4 h后材料的平均黏附率达到41.9%,体外培养7 d后,细胞在支架孔隙内黏附铺展.③体内植入实验结果：材料植入体内4周后取出,肌肉组织无明显的炎症反应,表现出很好的组织相容性. 结论：运用热致相分离的方法制备的聚（乳酸-乙醇酸）/羟基磷灰石复合骨组织工程支架孔径大小适当、孔隙率高,材料无明显毒性,具有较好的细胞亲和性和良好的生物相容性,具备了临床应用的前提.     

新型多孔HA/PDLLA支架体外细胞相容性的实验研究

目的:研究新型多孔羟基磷灰石/聚乳酸(HA/PDLLA)支架材料的体外细胞相容性。方法:贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),经体外矿化诱导培养、扩增后,与实验组 A(含2%HA 的 HA/PDLLA)、实验组 B(含4%HA 的 HA/PDLLA)及对照组(PDLLA)分别进行体外复合培养;并通过定性及定量检测细胞在材料表面的粘附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性,比较分析各组支架材料之间的差异。结果:兔 BMSCs在三组支架材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,实验组 A 与 B 细胞的粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)。结论:兔 BMSCs 与新型多孔 HA/PDLLA 支架材料有良好的细胞相容性。